| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语一览表 | 第10-17页 |
| 第1章 绪论 | 第17-32页 |
| 1.1 引言 | 第17-18页 |
| 1.2 海洋曲霉属真菌天然产物概述 | 第18-25页 |
| 1.2.1 生物碱类 | 第18-19页 |
| 1.2.2 聚酮类 | 第19-20页 |
| 1.2.3 内脂类 | 第20-22页 |
| 1.2.4 环肽类 | 第22页 |
| 1.2.5 甾体类 | 第22-23页 |
| 1.2.6 醚类 | 第23-24页 |
| 1.2.7 萜类 | 第24-25页 |
| 1.3 微生物次级代谢产物发现策略 | 第25-30页 |
| 1.3.1 传统天然产物发现方法 | 第26-27页 |
| 1.3.1.1 新微生物资源的开发 | 第26页 |
| 1.3.1.2 培养条件的改变(OSMAC策略) | 第26页 |
| 1.3.1.3 微生物共培养 | 第26-27页 |
| 1.3.1.4 高通量筛选技术 | 第27页 |
| 1.3.2 基因组信息指导下天然产物的发现方法 | 第27-30页 |
| 1.3.2.1 转录因子调控 | 第27-28页 |
| 1.3.2.2 靶向基因组挖掘 | 第28页 |
| 1.3.2.3 表观遗传调控 | 第28页 |
| 1.3.2.4 基因簇异源表达 | 第28-30页 |
| 1.4. 本研究的目的与意义 | 第30-32页 |
| 第2章 实验仪器与材料 | 第32-38页 |
| 2.1 天然产物研究的实验仪器、材料及培养基 | 第32-34页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第32-33页 |
| 2.1.2 实验材料 | 第33页 |
| 2.1.3 培养基配制 | 第33-34页 |
| 2.2 基因簇异源表达研究的仪器、试剂及培养基 | 第34-38页 |
| 2.2.1 主要实验仪器 | 第34-35页 |
| 2.2.2 培养基及缓冲液 | 第35-37页 |
| 2.2.3 主要生物学试剂 | 第37-38页 |
| 第3章 海蟑螂肠道内生真菌Z4次级代谢产物研究 | 第38-75页 |
| 3.1 实验部分 | 第38-42页 |
| 3.1.1 真菌来源及鉴定 | 第38页 |
| 3.1.2 真菌发酵培养 | 第38-40页 |
| 3.1.3 发酵提取物的分离纯化 | 第40-42页 |
| 3.2 化合物结构解析 | 第42-71页 |
| 3.2.1 化合物名称编号和结构 | 第42-45页 |
| 3.2.2 化合物结构解析 | 第45-69页 |
| 3.2.3 Mosher反应 | 第69页 |
| 3.2.4 理化性质 | 第69-71页 |
| 3.3 化合物活性测试 | 第71-73页 |
| 3.3.1 抑菌活性 | 第71页 |
| 3.3.2 细胞毒活性 | 第71-72页 |
| 3.3.3 神经保护活性 | 第72-73页 |
| 3.4 本章小结 | 第73-75页 |
| 第4章 海蟑螂肠道内生真菌Z3次级代谢产物研究 | 第75-99页 |
| 4.1 实验部分 | 第75-77页 |
| 4.1.1 真菌来源及鉴定 | 第75页 |
| 4.1.2 真菌发酵培养及化合物分离纯化 | 第75-77页 |
| 4.2 化合物结构解析 | 第77-97页 |
| 4.2.1 化合物名称编号和结构 | 第77-80页 |
| 4.2.2 化合物结构解析 | 第80-96页 |
| 4.2.3 Marfey反应 | 第96页 |
| 4.2.4 理化性质 | 第96-97页 |
| 4.3 化合物活性测试 | 第97页 |
| 4.3.1 抑菌活性 | 第97页 |
| 4.3.2 细胞毒活性 | 第97页 |
| 4.3.3 神经保护活性 | 第97页 |
| 4.4 本章小结 | 第97-99页 |
