| 基金资助 | 第2-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 前言 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-28页 |
| 1 PCV的概述 | 第11页 |
| 2 PCV分子生物学 | 第11-13页 |
| 2.1 PCV的基因组特征 | 第11-13页 |
| 2.2 PCV2的ORF2及其编码的蛋白质 | 第13页 |
| 3 PCV2的流行病学情况 | 第13-16页 |
| 3.1 猪圆环病毒病及其流行情况 | 第13-15页 |
| 3.2 PCV2的混合感染 | 第15页 |
| 3.3 PCV2的传播途径及宿主 | 第15-16页 |
| 4 PCV2的检测技术 | 第16页 |
| 5 PCV2的防治 | 第16-23页 |
| 5.1 PCV2疫苗研究 | 第16-23页 |
| 5.1.1 商品化疫苗的现状 | 第16-17页 |
| 5.1.2 新型疫苗的现状 | 第17-23页 |
| 5.2 PCV2的防治措施 | 第23页 |
| 6 V5表位标签 | 第23-24页 |
| 7 原核表达系统概述 | 第24-27页 |
| 7.1 大肠杆菌表达系统 | 第24-27页 |
| 7.1.1 大肠杆菌表达载体 | 第24-25页 |
| 7.1.2 外源基因 | 第25页 |
| 7.1.3 表达宿主 | 第25-26页 |
| 7.1.4 大肠杆菌表达系统的优缺点 | 第26页 |
| 7.1.5 大肠杆菌表达系统的研究进展 | 第26-27页 |
| 8 实验目的及意义 | 第27-28页 |
| 第二章 携带标记的pET32a(+)-PCV2-ORF2m-V5重组质粒的构建 | 第28-42页 |
| 1 材料 | 第28-30页 |
| 1.1 菌株、质粒及细胞 | 第28页 |
| 1.2 主要试剂 | 第28-29页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第29页 |
| 1.4 部分溶液的制备 | 第29-30页 |
| 1.5 生物信息学软件 | 第30页 |
| 2 方法 | 第30-35页 |
| 2.1 PCV2ORF2在大肠杆菌中的稀有密码子分析 | 第30页 |
| 2.2 目的基因PCV2-ORF2m-V5编码蛋白的生物信息学分析 | 第30页 |
| 2.3 引物设计 | 第30页 |
| 2.4 pET32a(+)-PCV2-ORF2m-V5重组质粒的构建 | 第30-35页 |
| 2.4.1 PCV2-ORF2m-V5的T克隆 | 第31-34页 |
| 2.4.2 pET32a(+)-PCV2-ORF2m-V5的构建 | 第34-35页 |
| 3 结果 | 第35-40页 |
| 3.1 PCV2 ORF2在大肠杆菌中的稀有密码子分析结果 | 第35-36页 |
| 3.2 PCV2-ORF2m-V5编码蛋白的理化性质分析 | 第36页 |
| 3.3 PCV2-ORF2m-V5的T克隆 | 第36-38页 |
| 3.3.1 pMD19-T-PCV2-ORF2m-V5质粒PCR鉴定结果 | 第36-38页 |
| 3.3.2 pMD19-T-PCV2-ORF2m-V5质粒双酶切与测序鉴定结果 | 第38页 |
| 3.4 pET32a(+)-PCV2-ORF2m-V5的构建结果 | 第38-40页 |
| 4 讨论 | 第40-41页 |
| 5 结论 | 第41-42页 |
| 第三章 携带分子标记的PCV2Cap-V5蛋白的原核表达 | 第42-54页 |
| 1 材料 | 第42-43页 |
| 1.1 菌液、细胞 | 第42页 |
| 1.2 主要试剂 | 第42页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第42-43页 |
| 2 重组质粒pET32a(+)-PCV2-ORF2m-V5的原核表达 | 第43-47页 |
| 2.1 感受态细胞的制备 | 第43页 |
| 2.2 重组质粒pET32a(+)-PCV2-ORF2m-V5的提取 | 第43-44页 |
| 2.3 重组质粒pET32a(+)-PCV2-ORF2m-V5的转化 | 第44页 |
| 2.4 重组质粒pET32a(+)-PCV2-ORF2m-V5融合蛋白的诱导表达 | 第44-45页 |
| 2.4.1 融合蛋白的诱导表达及样品的收集分组 | 第44-45页 |
| 2.4.2 诱导表达样本的处理 | 第45页 |
| 2.5 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第45-47页 |
| 2.5.1 SDS-PAGE准备步骤 | 第45-46页 |
| 2.5.2 SDS-PAGE实验步骤 | 第46-47页 |
| 2.6 Western-blotting分析实验步骤 | 第47页 |
| 3 结果 | 第47-51页 |
| 3.1 SDS-PAGE凝胶电泳结果 | 第47-49页 |
| 3.2 Western-blotting分析结果 | 第49-51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 致谢 | 第60-62页 |
