| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 第1章 前言 | 第8-27页 |
| 1.1 锌离子的生理功能 | 第8-10页 |
| 1.1.1 锌离子生理功能的分子机制 | 第8-9页 |
| 1.1.2 锌离子缺乏及其主要症状 | 第9-10页 |
| 1.1.3 锌离子的毒性 | 第10页 |
| 1.2 锌离子的内稳态 | 第10-13页 |
| 1.2.1 细胞水平上的锌离子内稳态平衡调节 | 第10-11页 |
| 1.2.2 生物体水平上的锌离子内稳态平衡调节 | 第11-12页 |
| 1.2.3 锌离子内稳态失衡与相关疾病 | 第12-13页 |
| 1.3 锌离子转运蛋白 | 第13-22页 |
| 1.3.1 ZIP(SLC39)家族蛋白 | 第13-17页 |
| 1.3.2 ZNT(SLC30)家族蛋白 | 第17-21页 |
| 1.3.3 ZIP(SLC39)家族蛋白和ZNT(SLC30)家族蛋白小结 | 第21-22页 |
| 1.4 果蝇锌转运蛋白研究进展 | 第22-25页 |
| 1.4.1 果蝇中的ZIP家族蛋白 | 第22-24页 |
| 1.4.2 果蝇中的ZnT家族蛋白 | 第24页 |
| 1.4.3 以果蝇为模型研究锌转运蛋白的可行性和优势 | 第24-25页 |
| 1.5 本论文的研究目的和意义 | 第25页 |
| 1.6 论文各部分的主要内容 | 第25-27页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第27-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 2.1.1 果蝇品系 | 第27-28页 |
| 2.1.2 其他实验材料和仪器 | 第28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-42页 |
| 2.2.1 果蝇UAS/GAL4系统 | 第28-30页 |
| 2.2.2 构建果蝇Zip71BRNA干扰载体 | 第30页 |
| 2.2.3 构建果蝇UAS-Zip71B过表达载体 | 第30-31页 |
| 2.2.4 构建果蝇UAS-hZip5表达载体 | 第31页 |
| 2.2.5 果蝇显微注射方法 | 第31-32页 |
| 2.2.6 系统发生树和序列同源性分析 | 第32页 |
| 2.2.7 果蝇羽化率检测 | 第32页 |
| 2.2.8 果蝇金属离子含量检测 | 第32-33页 |
| 2.2.9 Zip71B跨膜区和拓扑结构预测分析 | 第33页 |
| 2.2.10 Zip71B原核表达载体的构建 | 第33-34页 |
| 2.2.11 Zip71B蛋白的原核表达 | 第34-35页 |
| 2.2.12 Zip71B蛋白的亲和层析纯化 | 第35页 |
| 2.2.13 HIS-Zip71B重组蛋白免疫兔anti-dZnT1抗体的亲和纯化 | 第35页 |
| 2.2.14 Anti-Zip71B抗体亲和纯化 | 第35-37页 |
| 2.2.15 果蝇总蛋白提取及免疫印记 | 第37页 |
| 2.2.16 RNA提取和反转录 | 第37-38页 |
| 2.2.17 半定量RT-PCR | 第38-39页 |
| 2.2.18 荧光定量RT-PCR | 第39页 |
| 2.2.19 果蝇幼虫马氏管中MtnB-EYFP荧光检测 | 第39-40页 |
| 2.2.20 免疫荧光显微镜观察 | 第40页 |
| 2.2.21 统计学分析 | 第40-42页 |
| 第3章 果蝇锌离子排泄蛋白的筛选和鉴定 | 第42-50页 |
| 3.1 引言 | 第42页 |
| 3.2 实验结果与分析 | 第42-48页 |
| 3.2.1 果蝇锌离子转运蛋白的同源性分析 | 第42页 |
| 3.2.2 果蝇锌离子转运蛋白基因抑制在高锌和缺锌条件下的表型筛选 | 第42-45页 |
| 3.2.3 马氏管特异性敲低Zip71B和ZnT35C引起果蝇幼虫对食物中锌离子过量敏感 | 第45-47页 |
| 3.2.4 马氏管特异性过表达Zip71B和ZnT35C使果蝇幼虫抗高锌环境 | 第47-48页 |
| 3.3 小结 | 第48-50页 |
| 第4章 Zip71B基因抑制和过表达引起果蝇体内锌水平的变化 | 第50-55页 |
| 4.1 引言 | 第50页 |
| 4.2 实验结果与分析 | 第50-54页 |
| 4.2.1 Zip71B的功能缺失引起果蝇体内锌离子积聚 | 第50-53页 |
| 4.2.2 Zip71B的功能缺失引起果蝇体内MtnB转录水平的提高 | 第53-54页 |
| 4.3 小结 | 第54-55页 |
| 第5章 Zip71B的组织和亚细胞定位及其在马氏管中的功能鉴定 | 第55-66页 |
| 5.1 引言 | 第55页 |
| 5.2 实验结果与分析 | 第55-64页 |
| 5.2.1 内源Zip71B的组织特异性表达 | 第55-56页 |
| 5.2.2 内源Zip71B的亚细胞定位 | 第56-57页 |
| 5.2.3 Zip71B与ZnT35C共同协作将体内锌离子通过马氏管细胞排出体外 | 第57-61页 |
| 5.2.4 Zip71B的表达水平受食物中锌离子水平的调节 | 第61-62页 |
| 5.2.5 hZip5蛋白可在功能上互补Zip71B | 第62-64页 |
| 5.3 小结 | 第64-66页 |
| 第6章 dZnT1在果蝇马氏管锌离子重吸收中的功能鉴定 | 第66-70页 |
| 6.1 引言 | 第66页 |
| 6.2 实验结果与分析 | 第66-68页 |
| 6.2.1 dZnT1在果蝇马氏管锌离子重吸收过程中发挥功能 | 第66-67页 |
| 6.2.2 马氏管锌离子代谢过程中dZnT1在Zip71B下游发挥作用 | 第67-68页 |
| 6.3 小结 | 第68-70页 |
| 第7章 果蝇马氏管锌离子代谢和结石形成的关系 | 第70-73页 |
| 7.1 引言 | 第70页 |
| 7.2 实验结果与分析 | 第70-72页 |
| 7.2.1 Zip71B和ZnT35C敲低抑制果蝇马氏管结石形成 | 第70-72页 |
| 7.3 小结 | 第72-73页 |
| 第8章 总结与展望 | 第73-79页 |
| 8.1 实验总结与讨论 | 第73-76页 |
| 8.1.1 Zip71B和ZnT35C敲低和过表达引起果蝇锌敏感表性 | 第73-74页 |
| 8.1.2 Zip71B的敲低影响果蝇体内锌离子水平 | 第74-75页 |
| 8.1.3 Zip71B定位于果蝇马氏管细胞基底膜一侧,与ZnT35C协作将锌离子排出体外 | 第75页 |
| 8.1.4 dZnT1在果蝇马氏管锌离子重吸收过程中起关键作用 | 第75-76页 |
| 8.1.5 马氏管锌离子水平影响结石形成 | 第76页 |
| 8.2 实验结果的思考与展望 | 第76-79页 |
| 参考文献 | 第79-105页 |
| 致谢 | 第105-107页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第107页 |
