| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-19页 |
| 1 重楼属植物概况 | 第11-13页 |
| ·重楼属植物的研究进展 | 第11页 |
| ·重楼的药理作用 | 第11-12页 |
| ·抗肿瘤作用 | 第11页 |
| ·止血作用 | 第11-12页 |
| ·免疫调节研究 | 第12页 |
| ·镇静镇痛研究 | 第12页 |
| ·心血管作用 | 第12页 |
| ·其他作用 | 第12页 |
| ·重楼属植株中含有的化学成分 | 第12-13页 |
| 2 重楼甾体皂苷的提取和HPLC检测 | 第13-15页 |
| ·重楼中甾体皂苷合成的研究进展 | 第13-15页 |
| ·重楼甾体皂苷与皂苷元的提取工艺 | 第15页 |
| ·HPLC法在重楼甾体皂苷检测中的应用 | 第15页 |
| 3 重楼属植株关键酶基因的克隆与原核表达 | 第15-17页 |
| ·重楼甾体皂苷合成途径中关键酶基因的研究进展 | 第15-17页 |
| ·原核表达载体的构建及表达条件优化 | 第17页 |
| 4 本研究的目的、意义与思路 | 第17-19页 |
| ·本实验的目的与意义 | 第17-18页 |
| ·本实验的主要内容与思路 | 第18-19页 |
| 第二章 重楼根、茎、叶和果实中药用成分分析 | 第19-35页 |
| 1 引言 | 第19页 |
| 2 材料 | 第19-20页 |
| ·材料与试剂 | 第19-20页 |
| ·材料 | 第19页 |
| ·试剂 | 第19-20页 |
| ·主要仪器与设备 | 第20页 |
| 3 方法 | 第20-22页 |
| ·甾体皂苷的提取与检测 | 第20-21页 |
| ·不同提取甾体皂苷方法的比较 | 第20页 |
| ·提取重楼中的甾体皂苷 | 第20页 |
| ·色谱条件的优化 | 第20页 |
| ·HPLC检测重楼甾体皂苷 | 第20页 |
| ·标准品溶液的制备及线性关系考察 | 第20-21页 |
| ·线性关系考察 | 第21页 |
| ·色谱仪的精密度和稳定性分析 | 第21页 |
| ·重复性和回收率实验 | 第21页 |
| ·薯蓣皂苷元的提取与检测 | 第21-22页 |
| ·供试品溶液的制备 | 第21页 |
| ·色谱条件 | 第21页 |
| ·标准品溶液的制备及线性关系考察 | 第21页 |
| ·色谱仪的精密度和稳定性考察 | 第21页 |
| ·重复性和回收率实验 | 第21-22页 |
| 4 结果与讨论 | 第22-34页 |
| ·四种重楼不同部位重楼皂苷I、II、VI、VII含量的检测 | 第22-30页 |
| ·甾体皂苷提取方法的选取 | 第22页 |
| ·HPLC检测重楼中甾体皂苷色谱条件的优化 | 第22页 |
| ·四种重楼皂苷标准品的HPLC检测及标准曲线的制备 | 第22-24页 |
| ·色谱仪的精密度和稳定性分析 | 第24页 |
| ·重复性和回收率实验 | 第24页 |
| ·样品含量测定与分析 | 第24-30页 |
| ·四种重楼不同部位薯蓣皂苷及皂苷元含量的检测 | 第30-34页 |
| ·薯蓣皂苷标准品及标准曲线的制备 | 第30页 |
| ·HPLC检测样品薯蓣皂苷的含量 | 第30-31页 |
| ·薯蓣皂苷元标准品HPLC谱图和标准曲线的制备 | 第31页 |
| ·精密度和稳定实验 | 第31页 |
| ·重复性和回收率实验 | 第31-32页 |
| ·HPLC检测样品薯蓣皂苷元的含量 | 第32-34页 |
| 5 结论 | 第34-35页 |
| 第三章 华重楼关键酶SQS基因的克隆与原核表达 | 第35-55页 |
| 1 引言 | 第35页 |
| 2 材料与试剂 | 第35-36页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35-36页 |
| ·培养基 | 第36页 |
| 3 主要仪器设备 | 第36页 |
| 4 方法 | 第36-43页 |
| ·华重楼SQS基因的克隆 | 第36-39页 |
| ·华重楼种子快繁 | 第36页 |
| ·华重楼叶片总RNA的提取及RNA浓度测定 | 第36页 |
| ·制备第一链cDNA | 第36-37页 |
| ·华重楼SQS基因ORF框序列的PCR扩增 | 第37页 |
| ·电泳及DNA片段回收 | 第37页 |
| ·目的片段与克隆载体的连接 | 第37-38页 |
| ·E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第38页 |
| ·连接产物的转化 | 第38页 |
| ·菌液PCR鉴定及测序 | 第38-39页 |
| ·生物信息学分析 | 第39页 |
| ·华重楼SQS基因的原核表达 | 第39-43页 |
| ·碱变性法提取华重楼质粒DNA | 第39-40页 |
| ·原核表达载体构建 | 第40-41页 |
| ·重组质粒在E.coliBl21中的表达 | 第41-43页 |
| ·SDS-PAGE | 第41-42页 |
| ·表达条件的优化 | 第42-43页 |
| 5.结果与分析 | 第43-54页 |
| ·华重楼总RNA的提取 | 第43页 |
| ·华重楼SQS基因cDNA的克隆 | 第43-46页 |
| ·华重楼SQS基因生物信息学分析 | 第46-50页 |
| ·华重楼SQS基因的原核表达 | 第50-54页 |
| ·碱变性法提取华重楼SQS基因质粒DNA | 第50页 |
| ·华重楼SQS基因原核表达载体构建 | 第50-52页 |
| ·重组质粒在E.coli Bl21中的表达条件的优化 | 第52-54页 |
| 6 讨论 | 第54-55页 |
| 全文总结 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 附录A:攻读硕士学位期间所发表的学术论文目录 | 第63页 |
