| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-33页 |
| 1 伪狂犬病毒概述 | 第14-22页 |
| 1.1 伪狂犬病毒简介 | 第14-15页 |
| 1.2 伪狂犬病的流行病学 | 第15页 |
| 1.3 伪狂犬病毒的分子生物学特性 | 第15-21页 |
| 1.3.1 基因组结构 | 第15-16页 |
| 1.3.2 基因的功能 | 第16-21页 |
| 1.4 致病机理 | 第21-22页 |
| 2 猪伪狂犬病的诊断 | 第22-27页 |
| 2.1 临床诊断 | 第22-23页 |
| 2.2 传统诊断方法 | 第23-24页 |
| 2.2.1 病原学诊断 | 第23-24页 |
| 2.2.2 病毒粒子的形态观察 | 第24页 |
| 2.2.3 动物接种实验 | 第24页 |
| 2.3 血清学诊断方法 | 第24-26页 |
| 2.3.1 血清中和实验(SNT) | 第24-25页 |
| 2.3.2 乳胶凝集实验(LAT) | 第25页 |
| 2.3.3 免疫荧光技术(IF) | 第25-26页 |
| 2.3.4 酶联免疫吸附实验(ELISA) | 第26页 |
| 2.3.5 反向间接血凝(抑制)实验(RPHA/RPHI) | 第26页 |
| 2.4 分子生物学诊断 | 第26-27页 |
| 2.4.1 聚合酶联反应技术(PCR) | 第26-27页 |
| 2.4.2 核酸探针检测技术 | 第27页 |
| 2.4.3 基因芯片技术 | 第27页 |
| 3 伪狂犬病疫苗研究进展 | 第27-30页 |
| 3.1 PR传统疫苗 | 第28页 |
| 3.1.1 灭活疫苗 | 第28页 |
| 3.1.2 弱毒疫苗 | 第28页 |
| 3.2 基因工程疫苗 | 第28-30页 |
| 3.2.1 基因工程亚单位疫苗 | 第28-29页 |
| 3.2.2 核酸疫苗 | 第29页 |
| 3.2.3 基因缺失弱毒疫苗 | 第29-30页 |
| 4 PRV国内流行毒株gB/gE/TK基因分子特征的研究进展 | 第30-31页 |
| 5 研究目的及意义 | 第31-33页 |
| 第二章 伪狂犬病病毒T4贵州株的分离鉴定 | 第33-48页 |
| 1 材料 | 第33-35页 |
| 1.1 病料、细胞 | 第33页 |
| 1.2 主要试剂 | 第33页 |
| 1.3 实验动物 | 第33-34页 |
| 1.4 主要溶液的配制 | 第34-35页 |
| 1.4.1 50×TAE | 第34页 |
| 1.4.2 1%琼脂糖凝胶电泳液 | 第34页 |
| 1.4.3 无钙镁水(CMF) | 第34页 |
| 1.4.4 含10％FBS细胞营养液 | 第34页 |
| 1.4.5 含2％FBS细胞维持液 | 第34-35页 |
| 1.4.6 含20％FBS细胞冻存液液 | 第35页 |
| 1.5 主要实验仪器 | 第35页 |
| 2 方法 | 第35-39页 |
| 2.1 病料的处理 | 第35-36页 |
| 2.2 疑似病例的PCR检测 | 第36-37页 |
| 2.2.1 引物的设计与合成 | 第36页 |
| 2.2.2 病毒核酸PCR扩增 | 第36-37页 |
| 2.3 病毒的分离培养 | 第37页 |
| 2.3.1 细胞的复苏 | 第37页 |
| 2.3.2 病毒的分离培养 | 第37页 |
| 2.4 病毒的效价的测定 | 第37页 |
| 2.5 家兔感染实验 | 第37-38页 |
| 2.6 病毒的形态观察 | 第38页 |
| 2.7 病毒核酸序列的鉴定 | 第38-39页 |
| 2.7.1 引物设计与合成 | 第38-39页 |
| 2.7.2 病毒核酸PCR扩增 | 第39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-46页 |
| 3.1 疑似病例的PCR检测结果 | 第39-40页 |
| 3.2 病毒的分离培养结果 | 第40-42页 |
| 3.3 病毒效价的测定结果 | 第42-43页 |
| 3.4 家兔感染实验结果 | 第43页 |
| 3.5 病毒的形态观察 | 第43-44页 |
| 3.6 病毒核酸序列的鉴定结果 | 第44-46页 |
