| 摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-17页 |
| 英文缩写词表 | 第17-18页 |
| 前言 | 第18-20页 |
| 第一部分 文献综述 | 第20-41页 |
| 第一节 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的免疫毒性及作用机理研究进展 | 第20-30页 |
| 1 DON的理化性质 | 第20页 |
| 2 DON的毒性作用研究概况 | 第20-25页 |
| ·胃肠毒性 | 第21页 |
| ·器官组织病理学毒性 | 第21-22页 |
| ·细胞免疫毒性 | 第22-23页 |
| ·对体液免疫的影响 | 第23-24页 |
| ·对细胞因子的影响 | 第24-25页 |
| ·对非特异性免疫功能的影响 | 第25页 |
| 3 DON毒性机制的研究进展 | 第25-30页 |
| ·DON与氧化应激 | 第26页 |
| ·DON与DNA及线粒体损伤 | 第26-27页 |
| ·DON与细胞凋亡 | 第27-28页 |
| ·DON与钙稳态 | 第28页 |
| ·DON抑制蛋白质和DNA合成 | 第28-30页 |
| 第二节 玉米赤霉烯酮的免疫毒性及作用机理研究进展 | 第30-38页 |
| 1 ZEA的理化性质 | 第30页 |
| 2 ZEA的毒性作用研究 | 第30-34页 |
| ·对免疫器官的影响 | 第31-32页 |
| ·对细胞免疫及体液免疫的影响 | 第32页 |
| ·对细胞因子的影响 | 第32-33页 |
| ·对非特异性免疫功能的影响 | 第33页 |
| ·生殖毒性 | 第33-34页 |
| 3 ZEA毒性机制的研究进展 | 第34-38页 |
| ·生殖和致畸毒性机理 | 第34-35页 |
| ·ZEA与氧化胁迫 | 第35页 |
| ·ZEA与DNA损伤 | 第35-36页 |
| ·ZEA与细胞凋亡 | 第36-38页 |
| 第三节 DON与ZEA联合毒性作用及机理研究进展 | 第38-41页 |
| 1 霉菌毒素互作效应的分类 | 第38页 |
| 2 DON与ZEA在不同动物的毒性互作效应研究 | 第38-41页 |
| ·猪 | 第38-39页 |
| ·家禽 | 第39-40页 |
| ·其他动物 | 第40-41页 |
| 第二部分 本研究目的意义、内容与技术路线 | 第41-44页 |
| 1 研究目的意义 | 第41页 |
| 2 研究内容 | 第41-42页 |
| ·预试验 | 第41页 |
| ·正式试验 | 第41-42页 |
| 3 研究的技术路线 | 第42-44页 |
| ·预试验 | 第42-43页 |
| ·正式试验 | 第43-44页 |
| 第三部分 试验研究内容 | 第44-112页 |
| 第一章 DON、ZEA单独及联合染毒对体外培养鸡脾脏淋巴细胞毒性作用浓度的确定 | 第44-57页 |
| 1 材料 | 第44-45页 |
| ·试验动物 | 第44页 |
| ·主要仪器 | 第44页 |
| ·主要试剂 | 第44-45页 |
| 2 方法 | 第45-47页 |
| ·脾脏淋巴细胞悬液的制备 | 第45页 |
| ·DON、ZEA单独染毒的IC_(50)测定 | 第45-46页 |
| ·试验设计操作程序 | 第46-47页 |
| ·检测指标及方法 | 第47页 |
| ·淋巴细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性的测定 | 第47页 |
| ·透射电镜对细胞超微结构观察 | 第47页 |
| ·流式细胞仪测定细胞凋亡率和坏死率 | 第47页 |
| ·数据分析 | 第47页 |
| 3 结果 | 第47-53页 |
| ·DON、ZEA浓度筛选结果及各组的作用浓度 | 第47-48页 |
| ·DON、ZEA及其联合作用对鸡脾脏淋巴细胞培养上清液中LDH活性的影响 | 第48-51页 |
| ·电镜观察结果 | 第51-52页 |
| ·DON、ZEA及其联合染毒对鸡脾脏淋巴细胞凋亡率、坏死率的影响 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-56页 |
| ·DON、ZEA对鸡脾脏淋巴细胞增殖抑制率的影响 | 第53-55页 |
| ·细胞凋亡在DON、ZEA联合所致细胞死亡过程中的作用 | 第55-56页 |
| 5 小结 | 第56-57页 |
| 第二章 DON、ZEA单独及联合染毒对体外培养鸡脾脏淋巴细胞氧化损伤的研究 | 第57-74页 |
| 1 材料 | 第57-58页 |
| ·试验动物 | 第57-58页 |
| ·主要仪器 | 第58页 |
| ·主要试剂 | 第58页 |
| 2 方法 | 第58-59页 |
| ·脾脏淋巴细胞悬液的制备、培养及处理 | 第58页 |
| ·细胞内抗氧化酶活性(GSH-PX、SOD、CAT)、GSH及MDA含量的测定 | 第58页 |
| ·流式细胞仪测定细胞内活性氧(ROS) | 第58-59页 |
| ·脾脏淋巴细胞线粒体膜电位的检测 | 第59页 |
| ·数据分析 | 第59页 |
| 3 结果 | 第59-69页 |
