| 中文摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-37页 |
| 1 核移植技术基础理论的研究进展 | 第13-20页 |
| ·哺乳动物早期胚胎基因组的转录激活与分化 | 第14-15页 |
| ·核移植过程中供体与受体细胞周期的协调 | 第15-16页 |
| ·核质互作 | 第16-20页 |
| 2 核重编程中甲基化模式的研究进展 | 第20-35页 |
| ·DNA甲基化作用 | 第21-23页 |
| ·DNA甲基化的生物学意义 | 第23-26页 |
| ·DNA甲基化转移酶 | 第26-30页 |
| ·重编码过程中甲基化的动态模式 | 第30-35页 |
| 3 研究的目的意义及主要内容 | 第35-37页 |
| ·研究的目的意义 | 第35-36页 |
| ·试验的主要内容 | 第36-37页 |
| 第二章 构建携带fat-1&fat-2基因的重构胚 | 第37-47页 |
| 1 引言 | 第37-38页 |
| 2 材料与方法 | 第38页 |
| ·试验材料 | 第38页 |
| ·试剂配制 | 第38页 |
| ·试验仪器 | 第38页 |
| 3 试验方法 | 第38-41页 |
| ·原代细胞的培养 | 第38页 |
| ·细胞的传代培养 | 第38-39页 |
| ·转染 | 第39页 |
| ·筛选及鉴定 | 第39页 |
| ·细胞冷冻与复苏 | 第39-40页 |
| ·卵母细胞采集及卵母细胞的成熟 | 第40页 |
| ·核移植 | 第40-41页 |
| ·荧光显微镜观察 | 第41页 |
| 4 试验结果 | 第41-44页 |
| ·阳性细胞挑选结果 | 第41-42页 |
| ·重构胚的发育情况 | 第42-43页 |
| ·阳性重构胚的筛选 | 第43-44页 |
| 5 讨论 | 第44-47页 |
| ·外源基因的表达 | 第44-45页 |
| ·OSM核移植方式的优势 | 第45页 |
| ·重构胚的激活 | 第45-47页 |
| 第三章 核移植胚胎的甲基化水平检测 | 第47-56页 |
| 1 引言 | 第47-48页 |
| 2 试验材料 | 第48-49页 |
| ·试验样本 | 第48页 |
| ·试验试剂 | 第48页 |
| ·试验仪器 | 第48-49页 |
| 3 试验方法 | 第49-52页 |
| ·卵母细胞采集及卵母细胞的成熟 | 第49页 |
| ·核移植 | 第49-50页 |
| ·体外受精 | 第50-51页 |
| ·胚胎抗5-MC免疫荧光检测 | 第51-52页 |
| 4 试验结果 | 第52-53页 |
| ·早期胚胎抗-5MC单克隆抗体的免疫荧光结果 | 第52-53页 |
| 5 讨论 | 第53-54页 |
| ·SCNT与IVF胚胎合子期甲基化模式的对比 | 第53-54页 |
| ·SCNT与IVF胚胎各发育阶段甲基化模式的对比 | 第54页 |
| 6 结论 | 第54-56页 |
| 第四章 SCNT胚胎父源和母源印记控制区的异常甲基化模式 | 第56-77页 |
| 1 引言 | 第56-57页 |
| 2 试验材料 | 第57页 |
| ·试验样本 | 第57页 |
| ·试验试剂 | 第57页 |
| ·试验仪器 | 第57页 |
| 3 试验步骤 | 第57-61页 |
| ·IVF以及SCNT胚胎的筛选 | 第57页 |
| ·总DNA的亚硫酸盐变性及DNA提取 | 第57-58页 |
| ·引物设计 | 第58-59页 |
| ·PCR扩增 | 第59页 |
| ·PCR产物的回收 | 第59-60页 |
| ·目的基因的连接及转化 | 第60页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第60页 |
| ·数据分析 | 第60-61页 |
| 4 试验结果 | 第61-72页 |
| ·目标基因扩增结果 | 第61页 |
| ·甲基化测定结果 | 第61-63页 |
| ·两个ICR区在早期胚胎发育期中的印记模式 | 第63-65页 |
| ·SCNT早期胚两个ICR区甲基化水平较IVF胚差异的均一化处理 | 第65-67页 |
| ·两个ICR区各甲基化位点的测定结果 | 第67-70页 |
| ·SCNT胚胎各CpG位点的甲基化水平较IVF胚的变化程度 | 第70-71页 |
| ·SCNT胚各CpG位点甲基化水平较IVF胚差异的均一化处理 | 第71-72页 |
| 5 讨论 | 第72-76页 |
| ·SCNT胚胎父源DNA的甲基化动态模式 | 第73页 |
| ·SCNT胚胎母源DNA的甲基化动态模式 | 第73-74页 |
| ·两个ICR区异常印记对胚胎的影响 | 第74-76页 |
| ·影响SCNT胚胎印迹区甲基化模式的关键CpG位点 | 第76页 |
| 6 结论 | 第76-77页 |
| 第五章 核移植胚胎中甲基化相关调控因子表达情况的研究 | 第77-93页 |
| 1 引言 | 第77-78页 |
| 2 试验材料 | 第78页 |
| ·试验样本 | 第78页 |
| ·试验试剂 | 第78页 |
| ·试验仪器 | 第78页 |
| 3 试验方法 | 第78-82页 |
| ·总RNA的提取 | 第78-79页 |
| ·cDNA第一条链合成 | 第79页 |
| ·引物设计 | 第79-80页 |
| ·常规PCR扩增 | 第80页 |
| ·标准品的制作 | 第80页 |
| ·荧光定量PCR | 第80-81页 |
| ·基因mRNA表达水平计算 | 第81页 |
| ·统计分析 | 第81-82页 |
| 4 试验结果 | 第82-89页 |
| ·PCR扩增结果 | 第82-83页 |
| ·荧光定量PCR扩增产物的特异性 | 第83-84页 |
| ·SCNT与IVF胚胎中甲基化调节因子的表达情况 | 第84-86页 |
| ·SCNT与IVF胚胎各发育阶段中甲基化调节因子的表达趋势 | 第86-87页 |
| ·SCNT胚10个基因表达量较IVF胚差异的均一化处理 | 第87-89页 |
| 5 讨论 | 第89-92页 |
| ·SCNT胚胎中甲基化转移酶的表达模式 | 第89-90页 |
| ·SCNT胚胎中甲基化结合蛋白的表达模式 | 第90-91页 |
| ·SCNT胚胎中甲基化调控因子的表达模式 | 第91-92页 |
| 6 结论 | 第92-93页 |
| 第六章 结论与展望 | 第93-95页 |
| 1 本研究的结论 | 第93页 |
| 2 本研究创新点 | 第93-94页 |
| 3 后续试验的研究方向 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-113页 |
| 附录1 试验主要试剂配制 | 第113-114页 |
| 附录2 试验主要仪器设备 | 第114-115页 |
| 附录3 主要英文缩写检索表 | 第115-117页 |
| 致谢 | 第117页 |
