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琯溪蜜柚细菌人工染色体(Bacterial Artificial Chromosome)文库的构建及其应用

缩略词第1-9页
摘要第9-11页
Abstract第11-13页
第一章 前言第13-24页
 1 细菌人工染色体(Bacterial Artificial Chromosome, BAC)文库的研究进展第13-20页
   ·用于大插入片度文库构建的载体第13-16页
   ·BAC 文库的构建第16-17页
   ·BAC 文库的筛选第17页
   ·BAC 文库的分类第17-18页
   ·BAC 文库的应用第18-20页
 2 BAC 末端序列的分析第20-22页
   ·简单重复序列(SSRs)分析第20页
   ·重复元件分析第20-21页
   ·基因预测第21-22页
 3 柑橘基因组研究进展第22-23页
 4 本研究的目的意义和主要内容第23-24页
第二章 琯溪蜜柚BAC 文库的构建与评价第24-53页
 1 材料与方法第25-40页
   ·仪器与试剂第25-26页
   ·材料第26-27页
   ·琯溪蜜柚HMW-DNA 提取方法的建立第27-28页
   ·HMW-DNA 的包埋第28-29页
   ·胶块的清洗与保存第29页
   ·HMW-DNA 的部分酶切条件的确定第29-30页
   ·HMW-DNA 的大量酶切第30页
   ·酶切片段的分离、回收第30-31页
   ·连接与转化第31-32页
   ·BAC 文库的保存第32-33页
   ·Southern blot 检测细胞器DNA 的污染第33-40页
 2 结果与分析第40-47页
   ·细胞核DNA 提取方法的比较第40-41页
   ·不同消化时间对HWM-DNA 含量的影响第41-42页
   ·HMW-DNA 的部分酶切第42-43页
   ·大片段DNA 的分离和回收第43-44页
   ·连接反应和电击转化第44-45页
   ·文库的保存第45页
   ·文库质量第45-47页
 3 讨论第47-52页
   ·高分子量DNA 的提取第47-48页
   ·载体的选择第48-49页
   ·部分酶切条件的确定第49页
   ·大片段DNA 的回收第49-50页
   ·影响电击转化效率的因素第50-51页
   ·BAC 文库的保存第51页
   ·文库质量评价第51-52页
 4 小结第52-53页
第三章 汁胞粒化相关EST M4 的筛选与基因组序列分析第53-75页
 1 材料与方法第53-61页
   ·仪器与试剂第53-54页
   ·材料第54页
   ·BAC 文库超级池的构建第54页
   ·小量法提取BAC DNA第54页
   ·PCR 法筛选文库第54-55页
   ·阳性克隆的验证第55-59页
   ·反向PCR(I-PCR)扩增EST M4 两侧未知DNA 序列第59-61页
   ·M4 两侧基因组序列的生物信息学分析第61页
 2 结果与分析第61-71页
   ·PCR 法筛选BAC 文库第61-62页
   ·阳性克隆51E8 插入片段大小检测第62-63页
   ·阳性克隆51E8 指纹图谱及Southern blot 验证第63页
   ·EST M4 DNA 序列的获得第63-65页
   ·I-PCR 扩增M4 两翼序列第65-66页
   ·M4 及两翼DNA 序列的生物信息学分析第66-71页
 3 讨论第71-74页
   ·筛选文库的方法第71-72页
   ·反向PCR 扩增DNA 的两翼序列第72页
   ·应用基因预测软件GENSCAN 和FGENESH 预测粒化相关基因第72-74页
 4 小结第74-75页
第四章 琯溪蜜柚BAC 末端测序与序列分析第75-87页
 1 材料与方法第75-80页
   ·材料第75-76页
   ·BAC DNA 末端序列的亚克隆第76-79页
   ·末端序列的生物信息学分析第79-80页
 2 结果与分析第80-83页
   ·琯溪蜜柚BAC 末端测序第80页
   ·BAC 末端序列中的简单重复序列第80-82页
   ·末端序列中的重复元件分析第82页
   ·末端序列中的编码区分析第82-83页
 3 讨论第83-86页
   ·琯溪蜜柚BAC 末端测序第83页
   ·琯溪蜜柚基因组中的简单重复序列(SSRs)第83页
   ·琯溪蜜柚基因组的重复元件分析第83-85页
   ·琯溪蜜柚基因组的GC 含量与编码区分析第85-86页
 4 小结第86-87页
第五章 总结与研究展望第87-89页
 1 总结第87-88页
 2 研究展望第88-89页
参考文献第89-100页
附录第100-118页
 附录Ⅰ M4 及其两翼 DNA 序列第100-102页
 附录Ⅱ 预测得到的 M4 及其两翼序列的编码区第102-107页
 附录Ⅲ BAC 末端列中的重复元件第107-114页
 附录Ⅳ 从末端序列中预测得到的部分编码区序列和所编码的氨基酸序列第114-118页
致谢第118页

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