| 前言 | 第1-12页 |
| 摘要 | 第12-14页 |
| 文献综述 | 第14-68页 |
| 第一章 哺乳动物转基因技术研究进展 | 第14-50页 |
| 1 哺乳动物转基因方法的研究 | 第14-23页 |
| ·原核期胚胎的显微注射技术 | 第14-16页 |
| ·显微注射技术原理及发展 | 第14-16页 |
| ·显微注射技术的优点及缺点 | 第16页 |
| ·逆转录病毒载体侵染技术 | 第16-17页 |
| ·逆转录病毒载体侵染技术原理及发展 | 第16-17页 |
| ·逆转录病毒载体侵染技术的优点和不足 | 第17页 |
| ·精子载体技术 | 第17-18页 |
| ·精子载体技术的原理与发展 | 第17-18页 |
| ·精子载体技术的优点及不足 | 第18页 |
| ·体细胞核移植技术 | 第18-20页 |
| ·体细胞核移植技术的原理及发展 | 第19页 |
| ·体细胞核移植技术的优点及不足 | 第19-20页 |
| ·ES细胞介导技术 | 第20-21页 |
| ·ES细胞介导技术的原理及发展 | 第20-21页 |
| ·ES细胞介导技术的优点及不足 | 第21页 |
| ·PGCs技术 | 第21页 |
| ·胞内单精注射技术 | 第21-22页 |
| ·受体介导的基因转移 | 第22-23页 |
| 2 提高转基因的策略 | 第23-33页 |
| ·外源基因的整合机制 | 第23-25页 |
| ·转基因整合机制概述 | 第23-25页 |
| ·外源基因整合的位置效应 | 第25页 |
| ·转基因表达载体的构建 | 第25-29页 |
| ·目的基因选择 | 第26页 |
| ·启动子的选择 | 第26页 |
| ·提高外源基因表达的其他策略 | 第26-29页 |
| ·应用于转基因的基因打靶技术 | 第29-33页 |
| ·基因打靶策略 | 第29-32页 |
| ·打靶载体的筛选 | 第32-33页 |
| 3 转基因技术的应用及展望 | 第33-38页 |
| ·乳腺生物反应器 | 第33-35页 |
| ·乳腺生物反应器的定义 | 第33页 |
| ·乳腺生物反应器的研究发展 | 第33-35页 |
| ·乳腺生物反应器的优点 | 第35页 |
| ·特定基因功能的研究 | 第35-36页 |
| ·在医学领域中的应用 | 第36-37页 |
| ·制造人类疾病的转基因动物模型 | 第36页 |
| ·组织器官移植 | 第36-37页 |
| ·在畜牧业中的应用 | 第37-38页 |
| ·促进动物生长，提高畜产品品质 | 第37页 |
| ·动物抗病育种 | 第37-38页 |
| 4 转基因技术存在的问题及建议 | 第38-40页 |
| ·转基因技术存在的问题 | 第38-39页 |
| ·成本高、整合效率总体比较低 | 第38页 |
| ·转基因表达水平低 | 第38页 |
| ·难以控制转基因在宿主基因组中的行为 | 第38-39页 |
| ·目的基因与动物生产性状的多基因矛盾突出 | 第39页 |
| ·转基因动物及其产品的安全性问题 | 第39页 |
| ·建议 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-50页 |
| 第二章 绿色荧光蛋白(GFP)-理想的转基因报告系统 | 第50-68页 |
| 1 转基因报告系统的研究进展 | 第50-53页 |
| ·氯霉素转乙酰酶(phenicolacetyl transferase，CAT)报告基因 | 第50-51页 |
| ·β-半乳糖苷酶报告基因(β-galatosidase，β-gal) | 第51页 |
| ·β-葡萄糖苷酸酶(β-glucuronidase，β-GUS)报告基因 | 第51页 |
| ·分泌型碱性磷酸酶(secreted alkaline phosphatase，SEAP)报告基因 | 第51-52页 |
| ·荧光素酶(luciferase，Luc)报告基因 | 第52页 |
| ·绿荧光蛋白(green fluorescent proteins，GFP)报告基因 | 第52-53页 |
| 2 GFP的研究进展 | 第53-59页 |
| ·GFP的理化特性 | 第54-56页 |
| ·GFP的组成 | 第54-55页 |
| ·GFP的发光机制 | 第55-56页 |
| ·GFP作为报告基因的优点 | 第56-57页 |
| ·不加任何底物，荧光性质稳定 | 第56页 |
| ·分子量小，对细胞无毒性 | 第56-57页 |
| ·使用方便，可行活细胞实时定位观察 | 第57页 |
| ·显著改善的荧光特性 | 第57页 |
| ·影响GFP表达强度的因素 | 第57-59页 |
| ·表达温度对GFP荧光强度的影响 | 第57-58页 |
