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拟南芥AtHMGB15基因在花粉管萌发生长过程中的功能研究

中文摘要第1-5页
ABSTRACT第5-7页
目录第7-11页
ABBREVIATIONS第11-12页
第一章 文献综述第12-33页
   ·拟南芥雄配子体发生和发育的过程第12-13页
     ·雄性生殖细胞的分化发育和小孢子发生第12页
     ·雄配子体发生、花粉萌发和花粉管生长第12-13页
   ·拟南芥雄配子体发育的分子机制第13-22页
     ·花药早期发育的分子机制第14-15页
     ·小孢子形成的分子机制第15-16页
     ·三核花粉形成的分子机制第16-18页
     ·花粉萌发和花粉管生长的分子机制第18-22页
       ·细胞壁对花粉萌发和花粉管生长的作用第19页
       ·细胞骨架对花粉萌发和花粉管生长的影响第19-20页
       ·信号转导对花粉萌发和花粉管生长的影响第20-21页
       ·物质运输对花粉萌发和花粉管生长的影响第21-22页
   ·转录调控对拟南芥花粉发育和花粉管萌发生长的作用第22-26页
     ·真核生物转录起始过程第22-23页
     ·拟南芥花粉不同时期的转录组学第23-24页
     ·转录因子在拟南芥花粉发育和花粉管萌发生长中的作用第24-26页
   ·HMGB蛋白家族的功能第26-32页
     ·哺乳动物和酵母中HMGB蛋白家族的研究进展第27-28页
     ·植物中HMGB蛋白家族的研究进展第28-31页
     ·ARID-HMG蛋白家族的研究进展第31-32页
   ·立题依据和研究意义第32-33页
第二章 实验方法第33-54页
   ·实验材料第33-34页
     ·植物材料第33页
     ·菌株第33页
     ·质粒载体第33-34页
     ·酶、试剂及各种化学药品第34页
   ·实验仪器第34-35页
   ·常用溶液及培养基的配制第35-41页
     ·常用溶液的配制第35-39页
     ·常用培养基的配制第39-41页
   ·实验方法第41-54页
     ·植物材料的栽种与管理第41页
     ·拟南芥杂交实验第41页
     ·拟南芥花粉体外萌发实验第41页
     ·拟南芥花粉体内萌发及雌蕊的苯胺蓝染色第41-42页
     ·拟南芥总基因组DNA的快速提取法(Edwards法)第42页
     ·CTAB法提取拟南芥角果RNA第42页
     ·TRIZOL法提取拟南芥花粉RNA第42-43页
     ·多糖多酚快速提取试剂盒提取拟南芥总RNA第43页
     ·基因半定量PCR(RT-PCR)第43-44页
     ·荧光实时定量PCR(Real-time PCR)第44-45页
     ·回收琼脂糖凝胶中的DNA第45-46页
     ·DNA片段与T载体或与目的载体的连接反应第46页
     ·大肠杆菌DH5a超级感受态的制备第46-47页
     ·大肠杆菌DH5a超级感受态的热激转化第47页
     ·大肠杆菌质粒的小量提取第47页
     ·大肠杆菌质粒的大量提取与纯化第47-48页
     ·农杆菌感受态的制备第48-49页
     ·农杆菌感受态的电击转化第49页
     ·农杆菌侵染转化拟南芥第49页
     ·GUS染色观察第49页
     ·DAPI染色观察第49-50页
     ·酵母中转录激活活性的分析第50页
     ·基因枪转化、瞬时表达和荧光双分子互补(BiFC)实验第50-51页
     ·荧光素酶双分子互补实验(LUC)第51页
     ·His标签蛋白原核表达及纯化第51-52页
     ·电泳迁移实验(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)第52-54页
第三章 实验结果第54-93页
 引言第54页
   ·athmgb15-1突变体的表型分析第54-58页
     ·athmgb15-1突变体靠近角果基部的结实率较低第54-56页
