蚀木链霉菌耐热内切纤维素酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 引言 | 第9-20页 |
| ·纤维素概述 | 第9-10页 |
| ·纤维素的结构及构成 | 第9页 |
| ·纤维素的降解 | 第9-10页 |
| ·纤维素酶的研究进展 | 第10-19页 |
| ·纤维素酶的组成 | 第10-11页 |
| ·纤维素酶的分子结构 | 第11-12页 |
| ·纤维素酶的作用机理 | 第12-14页 |
| ·纤维素酶的来源 | 第14-16页 |
| ·纤维素酶的分子生物学研究进展 | 第16-17页 |
| ·纤维素酶的应用 | 第17-19页 |
| ·纤维素酶工业中存在的问题和研究趋势 | 第19页 |
| ·本课题研究的意义和内容 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-30页 |
| ·试验材料 | 第20-22页 |
| ·菌株与质粒 | 第20页 |
| ·酶及生化试剂 | 第20页 |
| ·培养基及有关的溶液配制 | 第20-21页 |
| ·主要设备 | 第21-22页 |
| ·试验方法 | 第22-30页 |
| ·蚀木链霉菌KX6 全基因组DNA 的提取 | 第22页 |
| ·引物的设计与合成 | 第22-23页 |
| ·反应条件和反应体系 | 第23页 |
| ·扩增产物的回收 | 第23-24页 |
| ·克隆质粒的构建 | 第24页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第24页 |
| ·克隆质粒的转化 | 第24-25页 |
| ·SDS 碱裂解法小量制备质粒DNA | 第25页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第25页 |
| ·纤维素酶基因的测序与分析 | 第25-26页 |
| ·原核重组表达载体的构建 | 第26页 |
| ·重组蛋白诱导表达 | 第26页 |
| ·重组工程菌表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第26页 |
| ·目的蛋白分析 | 第26-28页 |
| ·重组工程菌表达产物的酶活力检测 | 第28页 |
| ·影响纤维素酶异源表达因素的研究 | 第28页 |
| ·重组工程菌的稳定性检测 | 第28页 |
| ·重组工程菌在发酵罐中的培养 | 第28-29页 |
| ·酶学性质 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-45页 |
| ·纤维素酶基因celKX 的克隆及序列分析 | 第30-34页 |
| ·纤维素酶基因celKX 的克隆 | 第30页 |
| ·克隆质粒的酶切验证 | 第30-31页 |
| ·纤维素酶基因的序列分析 | 第31-32页 |
| ·同源性比较 | 第32-34页 |
| ·cel 基因在大肠杆菌中的分泌表达 | 第34-39页 |
| ·分泌型重组质粒的构建 | 第34-35页 |
| ·诱导表达筛选 | 第35-36页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第36-37页 |
| ·目的蛋白的定位进行分析 | 第37-38页 |
| ·表达产物的酶活性分析 | 第38-39页 |
| ·基因工程菌株的筛选 | 第39页 |
| ·影响重组菌发酵的因素 | 第39-40页 |
| ·转化子遗传稳定性试验 | 第40-41页 |
| ·重组蛋白的酶学性质研究 | 第41-45页 |
| ·最适反应温度 | 第41-42页 |
| ·最适反应pH | 第42页 |
| ·热稳定性 | 第42-43页 |
| ·pH 稳定性 | 第43页 |
| ·影响酶活力的因子 | 第43-45页 |
| 4 讨论 | 第45-48页 |
| ·影响耐热纤维素酶的异源分泌表达的因素 | 第45-47页 |
| ·异源表达系统的选择 | 第45-46页 |
| ·信号肽选择 | 第46页 |
| ·其它因素 | 第46-47页 |
| ·酶学性质及其应用 | 第47-48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 6 参考文献 | 第49-53页 |
| 7 在读期间发表的学术论文 | 第53-54页 |
| 8 作者简介 | 第54-55页 |
| 9 致谢 | 第55页 |
