缩略词 | 第1-9页 |
摘要 | 第9-11页 |
Abstract | 第11-13页 |
第一章 前言 | 第13-24页 |
1 细菌人工染色体(Bacterial Artificial Chromosome, BAC)文库的研究进展 | 第13-20页 |
·用于大插入片度文库构建的载体 | 第13-16页 |
·BAC 文库的构建 | 第16-17页 |
·BAC 文库的筛选 | 第17页 |
·BAC 文库的分类 | 第17-18页 |
·BAC 文库的应用 | 第18-20页 |
2 BAC 末端序列的分析 | 第20-22页 |
·简单重复序列(SSRs)分析 | 第20页 |
·重复元件分析 | 第20-21页 |
·基因预测 | 第21-22页 |
3 柑橘基因组研究进展 | 第22-23页 |
4 本研究的目的意义和主要内容 | 第23-24页 |
第二章 琯溪蜜柚BAC 文库的构建与评价 | 第24-53页 |
1 材料与方法 | 第25-40页 |
·仪器与试剂 | 第25-26页 |
·材料 | 第26-27页 |
·琯溪蜜柚HMW-DNA 提取方法的建立 | 第27-28页 |
·HMW-DNA 的包埋 | 第28-29页 |
·胶块的清洗与保存 | 第29页 |
·HMW-DNA 的部分酶切条件的确定 | 第29-30页 |
·HMW-DNA 的大量酶切 | 第30页 |
·酶切片段的分离、回收 | 第30-31页 |
·连接与转化 | 第31-32页 |
·BAC 文库的保存 | 第32-33页 |
·Southern blot 检测细胞器DNA 的污染 | 第33-40页 |
2 结果与分析 | 第40-47页 |
·细胞核DNA 提取方法的比较 | 第40-41页 |
·不同消化时间对HWM-DNA 含量的影响 | 第41-42页 |
·HMW-DNA 的部分酶切 | 第42-43页 |
·大片段DNA 的分离和回收 | 第43-44页 |
·连接反应和电击转化 | 第44-45页 |
·文库的保存 | 第45页 |
·文库质量 | 第45-47页 |
3 讨论 | 第47-52页 |
·高分子量DNA 的提取 | 第47-48页 |
·载体的选择 | 第48-49页 |
·部分酶切条件的确定 | 第49页 |
·大片段DNA 的回收 | 第49-50页 |
·影响电击转化效率的因素 | 第50-51页 |
·BAC 文库的保存 | 第51页 |
·文库质量评价 | 第51-52页 |
4 小结 | 第52-53页 |
第三章 汁胞粒化相关EST M4 的筛选与基因组序列分析 | 第53-75页 |
1 材料与方法 | 第53-61页 |
·仪器与试剂 | 第53-54页 |
·材料 | 第54页 |
·BAC 文库超级池的构建 | 第54页 |
·小量法提取BAC DNA | 第54页 |
·PCR 法筛选文库 | 第54-55页 |
·阳性克隆的验证 | 第55-59页 |
·反向PCR(I-PCR)扩增EST M4 两侧未知DNA 序列 | 第59-61页 |
·M4 两侧基因组序列的生物信息学分析 | 第61页 |
2 结果与分析 | 第61-71页 |
·PCR 法筛选BAC 文库 | 第61-62页 |
·阳性克隆51E8 插入片段大小检测 | 第62-63页 |
·阳性克隆51E8 指纹图谱及Southern blot 验证 | 第63页 |
·EST M4 DNA 序列的获得 | 第63-65页 |
·I-PCR 扩增M4 两翼序列 | 第65-66页 |
·M4 及两翼DNA 序列的生物信息学分析 | 第66-71页 |
3 讨论 | 第71-74页 |
·筛选文库的方法 | 第71-72页 |
·反向PCR 扩增DNA 的两翼序列 | 第72页 |
·应用基因预测软件GENSCAN 和FGENESH 预测粒化相关基因 | 第72-74页 |
4 小结 | 第74-75页 |
第四章 琯溪蜜柚BAC 末端测序与序列分析 | 第75-87页 |
1 材料与方法 | 第75-80页 |
·材料 | 第75-76页 |
·BAC DNA 末端序列的亚克隆 | 第76-79页 |
·末端序列的生物信息学分析 | 第79-80页 |
2 结果与分析 | 第80-83页 |
·琯溪蜜柚BAC 末端测序 | 第80页 |
·BAC 末端序列中的简单重复序列 | 第80-82页 |
·末端序列中的重复元件分析 | 第82页 |
·末端序列中的编码区分析 | 第82-83页 |
3 讨论 | 第83-86页 |
·琯溪蜜柚BAC 末端测序 | 第83页 |
·琯溪蜜柚基因组中的简单重复序列(SSRs) | 第83页 |
·琯溪蜜柚基因组的重复元件分析 | 第83-85页 |
·琯溪蜜柚基因组的GC 含量与编码区分析 | 第85-86页 |
4 小结 | 第86-87页 |
第五章 总结与研究展望 | 第87-89页 |
1 总结 | 第87-88页 |
2 研究展望 | 第88-89页 |
参考文献 | 第89-100页 |
附录 | 第100-118页 |
附录Ⅰ M4 及其两翼 DNA 序列 | 第100-102页 |
附录Ⅱ 预测得到的 M4 及其两翼序列的编码区 | 第102-107页 |
附录Ⅲ BAC 末端列中的重复元件 | 第107-114页 |
附录Ⅳ 从末端序列中预测得到的部分编码区序列和所编码的氨基酸序列 | 第114-118页 |
致谢 | 第118页 |