| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-19页 |
| 1. 植物脂转移蛋白研究进展 | 第12-14页 |
| ·脂转移蛋白简介 | 第12页 |
| ·植物脂转移蛋白的细胞定位 | 第12-13页 |
| ·LTP参与角质和蜡质形成 | 第13页 |
| ·LTP的抗菌功能 | 第13-14页 |
| 2. 绿色荧光蛋白GFP | 第14-15页 |
| ·GFP的结构 | 第14页 |
| ·GFP的应用 | 第14-15页 |
| 3. EARLI1亚家族基因研究进展 | 第15页 |
| 4. AZI1基因研究进展 | 第15-17页 |
| 5. pET原核表达载体和pCAMBIA植物表达载体 | 第17页 |
| 6. DAB和台盼蓝染色 | 第17-18页 |
| 7. 本研究的内容和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 AZI1-GFP融合表达载体的构建 | 第19-28页 |
| 1. 材料与方法 | 第19-25页 |
| ·材料 | 第19页 |
| ·植物材料和细菌菌株 | 第19页 |
| ·拟南芥的培养和生长条件 | 第19页 |
| ·试剂与仪器 | 第19页 |
| ·方法 | 第19-25页 |
| ·AZI1基因的克隆 | 第19-21页 |
| ·引物的设计 | 第20页 |
| ·CTAB法提取拟南芥基因组DNA | 第20页 |
| ·AZI1基因的PCR扩增 | 第20-21页 |
| ·PCR产物的胶回收 | 第21页 |
| ·质粒pCAMBIA1302提取 | 第21-22页 |
| ·PCR产物与载体的双酶切 | 第22页 |
| ·AZI1-GFP融合表达载体的构建 | 第22-25页 |
| ·目的片段与pCAMBIA1302载体的连接 | 第22页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第22-23页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第23页 |
| ·菌落PCR和双酶切鉴定 | 第23-25页 |
| ·测序 | 第25页 |
| ·农杆菌LBA4404感受态细胞的制备 | 第25页 |
| ·冻融法转化农杆菌感受态细胞 | 第25页 |
| 2. 结果 | 第25-27页 |
| ·大肠杆菌菌落PCR鉴定 | 第25-26页 |
| ·AZI1-GFP融合表达载体的双酶切鉴定 | 第26页 |
| ·测序结果 | 第26-27页 |
| ·农杆菌的菌落PCR鉴定 | 第27页 |
| 3. 小结 | 第27-28页 |
| 第三章 AZI1在转基因烟草中的定位及其对灰霉菌的抗性 | 第28-43页 |
| 1. 材料与方法 | 第28-35页 |
| ·材料与试剂 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-35页 |
| ·转基因烟草的再生 | 第28-29页 |
| ·转基因烟草的分子生物学鉴定 | 第29-34页 |
| ·转基因烟草的PCR鉴定 | 第29页 |
| ·转基因烟草的RT-PCR鉴定 | 第29-31页 |
| ·转基因烟草的Southern blotting分析 | 第31-34页 |
| ·HyPRP蛋白AZI1在转基因烟草中的亚细胞定位 | 第34-35页 |
| ·AZI1基因对灰霉菌的抗性分析 | 第35页 |
| ·DAB(3,3-二氨基联苯胺)染色 | 第35页 |
| ·台盼蓝染色分析 | 第35页 |
| ·灰霉菌侵染前后转基因烟草中AZI1基因的表达分析 | 第35页 |
| ·转基因拷贝数对GFP表达水平的影响 | 第35页 |
| ·拷贝数对转基因烟草抗性水平的影响 | 第35页 |
| 2. 结果 | 第35-42页 |
| ·转AZI1-GFP基因烟草的获得 | 第35-36页 |
| ·转基因烟草的PCR鉴定 | 第36-37页 |
| ·转基因烟草的Southern印迹分析 | 第37页 |
| ·AZI1蛋白的亚细胞定位 | 第37-39页 |
| ·转35S：：AZI1-GFP基因烟草叶片细胞中的GFP荧光观察 | 第37-38页 |
| ·转35S：：AZI1-GFP基因烟草根中的GFP荧光观察 | 第38-39页 |
| ·不同转基因烟草根中的GFP荧光观察 | 第39页 |
| ·拷贝数对AZI1-GFP表达水平的影响 | 第39页 |
| ·转AZI1-GFP基因烟草对灰霉菌的抗性 | 第39-41页 |
| ·DAB染色结果 | 第40页 |
| ·台盼蓝染色结果 | 第40-41页 |
| ·灰霉菌侵染前后转基因烟草中AZI1-GFP基因的表达分析 | 第41页 |
| ·不同拷贝数对转基因烟草抗性水平的影响 | 第41-42页 |
| 3. 小结 | 第42-43页 |
| 第四章 利用大肠杆菌表达AZI1重组蛋白 | 第43-53页 |
| 1. 材料 | 第43-44页 |
| ·材料与细菌菌种 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43页 |
| ·SDS-PAGE相关溶液 | 第43-44页 |
| ·SDS-PAGE凝胶配方 | 第44页 |
| ·Western印迹实验相关溶液 | 第44页 |
| 2. 方法 | 第44-49页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第44-47页 |
| ·pET28a质粒DNA提取 | 第44-45页 |
| ·目的片段的酶切与胶回收 | 第45页 |
| ·目的片段与pET28a载体的连接 | 第45-46页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的转化 | 第46页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第46-47页 |
| ·细菌菌落PCR鉴定 | 第46页 |
| ·酶切鉴定 | 第46-47页 |
| ·测序 | 第47页 |
| ·用重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞 | 第47页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第47-48页 |
| ·重组蛋白的Western免疫印迹分析 | 第48-49页 |
| 3. 结果 | 第49-52页 |
| ·大肠杆菌DH5a的菌落PCR鉴定 | 第49页 |
| ·双酶切鉴定 | 第49页 |
| ·序列测定 | 第49-50页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)的菌落PCR鉴定 | 第50页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第50-51页 |
| ·目的蛋白的Western blotting分析 | 第51-52页 |
| 4. 小结 | 第52-53页 |
| 第五章 目的蛋白的纯化及抗性分析 | 第53-60页 |
| 1. 材料与试剂 | 第53页 |
| ·菌株 | 第53页 |
| ·培养基 | 第53页 |
| ·试剂 | 第53页 |
| 2. 方法 | 第53-55页 |
| ·AZI1蛋白的纯化 | 第53-54页 |
| ·镍离子螯合层析纯化目的蛋白 | 第53-54页 |
| ·目的蛋白的浓缩和检测 | 第54页 |
| ·AZI1蛋白的活性分析 | 第54-55页 |
| ·AZI1蛋白对灰霉菌的抑制作用 | 第54页 |
| ·AZI1蛋白对酵母菌的抑制作用分析 | 第54-55页 |
| ·酵母细胞膜通透性分析 | 第55页 |
| 3. 结果 | 第55-58页 |
| ·AZI1蛋白的纯化结果 | 第55-56页 |
| ·AZI1蛋白对灰霉菌的抑制作用 | 第56-57页 |
| ·AZI1蛋白对酵母菌的抑制作用 | 第57页 |
| ·酵母细胞膜通透性分析 | 第57-58页 |
| 小结 | 第58-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 1 研究结论 | 第60页 |
| 2 本研究的特色和创新 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
