符号说明 | 第1-14页 |
中文摘要 | 第14-17页 |
Abstract | 第17-22页 |
1 前言 | 第22-44页 |
·禽白血病病毒(ALV)的研究进展 | 第22-37页 |
·ALV的形态大小和抵抗力 | 第22页 |
·ALV的抗原分型 | 第22-23页 |
·ALV的生长特征 | 第23页 |
·ALV的病毒基因组和蛋白 | 第23-27页 |
·ALV的遗传变异和重组 | 第27-28页 |
·ALV的复制和生活史 | 第28-30页 |
·ALV的致病性 | 第30页 |
·ALV的致病和致瘤机制 | 第30-34页 |
·ALV的流行病学和流行特点 | 第34页 |
·ALV的检测和诊断 | 第34-36页 |
·ALV的防控措施 | 第36-37页 |
·反向遗传学在病毒学研究中的应用 | 第37-39页 |
·反向遗传学的原理 | 第38页 |
·ALV的反向遗传学 | 第38-39页 |
·基因芯片技术在动物病毒学研究中的应用 | 第39-40页 |
·核苷类药物在抗HIV治疗中的应用 | 第40-43页 |
·核苷类药物的应用概况 | 第40-42页 |
·HIV耐药性的产生及其检测 | 第42-43页 |
·本研究的目的和意义 | 第43-44页 |
2 材料和方法 | 第44-83页 |
·材料 | 第44-49页 |
·病料来源 | 第44页 |
·试验动物 | 第44页 |
·主要分子生物学试剂 | 第44页 |
·主要配制试剂 | 第44-47页 |
·抗体 | 第47页 |
·菌种和载体 | 第47-49页 |
·主要仪器 | 第49页 |
·常规试验操作方法 | 第49-56页 |
·鸡胚成纤维细胞(CEF)的制备 | 第49页 |
·ELISA检测ALV抗原 | 第49-50页 |
·间接免疫荧光(IFA) | 第50页 |
·组织/细胞DNA的提取 | 第50-51页 |
·细胞上清/血清中病毒RNA的提取 | 第51页 |
·常规PCR扩增 | 第51-52页 |
·RT-PCR扩增 | 第52-53页 |
·扩增产物的回收 | 第53页 |
·回收产物的连接 | 第53页 |
·感受态细胞制备 | 第53-54页 |
·连接产物的转化 | 第54页 |
·质粒的提取 | 第54页 |
·重组质粒的酶切鉴定 | 第54-55页 |
·SDS-PAGE蛋白质电泳 | 第55页 |
·免疫印迹(Western blot) | 第55页 |
·免疫组织化学染色 | 第55-56页 |
·Fu-J (SDAU1005) 株急性致瘤性ALV的分离鉴定 | 第56-62页 |
·Fu-J (SDAU1005) 病毒悬液的传代和扩增 | 第56-57页 |
·肉瘤组织DNA和病毒RNA的提取 | 第57页 |
·PCR/RT-PCR扩增和克隆测序 | 第57-58页 |
·Fps蛋白和p19gag蛋白的原核表达 | 第58-60页 |
·鼠抗Fps和p19gag蛋白单因子血清的制备 | 第60-61页 |
·IFA检测感染Fu-J (SDAU1005) 的CEF | 第61页 |
·Western blot检测感染Fu-J (SDAU1005) 的CEF蛋白 | 第61-62页 |
·复制缺陷型Fu-Js感染性克隆的构建和病毒拯救 | 第62-67页 |
·SDAU1005感染性克隆质粒的构建 | 第62-63页 |
·SDAU1005感染性克隆质粒的转染和病毒拯救 | 第63-64页 |
·Fu-Js感染性克隆质粒的构建 | 第64-65页 |
·Fu-Js质粒的转染和病毒拯救 | 第65-66页 |
·动物实验研究拯救毒rFu-Js的致瘤性 | 第66页 |
·免疫组化和IFA检测拯救毒rFu-J诱发的肿瘤 | 第66-67页 |
