| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略语 | 第7-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-20页 |
| 1 文献综述 | 第11-17页 |
| ·病毒滴度的概念 | 第11页 |
| ·测定杆状病毒滴度的意义 | 第11页 |
| ·测定杆状病毒滴度方法的研究进展 | 第11-15页 |
| ·蚀斑法 | 第11-12页 |
| ·终点稀释法 | 第12-13页 |
| ·免疫染色法 | 第13-14页 |
| ·流式细胞术法 | 第14-15页 |
| ·荧光定量 PCR 法 | 第15页 |
| ·测定活细胞大小法 | 第15页 |
| ·pIZT/V5-His 载体简介 | 第15-17页 |
| 2 实验方案设计 | 第17-20页 |
| ·实验的目的和意义 | 第17页 |
| ·研究内容 | 第17-19页 |
| ·建立报告基因稳定转化 BmN 细胞 | 第17-18页 |
| ·病毒感染验证试验 | 第18页 |
| ·Southern Blot 分析报告基因是否已整合进 BmN 细胞基因组 | 第18页 |
| ·利用稳定转化细胞测定滴度 | 第18-19页 |
| ·实验技术流程图 | 第19-20页 |
| 第二章 两种报告基因（DsRed、LacZ）稳定转化载体的构建 | 第20-35页 |
| 1. 材料与试剂 | 第20-22页 |
| ·材料 | 第20页 |
| ·试剂 | 第20页 |
| ·试剂配制 | 第20-22页 |
| ·培养基 | 第20-21页 |
| ·抗生素 | 第21页 |
| ·碱裂解法提取质粒 DNA 用溶液 | 第21-22页 |
| ·核酸电泳所用溶液 | 第22页 |
| ·其它溶液 | 第22页 |
| 2 方法 | 第22-30页 |
| ·pBacPAK8-DsRed 转移载体的构建 | 第22-25页 |
| ·PCR 扩增目的基因（DsRed）片段 | 第22-23页 |
| ·PCR 产物与转移载体 pBacPAK8 的双酶切 | 第23-24页 |
| ·连接反应 | 第24页 |
| ·E.coli TG1 感受态细胞的制备 | 第24页 |
| ·连接产物的转化 | 第24页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第24-25页 |
| ·两种报告基因（DsRed、LacZ）的稳转载体 pIZT-DsRed、pIZT-LacZ 的构建 | 第25-30页 |
| ·PCR 合成两种报告基因表达盒 | 第25-26页 |
| ·PCR 扩增 pIZT/V5-His 载体大片段序列 | 第26-27页 |
| ·pIZT-DsRed 的构建 | 第27-28页 |
| ·pIZT-LacZ 的构建 | 第28-29页 |
| ·E.coli TG1 感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·连接产物的转化 | 第29页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第29-30页 |
| 3 结果 | 第30-33页 |
| ·重组转移载体 pBacPAK8-DsRed 的鉴定 | 第30-32页 |
| ·PCR 扩增 DsRed 片段 | 第30-31页 |
| ·重组质粒 pBacPAK8-DsRed 的鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组稳转载体 pIZT-DsRed 与 pIZT-LacZ 的鉴定 | 第32-33页 |
| ·PCR 扩增两种报告基因表达盒序列及载体大片段序列 | 第32页 |
| ·重组稳转载体 pIZT-DsRed 与 pIZT-LacZ 的鉴定 | 第32-33页 |
| 4. 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 重组报告基因稳转质粒转染 BmN 细胞及稳定转化细胞的筛选 | 第35-46页 |
| 1 材料与试剂 | 第35页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·试剂 | 第35页 |
| 2 方法 | 第35-39页 |
| ·细胞培养、冻存与复苏 | 第35-36页 |
| ·家蚕细胞 BmN 贴壁培养 | 第35页 |
