| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-20页 |
| ·氨基葡萄糖简介 | 第12页 |
| ·氨基葡萄糖的检测方法 | 第12-13页 |
| ·氨基葡萄糖合酶 | 第13-16页 |
| ·原核表达体系 | 第16-17页 |
| ·真核表达体系 | 第17-18页 |
| ·论文选题内容与意义 | 第18-20页 |
| ·研究内容 | 第18-19页 |
| ·研究意义 | 第19-20页 |
| 第2章 氨基葡萄糖合酶基因的克隆 | 第20-30页 |
| ·引言 | 第20页 |
| ·实验材料 | 第20-22页 |
| ·菌种与载体 | 第20页 |
| ·引物 | 第20页 |
| ·培养基 | 第20-21页 |
| ·分子试剂盒与分子试剂 | 第21页 |
| ·仪器 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-26页 |
| ·实验流程 | 第22页 |
| ·S.cerevisiae基因组DNA提取 | 第22-23页 |
| ·目的基因的扩增 | 第23-24页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第24页 |
| ·克隆载体构建与转化 | 第24页 |
| ·阳性重组子的筛选与测序 | 第24-26页 |
| ·结果与讨论 | 第26-28页 |
| ·总DNA提取与目的基因扩增 | 第26-27页 |
| ·阳性重组子的筛选 | 第27页 |
| ·阳性重组子的测序 | 第27-28页 |
| ·总结 | 第28-30页 |
| 第3章 氨基葡萄糖合酶基因原核表达载体的构建和表达 | 第30-46页 |
| ·引言 | 第30-32页 |
| ·实验材料 | 第32-35页 |
| ·菌种和载体 | 第32页 |
| ·引物 | 第32-33页 |
| ·培养基 | 第33页 |
| ·分子试剂盒和试剂 | 第33-34页 |
| ·仪器 | 第34页 |
| ·试剂配制 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-40页 |
| ·实验流程 | 第35页 |
| ·重组质粒的提取 | 第35-36页 |
| ·目的基因的扩增 | 第36-37页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第37页 |
| ·酶切 | 第37页 |
| ·目的基因与表达载体的连接 | 第37-38页 |
| ·重组表达载体的转化与鉴定 | 第38-39页 |
| ·氨基葡萄糖测定(Morgan-Elson法、HPLC法) | 第39页 |
| ·氨基葡萄糖合酶酶活测定 | 第39页 |
| ·小量诱导表达 | 第39-40页 |
| ·蛋白分离纯化 | 第40页 |
| ·表达条件优化 | 第40页 |
| ·结果与讨论 | 第40-44页 |
| ·克隆载体与目的基因的获取 | 第40-41页 |
| ·阳性重组子的筛选 | 第41-42页 |
| ·阳性重组子的测序 | 第42-43页 |
| ·氨基葡萄糖合酶分离纯化 | 第43页 |
| ·诱导条件优化 | 第43-44页 |
| ·总结 | 第44-46页 |
| 第4章 氨基葡萄糖合酶基因在巴斯德毕赤酵母中的表达 | 第46-70页 |
| ·引言 | 第46-47页 |
| ·实验材料 | 第47-50页 |
| ·菌种与载体 | 第47页 |
| ·引物 | 第47-48页 |
| ·培养基 | 第48页 |
| ·分子试剂盒和试剂 | 第48-49页 |
| ·仪器 | 第49页 |
| ·溶液的配制 | 第49-50页 |
| ·实验方法 | 第50-58页 |
| ·实验流程 | 第50页 |
| ·重组质粒的提取 | 第50-51页 |
| ·目的基因的扩增 | 第51-52页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第52页 |
| ·酶切 | 第52-53页 |
| ·目的基因与表达载体的连接 | 第53页 |
| ·重组表达载体的转化与鉴定 | 第53-54页 |
| ·提取质粒进行线性化 | 第54-55页 |
| ·电转化巴斯德毕赤酵母 | 第55页 |
| ·重组子的筛选与表型的鉴定 | 第55-56页 |
| ·重组蛋白预表达 | 第56页 |
| ·重组蛋白大量表达 | 第56-57页 |
| ·重组蛋白的分离纯化 | 第57页 |
| ·氨基葡萄糖测定(Morgan-Elson法) | 第57页 |
| ·酶活测定 | 第57页 |
| ·酶的性质测定 | 第57-58页 |
| ·结果与讨论 | 第58-68页 |
| ·克隆载体与目的基因的获取 | 第58页 |
| ·双酶切 | 第58-59页 |
| ·重组子的鉴定 | 第59-60页 |
| ·阳性重组子的测序 | 第60-61页 |
| ·表达载体提取与线性化 | 第61-62页 |
| ·阳性重组子的筛选与鉴定 | 第62-63页 |
| ·多拷贝阳性重组子的筛选与表型鉴定 | 第63-64页 |
| ·重组蛋白的预表达 | 第64页 |
| ·重组蛋白大量表达与分离纯化 | 第64-67页 |
| ·重组蛋白的性质 | 第67-68页 |
| ·总结 | 第68-70页 |
| 第5章 结论与展望 | 第70-72页 |
| ·结论 | 第70页 |
| ·展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 附录 | 第80-84页 |
| 致谢 | 第84-86页 |
| 在学期间主要科研成果 | 第86页 |
