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RovM和RovA调控鼠疫耶尔森氏菌生物被膜形成和毒力的分子机制研究

缩略词第1-8页
摘要第8-11页
Abstract第11-15页
前言第15-27页
 1.鼠疫耶尔森氏菌的生物学特性第15页
 2.鼠疫菌的流行病学特征及鼠疫的危害第15-16页
 3.鼠疫菌的蚤传播模型以及生物被膜形成的主要决定性因子第16-19页
 4.鼠疫菌的致病机制以及主要的毒力因子第19-20页
 5.细菌基因转录调控第20-21页
 6.鼠疫菌中影响生物被膜形成和毒力的整体调控子第21-24页
 7.研究目的、研究假设和技术路线第24-27页
材料和方法第27-48页
 1.材料第27-31页
   ·菌株和质粒第27页
   ·主要的酶和试剂第27-28页
   ·本研究中所用引物第28-31页
 2.方法第31-48页
   ·菌种保存与培养第31-32页
   ·菌株总RNA提取第32页
   ·RNA逆转录及实时定量荧光PCR(Real time Quantitative PCR)第32-34页
   ·引物延伸实验(Primer extension assay)第34-37页
   ·LacZ报告基因融合实验(LacZ fusion)第37-41页
   ·凝胶阻滞实验(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)第41-43页
   ·生物被膜相关表型实验第43-47页
   ·小鼠毒力实验第47-48页
结果与讨论第48-83页
 1.RovM和RovA对鼠疫菌生物被膜的形成和毒力的影响第48-51页
   ·RovM/RovA分别促进/抑制生物被膜形成且抑制/促进毒力第48-50页
   ·讨论第50-51页
 2.RovM和RovA对鼠疫菌生物被膜形成相关靶基因的调控机制研究第51-62页
   ·RovM直接促进hmsT表达第51-53页
   ·RovM间接促进hmsHFRS表达第53-54页
   ·RovM直接促进hmsCDE表达第54-55页
   ·RovM间接抑制hmsP表达第55-56页
   ·RovM不调控waaAE-coaD表达第56-57页
   ·RovA直接抑制hmsT表达第57-58页
   ·RovA间接抑制waaAE-coaD表达第58页
   ·RovA不调控hmsHFRS表达第58-59页
   ·RovA不调控hmsCDE表达第59-60页
   ·RovA不调控hmsP表达第60-61页
   ·讨论第61-62页
 3. RovM对毒力因子pH6抗原的调控机制研究第62-65页
   ·RovM间接抑制psaABC表达第62-63页
   ·RovM间接抑制psaEF表达第63-64页
   ·讨论第64-65页
 4. 生物被膜形成相关及毒力相关的调控子之间的调控机制研究第65-74页
   ·RovM间接抑制YPO1635-phoPQ-YPO1632的表达第65-66页
   ·RovM不调控phoPQ-YPO1632表达第66-67页
   ·RovM不调控fur表达第67-68页
   ·RovM直接抑制rovA的表达第68-69页
   ·RovA间接抑制YPO1635-phoPQ-YPO1632表达第69-70页
   ·RovA间接抑制phoPQ-YPO1632的表达第70-71页
   ·RovA不调控fur表达第71-72页
   ·RovA不调控rovM表达第72-73页
   ·讨论第73-74页
 5. RovM的自调控以及温度对rovM表达的影响第74-77页
   ·RovM促进自身基因的表达第74-76页
   ·温度从 26 °C变化到 37 °C时,rovM基因表达水平降低第76-77页
   ·讨论第77页
 6. rovM基因和rovA基因敲除后的非极性突变验证第77-78页
 7. RovM和RovA参与的调控网络以及假想模式第78-82页
 8. 总结第82-83页
参考文献第83-93页
附录第93-97页
个人简历第97-99页
致谢第99-100页

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