| 4 讨论 | 第46-47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 第三章 猪伪狂犬病毒贵州株gB/gE/TK基因的克隆及测序 | 第48-61页 |
| 1 材料与方法 | 第49-52页 |
| 1.1 材料 | 第49页 |
| 1.2 载体及宿主菌 | 第49页 |
| 1.3 主要溶液的配制 | 第49-51页 |
| 1.3.1 EDTA(250mM) | 第49-50页 |
| 1.3.2 0.15 MPBS(PH7.4) | 第50页 |
| 1.3.3 LB液体培养基 | 第50页 |
| 1.3.4 LB琼脂培养基 | 第50页 |
| 1.3.5 50×TAE | 第50页 |
| 1.3.6 1％琼脂糖凝胶电泳液 | 第50-51页 |
| 1.3.7 Amp贮存液(200mg/mL) | 第51页 |
| 1.3.8 细菌保存液 | 第51页 |
| 1.4 主要实验仪器 | 第51-52页 |
| 2 方法 | 第52-56页 |
| 2.1 引物设计与合成 | 第52页 |
| 2.2 DNA的提取 | 第52-53页 |
| 2.3 病毒核酸的PCR扩增 | 第53页 |
| 2.4 目的基因的回收纯化 | 第53页 |
| 2.5 目的基因与pMD19-T载体的连接 | 第53-54页 |
| 2.6 重组质粒的转化 | 第54页 |
| 2.7 菌落PCR | 第54-55页 |
| 2.8 重组质粒的抽提 | 第55页 |
| 2.9 重组质粒的酶切鉴定 | 第55-56页 |
| 2.10 重组质粒的DNA序列测定 | 第56页 |
| 3 结果 | 第56-60页 |
| 3.1 PCR产物电泳检测结果 | 第56-58页 |
| 3.2 菌落PCR结果 | 第58页 |
| 3.3 重组克隆质粒酶切鉴定结果 | 第58-60页 |
| 3.4 序列测定结果 | 第60页 |
| 4 讨论 | 第60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 第四章 PRV-T4分离株gB/gE/TK基因生物信息学分析 | 第61-86页 |
| 1 材料 | 第62页 |
| 1.1 生物信息在线分析网站 | 第62页 |
| 1.2 生物信息分析软件 | 第62页 |
| 2 实验方法 | 第62-63页 |
| 2.1 PRV-T4分离株gB/gE/TK基因核苷酸序列同源性分析 | 第62页 |
| 2.2 PRV-T4分离株gB/gE/TK基因核苷酸遗传进化树分析 | 第62-63页 |
| 2.3 PRV-T4分离株gB/gE/TK基因氨基酸序列同源性分析 | 第63页 |
| 2.4 PRV-T4分离株gB/gE/TK基因基因编码蛋白质基本特征分析 | 第63页 |
| 2.5 PRV-T4分离株gB/gE/TK基因蛋白质二级结构预测 | 第63页 |
| 2.6 PRV-T4分离株gB/gE/TK基因蛋白质三级级结构预测 | 第63页 |
| 3 结果分析 | 第63-83页 |
| 3.1 PRV-T4分离株gB/gE/TK基因核苷酸序列同源性分析 | 第63-71页 |
| 3.1.1 gB/gE/TK基因序列整理 | 第63-65页 |
| 3.1.2 PRV-T4分离株gB/gE/TK基因核苷酸及其编码氨基酸变异情况 | 第65-67页 |
| 3.1.3 PRV-T4分离株gB/gE/TK基因核苷酸序列同源性分析 | 第67-71页 |
| 3.2 PRV-T4分离株gB/gE/TK基因核苷酸序列遗传进化树分析 | 第71-73页 |
| 3.3 PRV-T4分离株gB/gE/TK基因编码蛋白质基本特征分析 | 第73-79页 |
| 3.4 PRV-T4分离株gB/gE/TK基因编码蛋白质二级结构分析 | 第79-81页 |
| 3.5 PRV-T4分离株gB/gE/TK基因编码蛋白质三级结构预测 | 第81-83页 |
| 4 讨论 | 第83-84页 |
| 5 结论 | 第84-86页 |
| 主要参考文献 | 第86-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 附录一 攻读硕士学位期间参与发表的论文 | 第93-94页 |
| 附录二 本文用到的部分英文缩写及含义说明 | 第94-95页 |
