| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 缩略表 | 第10-12页 |
| 第一部分：microRNA在核移植牛早期胚胎发育中的表达分析和功能研究 | 第12-84页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-34页 |
| ·体细胞核移植(SCNT)技术简介 | 第12页 |
| ·SCNT技术的应用 | 第12-14页 |
| ·农业生产中的应用 | 第12-13页 |
| ·医学研究中的应用 | 第13页 |
| ·基础研究中的应用 | 第13页 |
| ·濒危动物保护中的应用 | 第13-14页 |
| ·SCNT技术的局限性 | 第14-15页 |
| ·SCNT动物发育异常 | 第14-15页 |
| ·SCNT胚胎发育相关基因表达异常 | 第15页 |
| ·体细胞重编程 | 第15-23页 |
| ·DNA甲基化 | 第16-18页 |
| ·组蛋白修饰 | 第18页 |
| ·ATP-依赖的染色质重塑 | 第18-20页 |
| ·X染色体失活 | 第20-21页 |
| ·SCNT胚胎重编程异常 | 第21-23页 |
| ·microRNA介绍 | 第23-34页 |
| ·microRNA发现 | 第23-24页 |
| ·microRNA发生 | 第24-26页 |
| ·microRNA作用机制 | 第26-28页 |
| ·microRNA与发育 | 第28-32页 |
| ·microRNA与表观调控 | 第32-34页 |
| 技术路线 | 第34-36页 |
| 第二章 实验材料、试剂和方法 | 第36-54页 |
| ·样品制备和取样 | 第36-40页 |
| ·体细胞核移植牛胚胎构建和取样 | 第36-38页 |
| ·小鼠体细胞核移植囊胚构建 | 第38-39页 |
| ·单囊胚RNA提取 | 第39-40页 |
| ·激活胚胎显微注射实验方法 | 第40-42页 |
| ·实验耗材和试剂 | 第40-41页 |
| ·试剂配制 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-42页 |
| ·单囊胚免疫荧光染色 | 第42页 |
| ·Low Density Array芯片实验 | 第42-46页 |
| ·耗材和试剂盒 | 第42页 |
| ·Low Density Array芯片实验方法 | 第42-46页 |
| ·TaqMan-Real-time PCR实验 | 第46-47页 |
| ·芯片数据分析 | 第47-48页 |
| ·靶基因预测实验方法 | 第48-49页 |
| ·数据库靶基因预测 | 第48页 |
| ·DAVID基因注释分类 | 第48页 |
| ·KEGG通路靶基因分析 | 第48页 |
| ·预测得到牛物种和人的靶基因序列比对 | 第48页 |
| ·牛物种结合位点分子势能和二级结构分析 | 第48-49页 |
| ·双荧光素酶表达载体构建 | 第49-52页 |
| ·实验材料和试剂 | 第49页 |
| ·构建方法 | 第49-52页 |
| ·microRNA干扰实验 | 第52-54页 |
| ·细胞培养 | 第52页 |
| ·细胞转染 | 第52-53页 |
| ·荧光素酶检测 | 第53-54页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第54-83页 |
| ·体细胞核移植牛囊胚miRNA表达谱鉴定与分析 | 第54-65页 |
| ·各实验组囊胚取样和质量控制 | 第54-55页 |
| ·牛囊胚microRNA低密度芯片表达谱分析 | 第55-57页 |
| ·牛囊胚microRNA表达量定量验证 | 第57-60页 |
| ·牛囊胚microRNA表达谱聚类分析 | 第60-64页 |
| ·SCNT囊胚差异表达microRNA分析与讨论 | 第64-65页 |
| ·差异microRNA功能分析 | 第65-76页 |
| ·SCNT胚胎发育各阶段差异基因表达分析 | 第65-66页 |
| ·差异基因功能分析 | 第66-71页 |
| ·差异基因物种间功能比较 | 第71-73页 |
| ·microRNA表达特异性分析与讨论 | 第73-76页 |
| ·miR-19b靶基因验证和功能分析 | 第76-83页 |
| ·miR-19b靶基因软件预测 | 第76-78页 |
| ·miR-19b靶基因二级结构分析 | 第78-80页 |
| ·靶基因验证 | 第80-81页 |
| ·靶基因功能分析与讨论 | 第81-83页 |
| 第四章 结论 | 第83-84页 |
| 第二部分：低氧适应性对非高原鸡肺发育的影响 | 第84-120页 |
| 第六章 文献综述 | 第84-91页 |
| ·低氧适应的生理学研究 | 第84-88页 |
| ·低氧适应性的遗传和表型适应性表现 | 第84页 |
| ·呼吸生理适应 | 第84-86页 |
| ·心血管循环系统的低氧适应性 | 第86页 |
| ·肺部动脉管的高原适应性 | 第86-87页 |
| ·禽类胚胎的低氧适应性以及低氧胁迫的影响 | 第87页 |
| ·低氧适应性相关基因 | 第87-88页 |
| ·有关肺发育的microRNA研究 | 第88-91页 |
| ·miR-15/16等miRNA的凋亡相关功能研究 | 第89-90页 |
| ·microRNA 的治疗应用前景 | 第90-91页 |
| 技术路线 | 第91-92页 |
| 第七章 实验材料、试剂和方法 | 第92-100页 |
| ·样品制备和取样 | 第92页 |
| ·实验动物 | 第92页 |
| ·模拟低氧孵化 | 第92页 |
| ·提取total RNA | 第92-93页 |
| ·microRNA Northern鉴定 | 第93-95页 |
| ·试剂配置 | 第93页 |
| ·Northern Blotting实验方法 | 第93-95页 |
| ·SYBR实时荧光定量RT-PCR | 第95-96页 |
| ·Western Blot鉴定 | 第96-97页 |
| ·抗体和试剂 | 第96页 |
| ·总蛋白提取 | 第96页 |
| ·蛋白提取液浓度的测定 | 第96页 |
| ·Western Blot流程 | 第96-97页 |
| ·双荧光素酶表达载体构建 | 第97-98页 |
| ·bcl-2 3'UTR结构分析和靶位点预测 | 第97页 |
| ·细胞培养 | 第97页 |
| ·构建双荧光素酶表达载体 | 第97-98页 |
| ·细胞干扰实验 | 第98页 |
| ·免疫组化 | 第98-99页 |
| ·试剂配置 | 第98页 |
| ·石蜡切片制作 | 第98-99页 |
| ·实验流程 | 第99页 |
| ·凋亡检测实验(TUNEL) | 第99-100页 |
| 第八章 实验结果与分析 | 第100-115页 |
| ·miRNA在肺部的特异表达 | 第100-101页 |
| ·低氧胁迫环境下肺microRNA表达谱构建 | 第101-105页 |
| ·低氧胁迫信号传递和下游调控 | 第105-109页 |
| ·miR-15a下游靶基因鉴定 | 第109-111页 |
| ·Bcl-2表达检测和凋亡检测 | 第111-115页 |
| 第九章 结果与讨论 | 第115-120页 |
| 参考文献 | 第120-136页 |
| 附录 | 第136-142页 |
| 附录1 人类与牛物种microRNA序列比较 | 第136-142页 |
| 致谢 | 第142-144页 |
| 个人简历 | 第144页 |