| ·酸碱对GFP荧光强度的影响 | 第58页 |
| ·化学试剂对GFP荧光强度的影响 | 第58页 |
| ·表达时间对GFP荧光强度的影响 | 第58-59页 |
| 3 GFP在生物学领域的应用 | 第59-63页 |
| ·转基因动物的研究 | 第59-60页 |
| ·发育分子机理研究 | 第60页 |
| ·筛选新的药物 | 第60页 |
| ·跟踪观察病原菌 | 第60-61页 |
| ·用于临床检验 | 第61页 |
| ·在基因治疗研究中的应用 | 第61-62页 |
| ·报告基因的特殊应用 | 第62-63页 |
| 4 存在的问题及展望 | 第63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 试验研究 | 第68-100页 |
| 第三章 昆明白小鼠原核胚体外培养的研究 | 第68-76页 |
| 1 材料和方法 | 第68-69页 |
| ·小鼠的超排处理和原核胚的获得 | 第68页 |
| ·输卵管上皮共培养的制备 | 第68页 |
| ·试验设计及胚胎体外培养 | 第68-69页 |
| ·胚胎细胞染色计数及试验数据统计分析 | 第69页 |
| 2 结果 | 第69-72页 |
| ·FBS和BSA对小鼠胚胎发育的影响 | 第69-70页 |
| ·输卵管上皮共培养对小鼠胚胎发育的作用 | 第70-72页 |
| ·胚胎体内和体外发育比较 | 第72页 |
| 3 讨论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-76页 |
| 第四章 小鼠胚胎的冷冻保存 | 第76-82页 |
| 1 材料和方法 | 第76-77页 |
| ·冷冻液结晶变化试验分组 | 第76页 |
| ·试验动物的超排处理 | 第76页 |
| ·小鼠胚胎的收集及冷冻方法 | 第76-77页 |
| ·小鼠胚胎的解冻和体外培养 | 第77页 |
| 2 结果 | 第77-79页 |
| ·不同植冰温度下冷冻液的结晶变化 | 第77-78页 |
| ·不同冷冻方法对小鼠胚胎冷冻效果的比较 | 第78-79页 |
| 3 讨论 | 第79页 |
| 参考文献 | 第79-82页 |
| 第五章 Bcl-2／GFP融合基因表达载体的构建 | 第82-86页 |
| 1 材料和方法 | 第82-83页 |
| ·bcl-2基因，菌株与质粒来源 | 第82页 |
| ·主要酶及试剂 | 第82页 |
| ·bcl-2基因的克隆 | 第82-83页 |
| ·bcl-2基因真核表达载体的构建 | 第83页 |
| 2 结果 | 第83-85页 |
| ·目的基因的扩增 | 第83页 |
| ·bcl-2转基因表达载体构建 | 第83-85页 |
| 3 讨论 | 第85页 |
| 参考文献 | 第85-86页 |
| 第六章 融合基因表达载体在小鼠早期胚胎的表达 | 第86-94页 |
| 1 材科和方法 | 第86-87页 |
| ·小鼠原核卵准备 | 第86页 |
| ·注射用外源基因的制备 | 第86页 |
| ·原核卵显微注射和注射卵的体外培养 | 第86页 |
| ·早期胚胎的荧光观察 | 第86-87页 |
| ·试验设计及统计分析 | 第87页 |
| 2 结果 | 第87-90页 |
| ·不同时期原核胚进行显微操作后的发育 | 第87页 |
| ·紫外照射对小鼠胚胎体外发育的影响 | 第87-88页 |
| ·外源基因的表达观察 | 第88-90页 |
| 3 讨论 | 第90-91页 |
| ·不同时期原核胚显微操作后的发育的影响 | 第90页 |
| ·紫外照射对小鼠胚胎体外发育的影响 | 第90页 |
| ·外源基因表达的影响 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-94页 |
| 第七章 小鼠胚胎外源基因的检测和胚胎移植 | 第94-100页 |
| 1 材料与方法 | 第94-96页 |
| ·胚胎分割及样品的制备 | 第94页 |
| ·胚胎基因组DNA的制备和PCR反应 | 第94-95页 |
| ·小鼠胚胎移植 | 第95页 |
| ·假孕小鼠的处理 | 第95页 |
| ·胚胎移植 | 第95页 |
| ·试验设计 | 第95-96页 |
| 2 结果 | 第96-97页 |
| ·荧光观察与PCR扩增结果比较 | 第96页 |
| ·胚胎移植结果比较 | 第96-97页 |
| 3 讨论 | 第97-98页 |
| ·关于检测早期胚胎转基因的方法 | 第97-98页 |
| ·转基因胚胎的附植发育 | 第98页 |
| 参考文献 | 第98-100页 |
| 总结 | 第100-102页 |
| Abstract | 第102-104页 |
