海藻糖合酶在枯草芽孢杆菌中的构建与表达
| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-22页 |
| ·海藻糖研究现状 | 第12-14页 |
| ·海藻糖的简介 | 第12页 |
| ·海藻糖的生产方式 | 第12-13页 |
| ·海藻糖的应用 | 第13-14页 |
| ·海藻糖合酶的研究现状 | 第14-16页 |
| ·海藻糖合酶的来源 | 第14页 |
| ·海藻糖合酶的作用机理 | 第14-15页 |
| ·海藻糖合酶基因工程研究进展 | 第15-16页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统简介 | 第16-19页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统的起源 | 第16-17页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统的优点 | 第17页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统的缺点 | 第17-18页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统的发展方向 | 第18-19页 |
| ·立题背景和研究内容 | 第19-22页 |
| ·立题背景 | 第19页 |
| ·主要研究内容 | 第19-22页 |
| 第2章 海藻糖合酶基因的克隆与表达 | 第22-38页 |
| ·引言 | 第22页 |
| ·实验材料 | 第22-24页 |
| ·菌种与质粒 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22-23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·试剂的配制方法 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-29页 |
| ·重组枯草芽孢杆菌菌体破碎方法选择 | 第24-25页 |
| ·质粒pHT01的提取 | 第25页 |
| ·大肠杆菌表达感受态细胞的制备与转化 | 第25页 |
| ·目的基因tres的扩增引物设计 | 第25页 |
| ·目的基因tres的PCR扩增反应 | 第25-26页 |
| ·目的基因和质粒的双酶切 | 第26页 |
| ·目的基因和质粒的连接 | 第26-27页 |
| ·阳性重组子的检测 | 第27-28页 |
| ·枯草芽孢杆菌转化 | 第28页 |
| ·重组枯草芽孢杆菌菌落PCR | 第28页 |
| ·重组枯草芽孢杆菌的培养与表达 | 第28页 |
| ·重组枯草芽孢杆菌产海藻糖合酶的酶活力 | 第28-29页 |
| ·结果与讨论 | 第29-37页 |
| ·枯草芽孢杆菌菌体破碎方法选择 | 第30-31页 |
| ·质粒pHT01的提取 | 第31-32页 |
| ·海藻糖合酶基因tres的克隆 | 第32页 |
| ·阳性重组子菌落PCR | 第32-33页 |
| ·重组质粒酶切 | 第33页 |
| ·海藻糖合酶基因测序 | 第33-34页 |
| ·重组枯草芽孢杆菌菌落PCR | 第34-35页 |
| ·重组海藻糖合酶的表达与酶活力测定 | 第35-37页 |
| ·本章小结 | 第37-38页 |
| 第3章 重组枯草芽孢杆菌批次发酵研究 | 第38-54页 |
| ·引言 | 第38页 |
| ·实验材料 | 第38-40页 |
| ·菌株 | 第38页 |
| ·培养基 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38-39页 |
| ·主要试剂 | 第39-40页 |
| ·实验方法 | 第40页 |
| ·种子培养方法 | 第40页 |
| ·发酵方法 | 第40页 |
| ·分析方法 | 第40-41页 |
| ·菌体浓度测定方法 | 第40页 |
| ·菌体生长曲线的测定 | 第40页 |
| ·海藻糖合酶酶活定义及检测方法 | 第40-41页 |
| ·实验结果与分析 | 第41-53页 |
| ·重组菌体生长曲线 | 第41页 |
| ·最佳接种量研究 | 第41-42页 |
| ·碳源优化 | 第42-44页 |
| ·氮源优化 | 第44-46页 |
| ·酵母浸粉最佳浓度研究 | 第46-47页 |
| ·氯化钾最佳浓度研究 | 第47页 |
| ·磷酸氢二钠和磷酸二氢钠最佳浓度研究 | 第47-48页 |
| ·硫酸镁最佳浓度研究 | 第48-49页 |
| ·硫酸铵最佳浓度研究 | 第49页 |
| ·最佳诱导剂和诱导浓度研究 | 第49-51页 |
| ·最佳诱导温度研究 | 第51-52页 |
| ·发酵条件正交优化 | 第52-53页 |
| ·本章小结 | 第53-54页 |
| 第4章 重组枯草芽孢杆菌分批补料发酵研究 | 第54-66页 |
| ·引言 | 第54页 |
| ·实验材料和仪器设备 | 第54-55页 |
| ·菌种 | 第54页 |
| ·培养基 | 第54-55页 |
| ·主要仪器 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-56页 |
| ·菌种活化 | 第55页 |
| ·发酵罐培养方法 | 第55-56页 |
| ·分析方法 | 第56页 |
| ·菌种密度测定 | 第56页 |
| ·海藻糖合酶粗酶酶活的测定 | 第56页 |
| ·实验结果与分析 | 第56-65页 |
| ·最佳诱导pH研究 | 第56-57页 |
| ·诱导前菌体浓度对产酶的影响 | 第57-58页 |
| ·DO值对产酶的影响 | 第58-60页 |
| ·补料碳源、氮源对产酶的影响 | 第60-61页 |
| ·补料时间对产酶的影响 | 第61-62页 |
| ·补料方式对产酶的影响 | 第62-65页 |
| ·本章小结 | 第65-66页 |
| 第5章 结论与展望 | 第66-68页 |
| ·主要结论 | 第66-67页 |
| ·前景展望 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 致谢 | 第74-76页 |
| 在学期间主要研究成果 | 第76页 |
