| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-23页 |
| ·果胶和果胶甲基酯酶 | 第12-17页 |
| ·果胶 | 第12-13页 |
| ·果胶甲基酯酶 | 第13-17页 |
| ·果胶甲基酯酶在饮料行业的应用 | 第17-19页 |
| ·果胶甲基酯酶在果汁生产中的作用 | 第17-18页 |
| ·黑曲霉果胶甲基酯酶在酸性果汁生产中的优势 | 第18页 |
| ·国内果汁生产用果胶甲基酯酶的研究进展 | 第18-19页 |
| ·真菌植物病原体与其致病因子 | 第19-21页 |
| ·真菌植物病原体--黄曲霉 | 第19页 |
| ·降解植物细胞壁的酶类 | 第19-20页 |
| ·致病因子--果胶甲基酯酶 | 第20-21页 |
| ·果胶甲基酯酶抑制剂 | 第21页 |
| ·选题依据和研究内容 | 第21-23页 |
| ·选题依据 | 第21-22页 |
| ·研究内容 | 第22-23页 |
| 2 黑曲霉果胶甲基酯酶在毕赤酵母中的克隆表达,纯化及性质表征 | 第23-37页 |
| ·引言 | 第23页 |
| ·材料和方法 | 第23-28页 |
| ·实验材料 | 第23-24页 |
| ·黑曲霉果胶甲基酯酶基因的获得 | 第24页 |
| ·黑曲霉果胶甲基酯酶表达载体的构建 | 第24-25页 |
| ·表达载体转化毕赤酵母GS115 | 第25页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第25-26页 |
| ·重组蛋白表达时间的优化 | 第26页 |
| ·果胶甲基酯酶活性的检测方法 | 第26页 |
| ·果胶甲基酯酶浓度和纯度的检测方法 | 第26-27页 |
| ·黑曲霉果胶甲基酯酶的分离纯化 | 第27页 |
| ·黑曲霉果胶甲基酯酶的性质表征 | 第27-28页 |
| ·结果与分析 | 第28-35页 |
| ·黑曲霉果胶甲基酯酶的表达载体构建及阳性克隆的筛选 | 第28-29页 |
| ·分泌表达的确定 | 第29-30页 |
| ·表达时间的优化 | 第30-31页 |
| ·黑曲霉果胶甲基酯酶的分离纯化 | 第31-32页 |
| ·重组黑曲霉果胶甲基酯酶的性质表征 | 第32-35页 |
| ·小结 | 第35-37页 |
| 3. 黄曲霉果胶甲基酯酶的重组表达,纯化及其抑制剂筛选 | 第37-49页 |
| ·引言 | 第37页 |
| ·材料和方法 | 第37-41页 |
| ·实验材料 | 第37-38页 |
| ·黄曲霉果胶甲基酯酶基因的获得 | 第38页 |
| ·黄曲霉果胶甲基酯酶的表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·表达载体转化毕赤酵母GS115 | 第39页 |
| ·阳性克隆筛选 | 第39页 |
| ·重组菌株的诱导表达及表达时间的优化 | 第39页 |
| ·果胶甲基酯酶活性的检测方法 | 第39页 |
| ·蛋白质定性,定量的方法 | 第39-40页 |
| ·黄曲霉果胶甲基酯酶的分离纯化 | 第40页 |
| ·黄曲霉果胶甲基酯酶的性质表征 | 第40-41页 |
| ·黄曲霉果胶甲基酯酶的抑制剂检测 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-47页 |
| ·黄曲霉果胶甲基酯酶的表达载体构建及阳性克隆的筛选 | 第41-42页 |
| ·黄曲霉果胶甲基酯酶的表达及诱导时间的优化 | 第42-43页 |
| ·黄曲霉果胶甲基酯酶的分离纯化 | 第43-44页 |
| ·重组黄曲霉果胶甲基酯酶的性质表征 | 第44-46页 |
| ·抑制剂的测定 | 第46-47页 |
| ·小结 | 第47-49页 |
| 4 黑曲霉果胶甲基酯酶的原核表达及结晶条件研究 | 第49-56页 |
| ·引言 | 第49页 |
| ·材料与方法 | 第49-51页 |
| ·实验材料 | 第49-50页 |
| ·黑曲霉果胶甲基酯酶基因的获取 | 第50页 |
| ·pET-28a(+)-HIS-ANPME表达载体的构建 | 第50页 |
| ·pET-28a(+)-HIS-ANPME表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3) | 第50页 |
| ·重组菌株的表达条件优化 | 第50-51页 |
| ·Western blot检测重组黑曲霉果胶甲基酯酶的表达情况 | 第51页 |
| ·重组黑曲霉果胶甲基酯酶的分离纯化策略 | 第51页 |
| ·SDS-PAGE和反向色谱柱鉴定蛋白质纯度 | 第51页 |
| ·蛋白质晶体的生长 | 第51页 |
| ·结果与分析 | 第51-54页 |
| ·重组黑曲霉果胶甲基酯酶在大肠杆菌BL21(DE3)中的克隆表达 | 第51-53页 |
| ·重组黑曲霉果胶甲基酯酶的分离纯化 | 第53页 |
| ·重组黑曲霉果胶甲基酯酶晶体的生长 | 第53-54页 |
| ·小结 | 第54-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 附录A 常用仪器一览表 | 第62-63页 |
| 附录B 大肠杆菌转化 | 第63-64页 |
| 附录C 酵母转化 | 第64-65页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
