| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| ·菊粉及菊粉酶简介 | 第8-9页 |
| ·菊粉 | 第8页 |
| ·菊粉酶 | 第8-9页 |
| ·内切菊粉酶的应用 | 第9页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第9-12页 |
| ·P. pastoris 表达系统简介 | 第9-10页 |
| ·P. pastoris 发酵优化策略 | 第10-12页 |
| ·立题依据及意义 | 第12页 |
| ·本论文主要研究内容 | 第12-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-20页 |
| ·菌种与质粒 | 第14页 |
| ·试剂 | 第14页 |
| ·主要仪器 | 第14-15页 |
| ·分子生物学操作 | 第15-17页 |
| ·PCR 扩增内切菊粉酶基因 | 第15页 |
| ·密码子优化 | 第15页 |
| ·化转 E.coli JM109 感受态细胞 | 第15-16页 |
| ·E.coli JM109 质粒提取 | 第16页 |
| ·重组表达载体构建及鉴定 | 第16页 |
| ·P.pastoris KM71 感受态细胞的制备 | 第16-17页 |
| ·重组 P. pastoris KM71 的构建与筛选 | 第17页 |
| ·细胞培养 | 第17-18页 |
| ·培养基 | 第17-18页 |
| ·培养方法 | 第18页 |
| ·分析方法 | 第18-19页 |
| ·菌浓(OD600)的测定 | 第18页 |
| ·酵母细胞干重测定 | 第18-19页 |
| ·菊粉酶酶活测定 | 第19页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第19页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析 | 第19页 |
| ·重组内切菊粉酶的纯化 | 第19页 |
| ·重组内切菊粉酶水解菊粉反应及产物检测 | 第19-20页 |
| ·重组内切菊粉酶水解菊粉反应 | 第19页 |
| ·HPLC检测水解产物 | 第19-20页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第20-40页 |
| ·黑曲霉内切菊粉酶的克隆与表达 | 第20-23页 |
| ·重组质粒 pPIC9K-EnInu 的构建与筛选 | 第20-22页 |
| ·重组 P. pastoris 的构建筛选及表达验证 | 第22页 |
| ·重组菌 P. pastoris KM71/pPIC9K-EnInu 的 3 L 罐高密度发酵 | 第22-23页 |
| ·内切菊粉酶基因的密码子优化及重组菌的发酵表达 | 第23-31页 |
| ·内切菊粉酶基因的密码子优化 | 第23-26页 |
| ·内切菊粉酶密码子优化序列在 P. pastoris 的重组表达 | 第26页 |
| ·重组菌 KM 71/pPIC9K-EnInuop 3 L 罐高密度发酵条件的优化 | 第26-31页 |
| ·重组内切菊粉酶的酶学性质研究 | 第31-33页 |
| ·重组内切菊粉酶的纯化 | 第31页 |
| ·重组内切菊粉酶的最适温度及热稳定性 | 第31-32页 |
| ·重组内切菊粉酶的最适 pH 及 pH 稳定性 | 第32-33页 |
| ·金属离子对重组内切菊粉酶的影响 | 第33页 |
| ·重组内切菊粉酶制备低聚果糖的条件研究 | 第33-40页 |
| ·重组内切菊粉酶水解菊粉产物分析 | 第34页 |
| ·底物浓度对水解反应的影响 | 第34-35页 |
| ·pH 对水解反应的影响 | 第35-36页 |
| ·温度对水解反应的影响 | 第36-37页 |
| ·加酶量对水解反应的影响 | 第37页 |
| ·重组内切菊粉酶的贮藏稳定性研究 | 第37-40页 |
| 第四章 结论与展望 | 第40-42页 |
| ·结论 | 第40页 |
| ·展望 | 第40-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-47页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第47页 |