| ·细胞冻存 | 第35页 |
| ·细胞复苏 | 第35-36页 |
| ·病毒的扩增培养 | 第36页 |
| ·重组报告基因稳转质粒的制备 | 第36页 |
| ·MTT 法检测 Zeocin 对 BmN 细胞活力的影响 | 第36页 |
| ·重组报告基因稳转质粒转染 BmN 细胞 | 第36-37页 |
| ·报告基因稳定转化 BmN 细胞的筛选 | 第37-39页 |
| ·报告基因稳定转化 BmN 细胞筛选技术流程图 | 第37-38页 |
| ·报告基因稳定转化细胞的筛选 | 第38-39页 |
| ·病毒感染验证试验 | 第39页 |
| ·病毒感染验证稳定转化细胞 BmN-RFP | 第39页 |
| ·病毒感染验证稳定转化细胞 BmN-LacZ | 第39页 |
| 3. 结果 | 第39-44页 |
| ·Zeocin 对 BmN 细胞活力的影响 | 第39-41页 |
| ·Zeocin 处理后细胞形态变化 | 第39-40页 |
| ·MTT 法检测 Zeocin 对 BmN 细胞活力的影响 | 第40-41页 |
| ·重组质粒转染家蚕细胞 48 小时后，荧光显微镜下观察细胞发荧光情况 | 第41页 |
| ·稳定转化细胞的筛选 | 第41-42页 |
| ·病毒感染验证试验 | 第42-44页 |
| ·BmN-RFP 感染 BmNPV 的情况 | 第42-43页 |
| ·BmN-LacZ 感染 BmNPV 的情况 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 报告基因稳定转化 BmN 细胞的 Southern Blot 分析 | 第46-57页 |
| 1 材料与试剂 | 第46-48页 |
| ·材料 | 第46页 |
| ·试剂 | 第46页 |
| ·试剂的配制 | 第46-48页 |
| ·BmN 细胞基因组提取用溶液 | 第46页 |
| ·Southern Blot 用缓冲液 | 第46-48页 |
| 2 方法 | 第48-52页 |
| ·报告基因稳定转化 BmN 细胞的 Southern Blot 鉴定 | 第48-52页 |
| ·细胞基因组的抽提 | 第48页 |
| ·PCR 合成地高辛标记的两种报告基因的探针 | 第48-49页 |
| ·稳转细胞基因组及阳性对照质粒酶切处理 | 第49-50页 |
| ·向上毛细孔法转移 DNA | 第50-51页 |
| ·预杂交、杂交 | 第51-52页 |
| ·洗膜 | 第52页 |
| ·杂交信号的检测 | 第52页 |
| ·报告基因稳定转化 BmN 细胞的 PCR 鉴定 | 第52页 |
| ·BmN-RFP 的 PCR 鉴定 | 第52页 |
| ·BmN-LacZ 的 PCR 鉴定 | 第52页 |
| 3. 结果 | 第52-56页 |
| ·细胞基因组 DNA 电泳 | 第52-53页 |
| ·细胞基因组 DNA 及阳性对照质粒酶切处理 | 第53-54页 |
| ·地高辛标记报告基因探针电泳 | 第54-55页 |
| ·Southern Blot 杂交结果 | 第55页 |
| ·BmN-RFP 及 BmN-LacZ 的 PCR 鉴定 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-57页 |
| 第五章 报告基因稳定转化 BmN 细胞测定家蚕杆状病毒滴度 | 第57-62页 |
| 1. 材料与试剂 | 第57页 |
| ·材料 | 第57页 |
| ·试剂 | 第57页 |
| 2. 方法 | 第57-59页 |
| ·利用 BmN 细胞测定家蚕杆状病 Wt-BmNPV、Cubic-BmNPV 及 BmBacmid 的滴度 | 第57-58页 |
| ·利用 BmN-RFP 测定家蚕杆状病 Wt-BmNPV、Cubic-BmNPV 及 BmBacmid 的滴度 | 第58页 |
| ·利用 BmN-LacZ 测定家蚕杆状病 Wt-BmNPV、Cubic-BmNPV 及 BmBacmid 的滴度 | 第58-59页 |
| 3. 结果 | 第59-61页 |
| ·三种 BmN 细胞株测定家蚕杆状病毒 Wt-BmNPV、Cubic-BmNPV 及 BmBacmid 的滴度 | 第59页 |
| ·三种 BmN 细胞株测定 BmNPV 效果的比较 | 第59-61页 |
| 4. 讨论 | 第61-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
