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两株携带v-fps和v-src肿瘤基因的复制缺陷型急性致瘤病毒的鉴定及其感染性克隆的致肿瘤作用

符号说明第1-14页
中文摘要第14-17页
Abstract第17-22页
1 前言第22-44页
   ·禽白血病病毒(ALV)的研究进展第22-37页
     ·ALV的形态大小和抵抗力第22页
     ·ALV的抗原分型第22-23页
     ·ALV的生长特征第23页
     ·ALV的病毒基因组和蛋白第23-27页
     ·ALV的遗传变异和重组第27-28页
     ·ALV的复制和生活史第28-30页
     ·ALV的致病性第30页
     ·ALV的致病和致瘤机制第30-34页
     ·ALV的流行病学和流行特点第34页
     ·ALV的检测和诊断第34-36页
     ·ALV的防控措施第36-37页
   ·反向遗传学在病毒学研究中的应用第37-39页
     ·反向遗传学的原理第38页
     ·ALV的反向遗传学第38-39页
   ·基因芯片技术在动物病毒学研究中的应用第39-40页
   ·核苷类药物在抗HIV治疗中的应用第40-43页
     ·核苷类药物的应用概况第40-42页
     ·HIV耐药性的产生及其检测第42-43页
   ·本研究的目的和意义第43-44页
2 材料和方法第44-83页
   ·材料第44-49页
     ·病料来源第44页
     ·试验动物第44页
     ·主要分子生物学试剂第44页
     ·主要配制试剂第44-47页
     ·抗体第47页
     ·菌种和载体第47-49页
     ·主要仪器第49页
   ·常规试验操作方法第49-56页
     ·鸡胚成纤维细胞(CEF)的制备第49页
     ·ELISA检测ALV抗原第49-50页
     ·间接免疫荧光(IFA)第50页
     ·组织/细胞DNA的提取第50-51页
     ·细胞上清/血清中病毒RNA的提取第51页
     ·常规PCR扩增第51-52页
     ·RT-PCR扩增第52-53页
     ·扩增产物的回收第53页
     ·回收产物的连接第53页
     ·感受态细胞制备第53-54页
     ·连接产物的转化第54页
     ·质粒的提取第54页
     ·重组质粒的酶切鉴定第54-55页
     ·SDS-PAGE蛋白质电泳第55页
     ·免疫印迹(Western blot)第55页
     ·免疫组织化学染色第55-56页
   ·Fu-J (SDAU1005) 株急性致瘤性ALV的分离鉴定第56-62页
     ·Fu-J (SDAU1005) 病毒悬液的传代和扩增第56-57页
     ·肉瘤组织DNA和病毒RNA的提取第57页
     ·PCR/RT-PCR扩增和克隆测序第57-58页
     ·Fps蛋白和p19gag蛋白的原核表达第58-60页
     ·鼠抗Fps和p19gag蛋白单因子血清的制备第60-61页
     ·IFA检测感染Fu-J (SDAU1005) 的CEF第61页
     ·Western blot检测感染Fu-J (SDAU1005) 的CEF蛋白第61-62页
   ·复制缺陷型Fu-Js感染性克隆的构建和病毒拯救第62-67页
     ·SDAU1005感染性克隆质粒的构建第62-63页
     ·SDAU1005感染性克隆质粒的转染和病毒拯救第63-64页
     ·Fu-Js感染性克隆质粒的构建第64-65页
     ·Fu-Js质粒的转染和病毒拯救第65-66页
     ·动物实验研究拯救毒rFu-Js的致瘤性第66页
     ·免疫组化和IFA检测拯救毒rFu-J诱发的肿瘤第66-67页
   ·SJ (SDAU1102) 株急性致瘤性ALV的分离鉴定第67-72页
     ·SJ (SDAU1102) 病毒悬液的传代和扩增第67页
     ·肉瘤组织DNA提取和病毒RNA提取第67页
     ·PCR/RT-PCR扩增和克隆测序第67-69页
     ·p60~(v-src)蛋白的原核表达第69页
     ·鼠抗p60~(v-src)蛋白单因子血清的制备第69页
     ·Western blot检测感染SJ (SDAU1102) 的CEF蛋白第69页
     ·免疫组化检测原代肉瘤中的p60~(v-src)蛋白第69-70页
     ·复制缺陷型SJs感染性克隆的构建第70-71页
     ·复制缺陷型SJs感染性克隆的转染和检测第71-72页
   ·Fu-J (SDAU1005) 病毒生物学特性和致病性的研究第72-75页
     ·辅助病毒和缺陷型病毒荧光定量PCR方法的建立第72-74页
     ·不同代次Fu-J (SDAU1005) 细胞传代毒Fu-J含量的研究第74页
     ·不同方式接种Fu-J (SDAU1005) 毒株对SPF鸡的致病性第74-75页
     ·不同方式接种Fu-J (SDAU1005) 毒株的抗原分布第75页
     ·免疫Fps蛋白对鸡体肿瘤的抑制作用第75页
   ·Fu-J (SDAU1005) 感染CEF的转录组学分析第75-77页
     ·样品制备、RNA抽提和纯化第75-76页
     ·样品RNA的放大和标记第76页
     ·芯片杂交和扫描第76页
     ·芯片数据分析第76-77页
     ·荧光定量RT-PCR第77页
     ·差异表达基因编码蛋白的互作分析第77页
   ·拉米夫定抑制Fu-J (SDAU1005)复制和肿瘤生长的研究第77-83页
