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过表达苹果α-法尼烯合酶基因烟草早衰机制研究

中文摘要第1-12页
Abstract第12-15页
1 前言第15-26页
   ·植物萜类的合成及调控第15-17页
     ·植物萜类的合成第15页
     ·萜类合成途径存在物质的交流第15-16页
     ·底物合酶的亚细胞定位研究第16页
     ·萜类合成途径关键酶基因靶向定位研究第16-17页
     ·植物萜类的重要作用与用途第17页
   ·萜类合酶的结构特点及进化第17-19页
     ·萜类合酶的蛋白结构分析第17-18页
     ·苹果α-法尼烯合酶(MdAFS)的进化第18-19页
   ·萜类合成与初生代谢第19-21页
     ·光合作用与异戊二烯释放紧密相关第19-20页
     ·糖代谢是萜类合成的原料来源第20-21页
   ·植物萜类研究现状第21-24页
     ·萜类代谢工程存在的瓶颈及解决办法第21-23页
     ·萜类代谢工程对植物的负面影响第23-24页
   ·未来萜类次生代谢研究的重点第24页
   ·本研究的目的和意义第24-26页
2 材料与方法第26-37页
   ·实验材料第26-28页
     ·植物材料第26页
     ·烟草的培养与处理第26页
     ·青香蕉苹果苗的培养与处理第26-27页
     ·酶与各种生化试剂第27页
     ·PCR引物第27-28页
   ·实验方法第28-36页
     ·植物总RNA提取第28页
     ·反转录cDNA第一条链的合成第28-29页
     ·荧光定量PCR检测基因的表达第29-30页
     ·衰老相关生理指标测定第30-32页
       ·烟草叶片水含量第30页
       ·丙二醛含量第30页
       ·抗氧化酶活性第30页
       ·活性氧含量及组织化学染色第30-31页
       ·叶绿素和类胡萝卜素含量第31页
       ·烟草叶片净光合速率第31页
       ·快速叶绿素荧光诱导动力学曲线第31页
       ·淀粉和可溶性糖含量第31-32页
       ·淀粉染色第32页
     ·苯丙氨酸裂解酶活性测定第32页
     ·相对木质素含量测定第32-33页
     ·多酚和总黄酮含量测定第33页
     ·转录组分析第33-34页
     ·徒手切片观察第34页
     ·乙烯释放速率测定第34页
     ·挥发性萜类测定第34-35页
     ·酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定激素含量第35-36页
   ·统计分析第36-37页
3 结果与分析第37-71页
   ·转基因烟草植株的鉴定第37-39页
   ·转MdAFS基因烟草表型分析第39-57页
     ·转基因烟草表型观察第39-43页
     ·转录组分析第43-48页
       ·转录组数据统计第43-46页
       ·转录组qRT-PCR验证第46-48页
     ·抗氧化酶活性测定及基因表达第48-50页
     ·转基因植株抗氧化物质的含量下降第50页
     ·转基因植株O2??和H2O2的积累第50-51页
     ·衰老相关生理指标检测第51-52页
     ·转基因株系抗氧化能力下降第52-53页
     ·转基因株系存在的H2O2清除机制第53-54页
     ·转基因植株苯丙烷代谢途径被激活第54页
     ·烟草衰老标志基因表达分析第54-55页
     ·茉莉酸甲脂处理对种子萌发的影响第55-56页
     ·激素对转基因植株衰老的影响减弱第56-57页
   ·萜类合成途径分析第57-71页
     ·光合相关信号通路分析第57-60页
       ·转基因植株光合作用受到抑制第57-58页
       ·碳固定信号通路分析第58-59页
       ·淀粉含量及其染色分析第59-60页
     ·烟草中MVA和MEP途径信息交流的方式第60-63页
       ·苹果α-法尼烯合酶基因昼夜节律变化第60-61页
       ·洛伐他汀(MEV)处理对烟草根长的影响第61-62页
       ·膦胺霉素(FOS)处理对叶绿素含量的影响第62-63页
     ·萜类合成途径代谢流的改变对代谢产物合成的影响第63-71页
       ·非生物因素诱导苹果α-法尼烯合酶基因表达第63-64页
       ·茉莉酸甲酯处理对烟草叶片萜烯类物质的影响第64-65页
       ·萜类合成途径关键基因表达分析第65-67页
       ·MdAFS基因表达与萜类合成途径关键酶基因相关性分析第67页
       ·MEP途径标志代谢物叶绿素含量下降第67-68页
       ·质体醌-9 合成途径信号通路分析第68页
       ·转基因植株最大光化学效率(Fv/Fm)及OJIP曲线分析第68-69页
       ·丙酮酸处理对色素含量的影响第69-71页
4 讨论第71-76页
5 结论第76-77页
参考文献第77-89页
致谢第89-90页
攻读学位期间发表论文情况第90页

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