     ·athmgb15-1突变体花粉在体外萌发率低,但在体内可正常萌发产生花粉管第56页
     ·athmgb15-1突变体花粉管体内生长受抑制,花粉管短第56-58页
   ·AtHMGB15蛋白的功能分析第58-71页
     ·AtHMGB15属于ARID-HMG蛋白亚家族,具有结合DNA的活性第58页
     ·AtHMGB15的亚细胞定位第58-64页
     ·AtHMGB15蛋白在酵母中不具有转录激活活性第64页
     ·AtHMGB15蛋白形成同源聚合体,并与ARID-HMG蛋白家族其它成员形成异源聚合体第64-67页
     ·AtHMGB15蛋白在植物体内与其它转录因子相互作用第67-71页
       ·AtHMGB15与转录因子AGL66、AGL104和AGL18相互作用第67-69页
       ·AtHMGB15与通用转录因子AtTFIIB1相互作用第69-71页
   ·AtHMGB15在花粉萌发及花粉管生长调控网络中的作用研究第71-82页
     ·athmgb15-1突变体基因表达谱的芯片数据分析第71-74页
     ·AtHMGB15与AtMIKC~*协同影响花粉管萌发生长第74-79页
       ·athmgb15-1突变体与agl66 agl104-2突变体表型相似第74页
       ·athmgb15-1增强agl66 agl104-2的表型第74-75页
       ·AtHMGB15与AtMIKC~*共同调控与细胞壁合成及修饰、分泌、运输和信号等过程相关基因的表达第75-77页
       ·AtHMGB15和AtMIKC~*参与调控AtHMGB11、AGL94、AGL65、AGL30、AGL29和AGL18基因的表达第77-79页
     ·agl66加重athmgb15-C突变体花粉体外萌发率低的表型第79-82页
     ·athmgb15-C突变体中同时突变AGL66和AGL94严重降低角果结实率第82页
   ·ARID-HMG蛋白家族成员在花粉发育以及其它生长过程中功能的初步研究第82-93页
     ·ARID-HMG基因的表达模式第82-85页
     ·ARID-HMG1、ARID-HMG2和AtHMGB11突变体的鉴定及遗传分析第85-86页
     ·AtHMGB11与AtHMGB15基因存在部分的功能冗余第86-87页
     ·野生型花粉中超表达ARID-HMG基因不影响花粉发育第87页
     ·野生型植株中超表达ARID-HMG基因的分析第87-93页
       ·超表达AtHMGB11基因造成植物小苗根增长,植株分支增多、变矮,角果短小第89页
       ·AtHMGB11-OE花丝短,造成花粉不能授到雌蕊柱头上,导致植株结实率降低第89-93页
第四章 总结与结论、讨论和展望第93-98页
   ·总结与结论第93页
   ·讨论第93-96页
     ·AtHMGB15在花粉萌发和花粉管生长中起重要作用第93-94页
     ·AtHMGB15调控许多在花粉管萌发生长中起重要作用的基因表达第94-95页
     ·AtHMGB15在花粉萌发和花粉管生长调控网络中的作用第95-96页
   ·展望第96-98页
     ·AtHMGB15是否影响AtMIKC~*蛋白异源复合体的形成及结合DNA的能力第96页
     ·AtHMGB15能否促进AtMIKC~*蛋白异源复合体与转录起始复合体的结合第96页
     ·寻找更多与AtHMGB15蛋白互作的花粉转录因子第96-97页
     ·通过鉴定AtHMGB15的下游基因研究花粉萌发和花粉管生长的分子遗传机制第97-98页
参考文献第98-111页
附录:表1.本研究所用引物列表第111-117页
附录:表2.T1代转基因植株互补统计第117-118页
附录:表3.T1代转基因植株统计1第118-119页
附录:表4.T1代转基因植株统计2第119-120页
附录:表5.T1代转基因植株统计3第120-121页
附录:表6.T1代转基因植株统计4第121-122页
致谢第122-124页
作者简介第124页

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