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MYB97、MYB101和MYB120调控花粉管接受的分子机理研究

摘要第1-6页
Abstract第6-11页
英文缩略词表第11-12页
第一章 文献综述第12-40页
   ·雄配子体发生的调控机制第12-17页
     ·雄配子体的形成过程第12页
     ·小孢子发生的调控机制第12-15页
     ·花粉有丝分裂的调控机制第15-16页
     ·花粉壁形成的调控机制第16-17页
   ·雌配子体发生的调控机制第17-18页
     ·雌配子体的形成过程第17页
     ·雌配子体发生的调控机制第17-18页
   ·授粉受精作用第18-30页
     ·花粉萌发和花粉管极性生长第18-22页
     ·花粉管的导向第22-25页
     ·花粉管接受第25-29页
     ·雌雄配子的融合第29-30页
     ·多精受精和受精补偿第30页
   ·MYB转录因子对植物有性生殖的调控第30-31页
   ·CRP小肽参与调控植物的防御、发育和生殖第31-36页
     ·CRP小肽与植物防御第32页
     ·CRP小肽与植物发育第32-33页
     ·CRP小肽与植物生殖第33-36页
   ·CrRLK1L类受体激酶调控植物的生长和发育第36-38页
   ·立题依据和研究意义第38-40页
第二章 实验材料和方法第40-64页
   ·实验材料和试剂第40-43页
     ·植物材料第40页
     ·各种实验菌株第40-41页
     ·各种质粒载体第41页
     ·常用试剂第41-43页
   ·实验仪器第43-44页
   ·常用培养基及溶液的配制第44-49页
     ·常用培养基的配制第44-45页
     ·常用溶液的配制第45-49页
   ·实验方法第49-64页
     ·拟南芥生长条件第49页
     ·植物基因组DNA的提取第49页
     ·拟南芥花粉RNA的提取第49-50页
     ·反转录cDNA的合成第50页
     ·荧光定量Real-Time PCR第50-51页
     ·目的基因的克隆第51页
     ·回收DNA第51-52页
     ·DNA片段的连接第52页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备第52页
     ·热激法转化大肠杆菌第52-53页
     ·重组质粒的鉴定第53页
     ·普通质粒小提试剂盒提取质粒第53页
     ·质粒大量提取试剂盒提取质粒第53-54页
     ·农杆菌感受态细胞的制备第54-55页
     ·电击法转化农杆菌第55页
     ·农杆菌介导的拟南芥转化第55页
     ·拟南芥的人工杂交第55页
     ·基因枪转化法第55-56页
     ·His融合蛋白的原核表达与纯化第56-57页
     ·MBP融合蛋白的原核表达与纯化第57-58页
     ·凝胶阻滞分析第58-59页
     ·激光共聚焦显微镜第59页
     ·荧光漂白恢复实验第59页
     ·酵母双杂交实验第59-60页
     ·烟草叶片注射转化法第60-61页
     ·荧光素酶互补成像实验第61页
     ·拟南芥总蛋白的提取第61页
     ·蛋白质免疫印迹实验第61-62页
     ·拟南芥原生质体的制备和转化第62页
     ·免疫共沉淀实验第62页
     ·微量热泳动实验第62-64页
第三章 实验结果第64-100页
 引言第64-65页
   ·MYB97、MYB101和MYB120在成熟花粉中的表达远高于其它4个MYB基因第65-66页
   ·MYB97、MYB101和MYBl20基因在myb三元突变体中的表达量较野生型的明显下降第66页
   ·myb三元突变体显著地影响8个候选下游基因的表达第66-70页
   ·候选下游基因启动子含有MYB-binding顺式作用元件第70页
   ·MYB101能结合NAC105、HIR2和CAP1启动子的MYBGAHV顺式作用元件第70-74页
   ·异位表达MYB101可以激活CAP1启动子的表达第74-75页
   ·受myb三元突变体影响的基因编码转录因子和与信号转导、细胞壁合成、环境胁迫等相关的蛋白质第75页
   ·候选下游基因NAC105、HIR2和CAP1的T-DNA插入突变体的初步鉴定第75-77页
   ·CAP1基因属于一个编码分泌小肽的基因家族第77-85页
     ·拟南芥CAP基因家族有22个成员第77-78页
     ·拟南芥和琴叶拟南芥CAP基因的进化关系不具种属特异性第78-80页
     ·6个CAP基因在花粉和花粉管中的表达较高第80页
     ·CAP3和CAP4基因在myb三元突变体中的表达明显下调第80-83页
     ·MYB101转录因子也能结合CAP3和CAP4基因的启动子序列第83-85页
   ·利用MYB101启动子表达CAP3和CAP4部分互补myb三元突变体表型第85-86页
   ·CAP3蛋白可以分泌到细胞质膜外第86-88页
   ·CAP3蛋白被运输到花粉管的顶端第88-91页
   ·CAPs蛋白在体外实验体系中能与受体激酶FER的胞外域结合第91-97页
     ·CAPs在酵母双杂体系中能与FER的胞外域互作第91-92页
     ·利用微量热泳动法能检测到CAP1与FER的胞外域相互作用第92-95页
     ·荧光素酶互补成像法未检测到CAPs与FER的胞外域互作第95页
     ·利用免疫共沉淀法检测CAPs与FER相互作用的初步结果第95-97页
   ·CAP基因的突变体分析第97-100页
     ·CAP基因的T-DNA插入突变体的鉴定第97-98页
     ·CAP基因的人工microRNA突变体的构建第98-100页
第四章 总结、讨论和展望第100-106页
   ·总结与结论第100-101页
   ·讨论第101-104页
     ·MYB97、MYB101和MYB120下游基因的分离与鉴定第101-102页
     ·CAP基因的功能鉴定第102-104页
   ·展望第104-106页
参考文献第106-120页
附录Ⅰ第120-122页
附录Ⅱ第122-124页
附录Ⅲ第124-132页
致谢第132-134页
作者简介第134页

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