| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 英文缩略语表 | 第13-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-29页 |
| ·超氧化物歧化酶概述 | 第15-21页 |
| ·基因工程超氧化物歧化酶(SOD)研究进展 | 第21-22页 |
| ·酵母表达系统概述 | 第22-26页 |
| ·脂质体技术 | 第26-27页 |
| ·课题目的意义、研究内容及技术路线 | 第27-29页 |
| 第二章 实验方法 | 第29-59页 |
| ·材料与仪器设备 | 第29-32页 |
| ·合成人Cu,Zn-SOD基因 | 第32页 |
| ·构建重组质粒pPIC9K/Cu,Zn-SOD | 第32-35页 |
| ·构建重组酵母GS115/Cu,Zn-SOD | 第35-36页 |
| ·筛选rhCu,Zn-SOD转化子 | 第36页 |
| ·PCR法鉴定GS115/Cu,Zn-SOD转化子 | 第36-37页 |
| ·Southern blot法检测GS115/Cu,Zn-SOD转化子拷贝数量 | 第37-38页 |
| ·检测重组酵母GS115/Cu,Zn-SOD转化子的传代稳定性 | 第38-39页 |
| ·建立检测表达产物的纯度、活性、含量、及特异性检测方法 | 第39-49页 |
| ·重组毕赤酵母GS115/Cu,Zn-SOD转化子诱导表达 | 第49页 |
| ·优化重组毕赤酵母GS115/Cu,Zn-SOD的表达条件 | 第49-50页 |
| ·重组毕赤酵母GS115/Cu,Zn-SOD最适摇床诱导条件验证 | 第50-51页 |
| ·表达上清中目的蛋白酶对温度、化学试剂、pH的稳定性研究 | 第51页 |
| ·重组毕赤酵母GS115/Cu,Zn-SOD高密度发酵 | 第51-53页 |
| ·重组毕赤酵母GS115/Cu,Zn-SOD高密度发酵液纯化 | 第53-56页 |
| ·rhCu,Zn-SOD原液检定 | 第56-57页 |
| ·rhCu,Zn-SOD原液稳定性 | 第57页 |
| ·rhCu,Zn-SOD纯化原液脂质体载酶研究 | 第57-59页 |
| 第三章 结果 | 第59-98页 |
| ·人Cu,Zn-SOD基因的合成 | 第59-61页 |
| ·pPIC9K/Cu,Zn-SOD构建 | 第61-62页 |
| ·GS115/Cu,Zn-SOD转化子的筛选鉴定 | 第62-64页 |
| ·Southern blot法检测GS115/Cu,Zn-SOD转化子拷贝数量 | 第64页 |
| ·rhCu,Zn-SOD转化子鉴定及传代后的基因稳定性检测 | 第64-65页 |
| ·rhCu,Zn-SOD毕赤酵母转化子表达产物分析 | 第65-67页 |
| ·建立双抗体夹心ELISA检测试剂盒 | 第67-75页 |
| ·rhCu,Zn-SOD毕赤酵母转化子的表达研究 | 第75-78页 |
| ·rhCu,Zn-SOD高密度发酵 | 第78-79页 |
| ·rhCu,Zn-SOD高密度发酵最适条件验证 | 第79-80页 |
| ·rhCu,Zn-SOD发酵液三步纯化结果 | 第80-84页 |
| ·rhCu,Zn-SOD纯化工艺验证 | 第84页 |
| ·rhCu,Zn-SOD纯化后的原液检定结果 | 第84-94页 |
| ·rhCu,Zn-SOD纯化后的原液稳定性 | 第94页 |
| ·rhCu,Zn-SOD脂质体载酶条件的优化 | 第94-95页 |
| ·rhCu,Zn-SOD脂质体最适条件验证 | 第95页 |
| ·rhCu,Zn-SOD脂质体稳定性研究 | 第95-96页 |
| ·rhCu,Zn-SOD脂质体药代动力学及生物利用度 | 第96-98页 |
| 第四章 结论 | 第98-99页 |
| ·成功构建了GS115/Cu,Zn-SOD转化子 | 第98页 |
| ·构建的GS115/Cu,Zn-SOD转化子实现了高表达 | 第98页 |
| ·建立了rhCu,Zn-SOD大罐的高密度发酵工艺 | 第98页 |
| ·建立了双抗ELISA检测试剂盒用于发酵液的目的蛋白的分析 | 第98-99页 |
| ·建立了rhCu,Zn-SOD稳定的纯化工艺及原液检定方法 | 第99页 |
| ·建立了rhCu,Zn-SOD脂质体载药技术提高了生物利用度 | 第99页 |
| 第五章 讨论 | 第99-115页 |
| ·Pichia pastoris表达系统的选择 | 第99-100页 |
| ·分泌表达方式的选择 | 第100-101页 |
| ·甲醇利用表型(Mut~+和Mut~s)的选择 | 第101页 |
| ·影响发酵上清酶活性的因素 | 第101-104页 |
| ·影响毕赤酵母外源蛋白表达量的内在因素 | 第104-107页 |
| ·rhCu,Zn-SOD活性及稳定性 | 第107-108页 |
| ·rhCu,Zn-SOD纯化和酶修饰 | 第108-113页 |
| ·本课题的工作展望 | 第113-115页 |
| 参考文献 | 第115-122页 |