| ·DON、ZEA单独及联合染毒对鸡脾脏淋巴细胞内抗氧化酶活性的影响 | 第59-63页 |
| ·DON、ZEAL及其联合染毒对鸡脾脏淋巴细胞内MDA与GSH含量的影响 | 第63-66页 |
| ·DON、ZEA及其联合对鸡脾脏淋巴细胞内活性氧与线粒体膜电位的影响 | 第66-69页 |
| 4 讨论 | 第69-73页 |
| ·DON、ZEA及其联合染毒对鸡脾脏淋巴细胞脂质过氧化反应的影响 | 第70-71页 |
| ·线粒体膜电位降低在DON、ZEA及其联合染毒所致鸡脾脏淋巴细胞氧化损伤过程中的作用 | 第71-73页 |
| 5 小结 | 第73-74页 |
| 第三章 DON、ZEA单独及联合染毒对体外培养鸡脾脏淋巴细胞内环境稳态的影响 | 第74-91页 |
| 1 材料 | 第74-75页 |
| ·试验动物 | 第74页 |
| ·主要仪器 | 第74页 |
| ·主要试剂 | 第74-75页 |
| 2 方法 | 第75-78页 |
| ·脾脏淋巴细胞悬液的制备、培养及处理 | 第75页 |
| ·细胞内钙离子水平([CA~(2+)]I)测定—流式细胞仪 | 第75页 |
| ·细胞内PH值测定—流式细胞仪 | 第75页 |
| ·细胞膜标志酶(NA~+/K~+-ATP及CA~(2+)-ATP)测定 | 第75-76页 |
| ·钙调蛋白(CAM)MRNA的表达--实时荧光定量PCR法 | 第76-78页 |
| ·引物设计与合成 | 第76页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第76页 |
| ·反转录合成cDNA | 第76-77页 |
| ·目的基因RT-qPCR条件的优化 | 第77-78页 |
| ·Real Time PCR扩增 | 第78页 |
| ·数据统计分析 | 第78页 |
| 3 结果 | 第78-87页 |
| ·DON、ZEA及其联合染毒对鸡脾脏淋巴细胞内钙离子水平的影响 | 第78-81页 |
| ·DON、ZEA及其联合染毒对鸡脾脏淋巴细胞胞内PH的影响 | 第81-82页 |
| ·DON、ZEA及其联合染毒对鸡脾脏淋巴细胞膜ATP酶活性的影响 | 第82-86页 |
| ·DON、ZEA联合染毒对鸡脾脏淋巴细胞内钙调蛋白MRNA表达的影响 | 第86-87页 |
| 4 讨论 | 第87-90页 |
| ·胞内钙超载在DON、ZEA所致鸡脾脏淋巴细胞凋亡性死亡过程中的作用 | 第88-89页 |
| ·胞内酸化在DON、ZEA所致鸡脾脏淋巴细胞凋亡性死亡过程中的作用 | 第89-90页 |
| 5 小结 | 第90-91页 |
| 第四章 DON、ZEA单独及联合染毒对体外培养鸡脾脏淋巴细胞凋亡损伤的分子机制研究 | 第91-112页 |
| 1 材料 | 第91-92页 |
| ·试验动物 | 第91页 |
| ·主要仪器 | 第91页 |
| ·主要试剂 | 第91-92页 |
| 2 方法 | 第92-94页 |
| ·脾脏淋巴细胞悬液的制备、培养及处理 | 第92页 |
| ·脾脏淋巴细胞DNA损伤的检测 | 第92页 |
| ·脾脏淋巴细胞的上清液中BCl-2,P53、BAX、BAK-1及CASPASE-3含量测定(ELISA法检测) | 第92页 |
| ·染毒处理鸡脾脏淋巴细胞内凋亡调控基因BCl-2,P53、BAX、BAK-1及CASPASE-3的MRNA的表达 | 第92-94页 |
| ·引物设计与合成 | 第92-93页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第93页 |
| ·反转录合成cDNA | 第93页 |
| ·目的基因RT-qPCR条件的优化 | 第93-94页 |
| ·RealTimePCR扩增 | 第94页 |
| ·数据统计分析 | 第94页 |
| 3 结果 | 第94-107页 |
| ·DNA LADDER检测结果 | 第94-95页 |
| ·DON、ZEA及其联合染毒对鸡脾脏淋巴细胞培养上清液中BCl-2,P53、BAX、BAK-1及CASPASE-3含量的影响 | 第95-101页 |
| ·DON、ZEA及其联合染毒对鸡脾脏淋巴细胞内凋亡调控基因BCl-2、P53、BAX、BAK-1及CASPASE-3 MRNA表达的影响 | 第101-107页 |
| 4 讨论 | 第107-110页 |
| ·DON、ZEA对鸡脾脏淋巴细胞DNA损伤效应 | 第107-108页 |
| ·DON、ZEA联合对鸡脾脏淋巴细胞凋亡调控基因BCl-2,P53、BAX、BAK-1及CASPASE-3的影响 | 第108-110页 |
| ·Caspase基因 | 第108页 |
| ·p53基因 | 第108-109页 |
| ·Bcl-2基因家族 | 第109-110页 |
| 5 小结 | 第110-112页 |
| 第四部分 结论 | 第112-113页 |
| 本研究的创新点 | 第113页 |
| 有待进一步研究的问题 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-137页 |
| 附录 | 第137-148页 |
| 致谢 | 第148-149页 |
| 作者简介 | 第149-150页 |
| 攻读博士期间发表的学术论文及获奖情况 | 第150页 |
