| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略语 | 第9-10页 |
| 目录 | 第10-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-17页 |
| 1 雌激素污染研究现状 | 第12-15页 |
| ·国内外环境雌激素研究进展 | 第12-13页 |
| ·环境雌激素的来源 | 第13-14页 |
| ·环境雌激素对野生动物和人类健康的影响 | 第14-15页 |
| 2 目前建立的常用检测环境雌激素方法 | 第15-17页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第17-19页 |
| 1 实验目的、意义 | 第17页 |
| 2 实验内容 | 第17-18页 |
| 3 实验流程图 | 第18-19页 |
| 第三章 ERα及 ERE4 基因克隆及重组质粒构建 | 第19-31页 |
| 1 材料与试剂 | 第19-21页 |
| ·菌种 | 第19页 |
| ·试剂 | 第19页 |
| ·试剂配制 | 第19-21页 |
| 2 方法 | 第21-27页 |
| ·ERα基因的克隆 | 第21-23页 |
| ·重组载体 pEGFP-ERα的构建及筛选 | 第23-27页 |
| ·ERE4 基因克隆及重组载体 pGL3- ERE4-luc 构建 | 第27页 |
| 3 结果 | 第27-29页 |
| ·ERα PCR 扩增片段 | 第27-28页 |
| ·重组质粒 pEGFP-ERα PCR 及双酶切鉴定 | 第28页 |
| ·重组质粒 pGL3-ERE4-luc 双酶切鉴定 | 第28-29页 |
| ·测序鉴定 | 第29页 |
| 4 讨论 | 第29-31页 |
| 第四章 细胞培养及细胞转染 | 第31-40页 |
| 1 材料与试剂 | 第31页 |
| ·材料与试剂 | 第31页 |
| ·试剂配制 | 第31页 |
| 2 方法 | 第31-35页 |
| ·细胞复苏 | 第31-32页 |
| ·HeLa 细胞传代培养 | 第32页 |
| ·细胞冻存 | 第32页 |
| ·MTT 实验 | 第32-33页 |
| ·细胞转染及阳性单克隆细胞的筛选 | 第33页 |
| ·HeLa/ERα阳性单克隆细胞株鉴定 | 第33-35页 |
| ·pGL3-ERE4-luc 质粒稳定转染 HeLa/ERα细胞 | 第35页 |
| 3 结果 | 第35-39页 |
| ·MTT 实验检测分析 | 第35-36页 |
| ·pEGFP-ERα质粒转染 HeLa 细胞 | 第36-37页 |
| ·pGL3-ERE4-luc 质粒转染 HeLa/ERα细胞 | 第37-38页 |
| ·ERα及 GAPDH 荧光定量 PCR 引物溶解曲线 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-40页 |
| 第五章 污水雌激素含量检测 | 第40-45页 |
| 1 材料与试剂 | 第40页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·试剂与仪器 | 第40页 |
| 2 方法 | 第40-41页 |
| ·绘制 E2-荧光素酶活性标准曲线 | 第40-41页 |
| ·检测污水样品中雌激素含量 | 第41页 |
| 3 结果 | 第41-44页 |
| ·绘制 E2-荧光素酶活性标准曲线 | 第41-42页 |
| ·水样雌激素含量检测 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-45页 |
| 第六章 环境雌激素对家蚕生长发育的影响 | 第45-48页 |
| 1 材料与试剂 | 第45页 |
| ·材料 | 第45页 |
| 2 方法 | 第45页 |
| ·家蚕饲料的准备 | 第45页 |
| ·家蚕孵化及饲养 | 第45页 |
| ·五龄蚕血淋巴雌激素浓度的检测 | 第45页 |
| 3 结果 | 第45-47页 |
| ·饲料配制 | 第45页 |
| ·雌激素浓度对家蚕生长发育的影响分析 | 第45-46页 |
| ·结茧、羽化情况 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
