| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-36页 |
| ·海藻糖概述 | 第12-13页 |
| ·海藻糖的生产与制备 | 第13-21页 |
| ·微生物提取法 | 第13-14页 |
| ·微生物发酵法 | 第14页 |
| ·酶转化法 | 第14-17页 |
| ·基因工程法(酶分子改造) | 第17-19页 |
| ·海藻糖合成的国内外研究进展 | 第19-21页 |
| ·海藻糖合酶基因的研究进展 | 第21-27页 |
| ·海藻糖合酶基因的来源以及其相关特性 | 第21-22页 |
| ·海藻糖合酶的结构特点 | 第22-24页 |
| ·海藻糖合酶的催化机制 | 第24-25页 |
| ·水生栖热菌的海藻糖合酶研究现状 | 第25-27页 |
| ·酶分子改造 | 第27-30页 |
| ·定向进化 | 第28-29页 |
| ·定点突变技术概述 | 第29-30页 |
| ·海藻糖合酶透性化技术 | 第30-31页 |
| ·小结 | 第31-32页 |
| ·选题依据 | 第32页 |
| ·研究的主要内容 | 第32-33页 |
| ·本研究的意义 | 第33-35页 |
| ·创新点 | 第35页 |
| ·展望 | 第35-36页 |
| 第二章 水生栖热菌FL-03海藻糖合酶基因克隆及原核表达 | 第36-45页 |
| ·材料和方法 | 第36-41页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·方法 | 第37-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-44页 |
| ·TresC01基因的扩增 | 第41页 |
| ·重组质粒T-TresC01的酶切和PCR鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组表达质粒P-TresC01的构建及PCR鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组菌P-TresC01的诱导表达及SDS-PAGE分析 | 第43页 |
| ·重组菌P-TresC01的Western blotting分析 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44页 |
| ·小结 | 第44-45页 |
| 第三章 水生栖热菌FL-03海藻糖合酶基囚的定点(饱和)突变 | 第45-58页 |
| ·材料 | 第45-46页 |
| ·菌株和质粒 | 第45页 |
| ·培养基 | 第45页 |
| ·酶与试剂 | 第45-46页 |
| ·主要仪器 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-50页 |
| ·海藻糖合酶基因TreS突变位点的选择 | 第46页 |
| ·突变引物设计 | 第46-48页 |
| ·突变体的构建 | 第48-50页 |
| ·突变体的筛选和确定 | 第50页 |
| ·结果与分析 | 第50-54页 |
| ·重组载体pM-A197(X)、pM-H100(Q)、pM-H305(C、Y)和pM S547Y的构建 | 第50-51页 |
| ·重组载体pM-H305C、pM-H305Y、pM-A197C和PM-S547Y的PCR鉴定 | 第51-52页 |
| ·重组载体pM-H305C、pM-H305Y和PM-S547Y的PCR的双酶切鉴定 | 第52页 |
| ·重组载体:pM-H305C、pM-S547Y及pM-H305Y、pM-A197X和pM-H100X的测序结果分析 | 第52-54页 |
| ·突变型海藻糖合成酶基因的序列分析 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| ·小结 | 第57-58页 |
| 第四章 FL-03海藻糖合酶及突变酶的表达和酶活分析 | 第58-70页 |
| ·材料与方法 | 第58-63页 |
| ·材料 | 第58-59页 |
| ·方法 | 第59-63页 |
| ·结果与分析 | 第63-67页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第64页 |
| ·序列分析结果 | 第64-65页 |
| ·麦芽糖转葡萄糖基酶的诱导表达及Western blotting鉴定 | 第65-66页 |
| ·重组菌的酶活分析 | 第66-67页 |
| ·讨论 | 第67-68页 |
| ·小结 | 第68-70页 |
| ·表达载体的构建 | 第68页 |
| ·表达的鉴定 | 第68-69页 |
| ·突变体酶活检测 | 第69-70页 |
| 第五章 重组菌突变酶的结构分析 | 第70-80页 |
| ·材料与方法 | 第70-72页 |
| ·材料 | 第70页 |
| ·软件工具 | 第70-71页 |
| ·数据库 | 第71-72页 |
| ·结果与讨论 | 第72-78页 |
| ·海藻糖合酶突变机理 | 第72页 |
| ·突变菌株海藻糖合酶同源建模及模型评价 | 第72-75页 |
| ·海藻糖合酶结构特征 | 第75-76页 |
| ·结构分析 | 第76-78页 |
| ·讨论 | 第78页 |
| ·小结 | 第78-80页 |
| 第六章 海藻糖合酶重组菌LB35透性化细胞产海藻糖特性研究 | 第80-87页 |
| ·材料与方法 | 第80-82页 |
| ·材料 | 第80页 |
| ·设备 | 第80-81页 |
| ·方法 | 第81-82页 |
| ·结果与讨论 | 第82-85页 |
| ·菌体的生长曲线 | 第82-83页 |
| ·不同生长时期对海藻糖重组菌BL35透性化细胞合成海藻糖酶活性的影响 | 第83页 |
| ·表面活性剂透化性细胞产海藻糖的影响 | 第83-85页 |
| ·海藻糖含量测定 | 第85页 |
| ·讨论 | 第85-86页 |
| ·小结 | 第86-87页 |
| 第七章 结论 | 第87-89页 |
| ·表达载体的构建 | 第87页 |
| ·表达的鉴定 | 第87页 |
| ·突变体酶活检测 | 第87页 |
| ·透性化细胞海藻糖产量 | 第87-88页 |
| ·透性化细胞海藻糖产量 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 作者简介 | 第103-105页 |
| 附录Ⅰ:主要溶液与缓冲液 | 第105-107页 |
| 附录Ⅱ 试验相关方法和步骤 | 第107-111页 |
| 附录Ⅲ 核酸序列和氨基酸序列 | 第111-119页 |