·SJ (SDAU1102) 株急性致瘤性ALV的分离鉴定 | 第67-72页 |
·SJ (SDAU1102) 病毒悬液的传代和扩增 | 第67页 |
·肉瘤组织DNA提取和病毒RNA提取 | 第67页 |
·PCR/RT-PCR扩增和克隆测序 | 第67-69页 |
·p60~(v-src)蛋白的原核表达 | 第69页 |
·鼠抗p60~(v-src)蛋白单因子血清的制备 | 第69页 |
·Western blot检测感染SJ (SDAU1102) 的CEF蛋白 | 第69页 |
·免疫组化检测原代肉瘤中的p60~(v-src)蛋白 | 第69-70页 |
·复制缺陷型SJs感染性克隆的构建 | 第70-71页 |
·复制缺陷型SJs感染性克隆的转染和检测 | 第71-72页 |
·Fu-J (SDAU1005) 病毒生物学特性和致病性的研究 | 第72-75页 |
·辅助病毒和缺陷型病毒荧光定量PCR方法的建立 | 第72-74页 |
·不同代次Fu-J (SDAU1005) 细胞传代毒Fu-J含量的研究 | 第74页 |
·不同方式接种Fu-J (SDAU1005) 毒株对SPF鸡的致病性 | 第74-75页 |
·不同方式接种Fu-J (SDAU1005) 毒株的抗原分布 | 第75页 |
·免疫Fps蛋白对鸡体肿瘤的抑制作用 | 第75页 |
·Fu-J (SDAU1005) 感染CEF的转录组学分析 | 第75-77页 |
·样品制备、RNA抽提和纯化 | 第75-76页 |
·样品RNA的放大和标记 | 第76页 |
·芯片杂交和扫描 | 第76页 |
·芯片数据分析 | 第76-77页 |
·荧光定量RT-PCR | 第77页 |
·差异表达基因编码蛋白的互作分析 | 第77页 |
·拉米夫定抑制Fu-J (SDAU1005)复制和肿瘤生长的研究 | 第77-83页 |
·拉米夫定在培养细胞上对Fu-J (SDAU1005)复制的抑制 | 第77-78页 |
·拉米夫定影响反转录酶活性的研究 | 第78-80页 |
·拉米夫定对CEF ALV-J受体表达影响的研究 | 第80页 |
·拉米夫定对病毒入侵和释放影响的研究 | 第80-81页 |
·拉米夫定对鸡体Fu-J (SDAU1005)复制和肿瘤生长的抑制 | 第81-82页 |
·给药组鸡肿瘤中病毒耐药性的检测 | 第82-83页 |
3 结果与分析 | 第83-134页 |
·Fu-J前病毒全基因组序列的扩增和分析 | 第83-92页 |
·病毒悬液的传代和辅助病毒的纯化 | 第83页 |
·Fu-J前病毒全基因组结构和序列的分析 | 第83-86页 |
·Fu-J编码蛋白质的分析 | 第86页 |
·Fu-J基因组结构与Fu-J1~5 及FSV、PRCII基因组结构的比较 | 第86-88页 |
·Fps蛋白和p19gag蛋白的原核表达 | 第88-90页 |
·鼠抗Fps和鼠抗p19gag单因子血清的获得 | 第90-91页 |
·IFA检测感染Fu-J (SDAU1005) 的CEF | 第91页 |
·Western blot检测感染Fu-J (SDAU1005) 的CEF蛋白 | 第91-92页 |
·Fu-J (SDAU1005)感染性克隆的构建和缺陷型病毒的病毒拯救 | 第92-100页 |
·SDAU1005感染性克隆的构建和病毒拯救 | 第92-95页 |
·Fu-Js感染性克隆的构建 | 第95-96页 |
·Fu-Js缺陷型病毒的拯救 | 第96-97页 |
·拯救病毒的致瘤性研究 | 第97-100页 |
·SJ (SDAU1102) 的分离鉴定和基因组分析 | 第100-112页 |
·SDAU1102的纯化和病毒的定量 | 第100页 |
·SDAU1102前病毒全基因组核苷酸序列的扩增和分析 | 第100-101页 |