| 第5章 海蟑螂内生真菌Z5次级代谢产物及生物合成基因簇异源表达研究 | 第99-135页 |
| 5.1 真菌Z5发酵、化合物纯化及结构鉴定 | 第100-109页 |
| 5.1.1 真菌来源及鉴定 | 第100页 |
| 5.1.2 真菌发酵培养 | 第100-101页 |
| 5.1.3 发酵提取物的分离纯化 | 第101-103页 |
| 5.1.4 化合物名称编号和结构解析 | 第103-109页 |
| 5.1.4.1 化合物名称编号和结构 | 第103-104页 |
| 5.1.4.2 化合物结构解析 | 第104-109页 |
| 5.1.4.3 理化性质 | 第109页 |
| 5.2 基因簇Cluster 24生物信息学分析 | 第109-113页 |
| 5.2.1 基因簇骨架蛋白g8094_970AA生物信息学分析 | 第109-112页 |
| 5.2.2 Cluster 24中各基因功能预测 | 第112-113页 |
| 5.3 基因簇Cluster 24克隆与质粒构建 | 第113-123页 |
| 5.3.1 菌株及质粒 | 第113-114页 |
| 5.3.2 实验方法 | 第114-117页 |
| 5.3.2.1 聚合酶链式反应(PCR) | 第114-115页 |
| 5.3.2.2 酶切体系 | 第115页 |
| 5.3.2.3 酵母菌落PCR | 第115页 |
| 5.3.2.4 大肠杆菌菌落PCR | 第115-116页 |
| 5.3.2.5 酵母同源重组 | 第116页 |
| 5.3.2.6 大肠杆菌转化 | 第116-117页 |
| 5.3.3 结果与分析 | 第117-123页 |
| 5.3.3.1 质粒pXYL1-gpdAp-g8094的构建 | 第117-118页 |
| 5.3.3.2 质粒pXYL2-AMA1-Ribo-yA-g8094-modifying genes的构建 | 第118-119页 |
| 5.3.3.3 质粒pXYL3-AMA1-pyrG-wA-unknown genes的构建 | 第119-121页 |
| 5.3.3.5 质粒pXYL5-AMA1-Ribo-yA-gpdAp-g8094-modifying的构建 | 第121-122页 |
| 5.3.3.6 Cassette pXYL6-G418-alcAp-g8094的构建 | 第122-123页 |
| 5.4 基因簇Cluster 24的异源表达与产物分析 | 第123-133页 |
| 5.4.1 菌株及质粒 | 第123页 |
| 5.4.2 实验方法 | 第123-127页 |
| 5.4.2.1 真菌Z5及构巢曲霉基因组提取 | 第123-124页 |
| 5.4.2.2 构巢曲霉原生质体制备及转化实验 | 第124-125页 |
| 5.4.2.3 真菌Z5原生质体制备及转化实验 | 第125页 |
| 5.4.2.4 曲霉属真菌RNA提取 | 第125页 |
| 5.4.2.5 反转录及RT-PCR | 第125-126页 |
| 5.4.2.6 转化菌株发酵、萃取及产物分析 | 第126-127页 |
| 5.4.3 结果与分析 | 第127-133页 |
| 5.4.3.1 gpdAp-g8094在构巢曲霉wA位点整合异源表达 | 第127-129页 |
| 5.4.3.2 基因簇cluster 24构巢曲霉异源表达菌株的构建及产物分析 | 第129-131页 |
| 5.4.3.3 真菌Z5突变株的构建与产物分析 | 第131-133页 |
| 5.5 小结与讨论 | 第133-135页 |
| 第6章 总结与展望 | 第135-139页 |
| 6.1 全文总结 | 第135-137页 |
| 6.2 研究特色及创新点 | 第137页 |
| 6.3 展望 | 第137-139页 |
| 参考文献 | 第139-150页 |
| 附录 | 第150-223页 |
| 作者简历 | 第223页 |