     ·拉米夫定在培养细胞上对Fu-J (SDAU1005)复制的抑制第77-78页
     ·拉米夫定影响反转录酶活性的研究第78-80页
     ·拉米夫定对CEF ALV-J受体表达影响的研究第80页
     ·拉米夫定对病毒入侵和释放影响的研究第80-81页
     ·拉米夫定对鸡体Fu-J (SDAU1005)复制和肿瘤生长的抑制第81-82页
     ·给药组鸡肿瘤中病毒耐药性的检测第82-83页
3 结果与分析第83-134页
   ·Fu-J前病毒全基因组序列的扩增和分析第83-92页
     ·病毒悬液的传代和辅助病毒的纯化第83页
     ·Fu-J前病毒全基因组结构和序列的分析第83-86页
     ·Fu-J编码蛋白质的分析第86页
     ·Fu-J基因组结构与Fu-J1~5 及FSV、PRCII基因组结构的比较第86-88页
     ·Fps蛋白和p19gag蛋白的原核表达第88-90页
     ·鼠抗Fps和鼠抗p19gag单因子血清的获得第90-91页
     ·IFA检测感染Fu-J (SDAU1005) 的CEF第91页
     ·Western blot检测感染Fu-J (SDAU1005) 的CEF蛋白第91-92页
   ·Fu-J (SDAU1005)感染性克隆的构建和缺陷型病毒的病毒拯救第92-100页
     ·SDAU1005感染性克隆的构建和病毒拯救第92-95页
     ·Fu-Js感染性克隆的构建第95-96页
     ·Fu-Js缺陷型病毒的拯救第96-97页
     ·拯救病毒的致瘤性研究第97-100页
   ·SJ (SDAU1102) 的分离鉴定和基因组分析第100-112页
     ·SDAU1102的纯化和病毒的定量第100页
     ·SDAU1102前病毒全基因组核苷酸序列的扩增和分析第100-101页
     ·SJ前病毒全基因组核苷酸序列的扩增和分析第101-106页
     ·p60~(v-src)蛋白的原核表达第106-108页
     ·鼠抗p60~(v-src)单因子血清的获得第108页
     ·Western blot检测感染SJ (SDAU1102) 的CEF蛋白第108页
     ·免疫组化检测SJ (SDAU1102) 诱发的急性肿瘤组织第108-109页
     ·SJ-1~5 在不同代次肿瘤组织中的数量相对变化第109-110页
     ·SJs感染性克隆的构建第110-111页
     ·SJs感染性克隆瞬时转染的检测第111-112页
   ·Fu-J (SDAU1005) 病毒生物学特性和致病性的研究第112-121页
     ·辅助病毒和缺陷型病毒荧光定量PCR方法的建立第112-115页
     ·不同代次Fu-J (SDAU1005) 细胞传代毒Fu-J含量的比较第115-116页
     ·不同方式接种Fu-J (SDAU1005) 毒株对SPF鸡的致病性第116-120页
     ·急性肿瘤传播方式的模拟实验第120页
     ·免疫Fps蛋白对鸡体肿瘤的抑制作用第120-121页
   ·Fu-J (SDAU1005)感染CEF的转录组学分析第121-127页
     ·样品制备第121-122页
     ·差异基因分析第122-124页
     ·GO分析结果第124-125页
     ·KEGG通路注释第125页
     ·差异表达基因在染色体中的分布第125-126页
     ·荧光定量RT-PCR验证芯片数据第126-127页
     ·差异表达基因编码蛋白的互作分析第127页
   ·拉米夫定抑制Fu-J (SDAU1005)复制和肿瘤发生的研究第127-134页
     ·拉米夫定对体外培养CEF的影响第127-128页
     ·拉米夫定对Fu-J (SDAU1005) 在CEF上复制的影响第128-129页
     ·拉米夫定对AMV反转录酶的活性的影响第129页
     ·拉米夫定对CEF病毒受体表达和病毒入侵及释放的影响第129-131页
     ·拉米夫定对Fu-J (SDAU1005)在鸡体的复制和肿瘤生长的影响第131-132页
     ·给药组鸡肿瘤中病毒分离株耐药性的检测第132-134页
4 讨论第134-145页
   ·Fu-J (SDAU1005) 的分离鉴定和基因组序列分析第134-136页
   ·rFu-Js感染性克隆的构建、病毒拯救和致瘤性分析第136-137页
   ·SJ (SDAU1102) 的分离鉴定和基因组序列分析第137-138页
   ·Fu-J (SDAU1005) 的病毒复制及其致瘤性的研究第138-141页
     ·Fu-J (SDAU1005) 病毒复制特性的研究第138-139页
     ·Fu-J (SDAU1005) 对SPF鸡的致病性、致瘤性的研究第139-140页
     ·Fps抗体对Fu-J (SDAU1005) 诱发肿瘤抑制作用的研究第140-141页
   ·感染Fu-J (SDAU1005) 的CEF转录组分析第141-143页
     ·细胞凋亡相关基因第141页
     ·细胞增殖相关基因第141-142页
     ·血管形成相关的基因第142-143页
     ·肿瘤细胞迁移相关的基因第143页
   ·拉米夫定抑制Fu-J (SDAU1005) 复制的研究第143-145页
5 结论第145-146页
6 参考文献第146-168页
7 致谢第168-169页
8 攻读学位期间发表论文情况第169页

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