摘要 | 第1-6页 |
Abstract | 第6-11页 |
英文缩略词表 | 第11-12页 |
第一章 文献综述 | 第12-40页 |
·雄配子体发生的调控机制 | 第12-17页 |
·雄配子体的形成过程 | 第12页 |
·小孢子发生的调控机制 | 第12-15页 |
·花粉有丝分裂的调控机制 | 第15-16页 |
·花粉壁形成的调控机制 | 第16-17页 |
·雌配子体发生的调控机制 | 第17-18页 |
·雌配子体的形成过程 | 第17页 |
·雌配子体发生的调控机制 | 第17-18页 |
·授粉受精作用 | 第18-30页 |
·花粉萌发和花粉管极性生长 | 第18-22页 |
·花粉管的导向 | 第22-25页 |
·花粉管接受 | 第25-29页 |
·雌雄配子的融合 | 第29-30页 |
·多精受精和受精补偿 | 第30页 |
·MYB转录因子对植物有性生殖的调控 | 第30-31页 |
·CRP小肽参与调控植物的防御、发育和生殖 | 第31-36页 |
·CRP小肽与植物防御 | 第32页 |
·CRP小肽与植物发育 | 第32-33页 |
·CRP小肽与植物生殖 | 第33-36页 |
·CrRLK1L类受体激酶调控植物的生长和发育 | 第36-38页 |
·立题依据和研究意义 | 第38-40页 |
第二章 实验材料和方法 | 第40-64页 |
·实验材料和试剂 | 第40-43页 |
·植物材料 | 第40页 |
·各种实验菌株 | 第40-41页 |
·各种质粒载体 | 第41页 |
·常用试剂 | 第41-43页 |
·实验仪器 | 第43-44页 |
·常用培养基及溶液的配制 | 第44-49页 |
·常用培养基的配制 | 第44-45页 |
·常用溶液的配制 | 第45-49页 |
·实验方法 | 第49-64页 |
·拟南芥生长条件 | 第49页 |
·植物基因组DNA的提取 | 第49页 |
·拟南芥花粉RNA的提取 | 第49-50页 |
·反转录cDNA的合成 | 第50页 |
·荧光定量Real-Time PCR | 第50-51页 |
·目的基因的克隆 | 第51页 |
·回收DNA | 第51-52页 |
·DNA片段的连接 | 第52页 |
·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第52页 |
·热激法转化大肠杆菌 | 第52-53页 |
·重组质粒的鉴定 | 第53页 |
·普通质粒小提试剂盒提取质粒 | 第53页 |
·质粒大量提取试剂盒提取质粒 | 第53-54页 |
·农杆菌感受态细胞的制备 | 第54-55页 |
·电击法转化农杆菌 | 第55页 |
·农杆菌介导的拟南芥转化 | 第55页 |
·拟南芥的人工杂交 | 第55页 |
·基因枪转化法 | 第55-56页 |
·His融合蛋白的原核表达与纯化 | 第56-57页 |
·MBP融合蛋白的原核表达与纯化 | 第57-58页 |
·凝胶阻滞分析 | 第58-59页 |
·激光共聚焦显微镜 | 第59页 |
·荧光漂白恢复实验 | 第59页 |
·酵母双杂交实验 | 第59-60页 |
·烟草叶片注射转化法 | 第60-61页 |
·荧光素酶互补成像实验 | 第61页 |
·拟南芥总蛋白的提取 | 第61页 |
·蛋白质免疫印迹实验 | 第61-62页 |
·拟南芥原生质体的制备和转化 | 第62页 |
·免疫共沉淀实验 | 第62页 |
·微量热泳动实验 | 第62-64页 |
第三章 实验结果 | 第64-100页 |
引言 | 第64-65页 |
·MYB97、MYB101和MYB120在成熟花粉中的表达远高于其它4个MYB基因 | 第65-66页 |
·MYB97、MYB101和MYBl20基因在myb三元突变体中的表达量较野生型的明显下降 | 第66页 |
·myb三元突变体显著地影响8个候选下游基因的表达 | 第66-70页 |
·候选下游基因启动子含有MYB-binding顺式作用元件 | 第70页 |
·MYB101能结合NAC105、HIR2和CAP1启动子的MYBGAHV顺式作用元件 | 第70-74页 |
·异位表达MYB101可以激活CAP1启动子的表达 | 第74-75页 |
·受myb三元突变体影响的基因编码转录因子和与信号转导、细胞壁合成、环境胁迫等相关的蛋白质 | 第75页 |
·候选下游基因NAC105、HIR2和CAP1的T-DNA插入突变体的初步鉴定 | 第75-77页 |
·CAP1基因属于一个编码分泌小肽的基因家族 | 第77-85页 |
·拟南芥CAP基因家族有22个成员 | 第77-78页 |
·拟南芥和琴叶拟南芥CAP基因的进化关系不具种属特异性 | 第78-80页 |
·6个CAP基因在花粉和花粉管中的表达较高 | 第80页 |
·CAP3和CAP4基因在myb三元突变体中的表达明显下调 | 第80-83页 |
·MYB101转录因子也能结合CAP3和CAP4基因的启动子序列 | 第83-85页 |
·利用MYB101启动子表达CAP3和CAP4部分互补myb三元突变体表型 | 第85-86页 |
·CAP3蛋白可以分泌到细胞质膜外 | 第86-88页 |
·CAP3蛋白被运输到花粉管的顶端 | 第88-91页 |
·CAPs蛋白在体外实验体系中能与受体激酶FER的胞外域结合 | 第91-97页 |
·CAPs在酵母双杂体系中能与FER的胞外域互作 | 第91-92页 |
·利用微量热泳动法能检测到CAP1与FER的胞外域相互作用 | 第92-95页 |
·荧光素酶互补成像法未检测到CAPs与FER的胞外域互作 | 第95页 |
·利用免疫共沉淀法检测CAPs与FER相互作用的初步结果 | 第95-97页 |
·CAP基因的突变体分析 | 第97-100页 |
·CAP基因的T-DNA插入突变体的鉴定 | 第97-98页 |
·CAP基因的人工microRNA突变体的构建 | 第98-100页 |
第四章 总结、讨论和展望 | 第100-106页 |
·总结与结论 | 第100-101页 |
·讨论 | 第101-104页 |
·MYB97、MYB101和MYB120下游基因的分离与鉴定 | 第101-102页 |
·CAP基因的功能鉴定 | 第102-104页 |
·展望 | 第104-106页 |
参考文献 | 第106-120页 |
附录Ⅰ | 第120-122页 |
附录Ⅱ | 第122-124页 |
附录Ⅲ | 第124-132页 |
致谢 | 第132-134页 |
作者简介 | 第134页 |