| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 绪论 | 第10-16页 |
| ·木霉菌分类地位及主要生防功能 | 第10-11页 |
| ·木霉菌分类地位 | 第10页 |
| ·木霉菌主要生防功能 | 第10-11页 |
| ·真菌蛋白酶的分类及功能 | 第11-12页 |
| ·蛋白酶的分类 | 第11页 |
| ·蛋白酶的功能及应用 | 第11-12页 |
| ·木霉蛋白酶的研究进展 | 第12-15页 |
| ·木霉蛋白酶的种类和特性 | 第12-13页 |
| ·木霉蛋白酶的生防功能 | 第13-14页 |
| ·木霉蛋白酶的主要研究方法 | 第14页 |
| ·木霉蛋白酶编码基因的克隆及表达特性 | 第14-15页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第15-16页 |
| 2 深绿木霉枯草杆菌蛋白酶基因SS42的克隆及序列分析 | 第16-32页 |
| ·实验材料 | 第16页 |
| ·供试菌株 | 第16页 |
| ·供试试剂 | 第16页 |
| ·仪器设备 | 第16页 |
| ·研究方法 | 第16-21页 |
| ·深绿木霉ACCC30153菌株DNA获取 | 第16-17页 |
| ·深绿木霉ACCC30153菌株总RNA提取及反转录 | 第17-19页 |
| ·深绿木霉枯草杆菌蛋白酶SS42基因全长DNA和cDNA的扩增 | 第19页 |
| ·核苷酸测序 | 第19-21页 |
| ·SS42基因生物信息学分析 | 第21页 |
| ·结果与分析 | 第21-30页 |
| ·深绿木霉基因组DNA | 第21-22页 |
| ·深绿木霉总RNA | 第22页 |
| ·深绿木霉枯草杆菌蛋白酶基因SS42 cDNA及DNA序列的扩增 | 第22-24页 |
| ·深绿木霉枯草杆菌蛋白酶基因SS42序列分析 | 第24-26页 |
| ·深绿木霉枯草杆菌蛋白酶SS42特性分析 | 第26-30页 |
| ·讨论 | 第30页 |
| ·本章小结 | 第30-32页 |
| 3 深绿木霉枯草杆菌蛋白酶基因SS42的表达特性 | 第32-43页 |
| ·实验材料 | 第32-33页 |
| ·供试树种与菌株 | 第32页 |
| ·供试试剂 | 第32页 |
| ·培养基 | 第32页 |
| ·实验仪器 | 第32-33页 |
| ·研究方法 | 第33-37页 |
| ·荧光定量引物设计 | 第33-34页 |
| ·菌丝体的诱导培养 | 第34-35页 |
| ·菌丝体总RNA的提取及反转录 | 第35-37页 |
| ·结果与分析 | 第37-41页 |
| ·MM诱导下深绿木霉SS42基因的表达 | 第37页 |
| ·C饥饿诱导下深绿木霉SS42基因的表达 | 第37-38页 |
| ·N饥饿诱导下深绿木霉SS42基因的表达 | 第38页 |
| ·山新杨茎粉诱导下深绿木霉SS42基因的表达 | 第38-39页 |
| ·山新杨叶粉诱导下深绿木霉SS42基因的表达 | 第39页 |
| ·杨树叶枯病菌细胞壁诱导下深绿木霉SS42基因的表达 | 第39页 |
| ·杨树叶枯病病原菌发酵液诱导下深绿木霉SS42基因的表达 | 第39-40页 |
| ·杨树烂皮病病原菌细胞壁诱导下深绿木霉SS42基因的表达 | 第40页 |
| ·杨树烂皮病病原菌发酵液诱导下深绿木霉SS42基因的表达 | 第40-41页 |
| ·九种处理下SS42基因的差异表达结果比较 | 第41页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| ·病原菌细胞壁的制备 | 第41页 |
| ·诱导前培养时间及取样时间的确定 | 第41-42页 |
| ·本霉与植物作方式的确定 | 第42页 |
| ·本章小结 | 第42-43页 |
| 4 深绿木霉枯草杆菌蛋白酶基因SS42的原核表达 | 第43-59页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·供试试剂 | 第43页 |
| ·供试菌株 | 第43页 |
| ·实验仪器 | 第43页 |
| ·研究方法 | 第43-49页 |
| ·原核表达载体的选择 | 第43-44页 |
| ·pGEX-4T-2质粒的提取 | 第44页 |
| ·枯草杆菌蛋白酶SS42基因的扩增 | 第44-45页 |
| ·重组表达载体pGEX-SS42的构建 | 第45-46页 |
| ·重组表达载体pGEX-SS42的转化 | 第46页 |
| ·重组载体Top10-pGEX-SS42检测及保存 | 第46页 |
| ·重组表达载体pGEX-SS42的诱导表达 | 第46-49页 |
| ·研究结果 | 第49-56页 |
| ·pGEX-4T-2质粒和SS42基因的获取 | 第49-50页 |
| ·构建得到重组表达载体pGEX-SS42 | 第50页 |
| ·pGEX-SS42转化入大肠杆菌Top10感受态细胞 | 第50页 |
| ·重组菌株的检测 | 第50-51页 |
| ·重组菌株BL21-SS42的诱导表达 | 第51-56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| ·表达系统的选取 | 第56-57页 |
| ·大肠杆菌的裂解 | 第57页 |
| ·改变培养条件诱导蛋白表达 | 第57页 |
| ·包涵体蛋白的纯化 | 第57-58页 |
| ·本章小结 | 第58-59页 |
| 5. 重组蛋白酶rSS42的酶学特性及抑菌实验 | 第59-69页 |
| ·实验材料 | 第59页 |
| ·供试试剂 | 第59页 |
| ·供试菌株 | 第59页 |
| ·实验仪器 | 第59页 |
| ·研究方法 | 第59-62页 |
| ·重组蛋白rSS42的酶活测定 | 第59-61页 |
| ·重组蛋白酶rSS42对五种病原菌菌丝生长的抑制作用 | 第61-62页 |
| ·研究结果 | 第62-66页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第62页 |
| ·重组蛋白酶促反应最佳诱导时间 | 第62-63页 |
| ·重组蛋白酶rSS42酶促反应最适pH | 第63页 |
| ·重组蛋白酶促反应最适温度 | 第63-64页 |
| ·深绿木霉与病原菌的对峙实验 | 第64-65页 |
| ·重组蛋白rSS42的抑菌实验 | 第65-66页 |
| ·讨论 | 第66-68页 |
| ·本章小结 | 第68-69页 |
| 6. 结论 | 第69-70页 |
| 7. 展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