·SJ前病毒全基因组核苷酸序列的扩增和分析 | 第101-106页 |
·p60~(v-src)蛋白的原核表达 | 第106-108页 |
·鼠抗p60~(v-src)单因子血清的获得 | 第108页 |
·Western blot检测感染SJ (SDAU1102) 的CEF蛋白 | 第108页 |
·免疫组化检测SJ (SDAU1102) 诱发的急性肿瘤组织 | 第108-109页 |
·SJ-1~5 在不同代次肿瘤组织中的数量相对变化 | 第109-110页 |
·SJs感染性克隆的构建 | 第110-111页 |
·SJs感染性克隆瞬时转染的检测 | 第111-112页 |
·Fu-J (SDAU1005) 病毒生物学特性和致病性的研究 | 第112-121页 |
·辅助病毒和缺陷型病毒荧光定量PCR方法的建立 | 第112-115页 |
·不同代次Fu-J (SDAU1005) 细胞传代毒Fu-J含量的比较 | 第115-116页 |
·不同方式接种Fu-J (SDAU1005) 毒株对SPF鸡的致病性 | 第116-120页 |
·急性肿瘤传播方式的模拟实验 | 第120页 |
·免疫Fps蛋白对鸡体肿瘤的抑制作用 | 第120-121页 |
·Fu-J (SDAU1005)感染CEF的转录组学分析 | 第121-127页 |
·样品制备 | 第121-122页 |
·差异基因分析 | 第122-124页 |
·GO分析结果 | 第124-125页 |
·KEGG通路注释 | 第125页 |
·差异表达基因在染色体中的分布 | 第125-126页 |
·荧光定量RT-PCR验证芯片数据 | 第126-127页 |
·差异表达基因编码蛋白的互作分析 | 第127页 |
·拉米夫定抑制Fu-J (SDAU1005)复制和肿瘤发生的研究 | 第127-134页 |
·拉米夫定对体外培养CEF的影响 | 第127-128页 |
·拉米夫定对Fu-J (SDAU1005) 在CEF上复制的影响 | 第128-129页 |
·拉米夫定对AMV反转录酶的活性的影响 | 第129页 |
·拉米夫定对CEF病毒受体表达和病毒入侵及释放的影响 | 第129-131页 |
·拉米夫定对Fu-J (SDAU1005)在鸡体的复制和肿瘤生长的影响 | 第131-132页 |
·给药组鸡肿瘤中病毒分离株耐药性的检测 | 第132-134页 |
4 讨论 | 第134-145页 |
·Fu-J (SDAU1005) 的分离鉴定和基因组序列分析 | 第134-136页 |
·rFu-Js感染性克隆的构建、病毒拯救和致瘤性分析 | 第136-137页 |
·SJ (SDAU1102) 的分离鉴定和基因组序列分析 | 第137-138页 |
·Fu-J (SDAU1005) 的病毒复制及其致瘤性的研究 | 第138-141页 |
·Fu-J (SDAU1005) 病毒复制特性的研究 | 第138-139页 |
·Fu-J (SDAU1005) 对SPF鸡的致病性、致瘤性的研究 | 第139-140页 |
·Fps抗体对Fu-J (SDAU1005) 诱发肿瘤抑制作用的研究 | 第140-141页 |
·感染Fu-J (SDAU1005) 的CEF转录组分析 | 第141-143页 |
·细胞凋亡相关基因 | 第141页 |
·细胞增殖相关基因 | 第141-142页 |
·血管形成相关的基因 | 第142-143页 |
·肿瘤细胞迁移相关的基因 | 第143页 |
·拉米夫定抑制Fu-J (SDAU1005) 复制的研究 | 第143-145页 |
5 结论 | 第145-146页 |
6 参考文献 | 第146-168页 |
7 致谢 | 第168-169页 |
8 攻读学位期间发表论文情况 | 第169页 |