| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 第1章 前言 | 第9-31页 |
| 1.1 研究背景 | 第9-29页 |
| 1.1.1 植物中的小RNA | 第10-12页 |
| 1.1.2 植物miRNA的生成 | 第12-17页 |
| 1.1.3 植物miRNA的修饰和运输 | 第17页 |
| 1.1.4 miRNA沉默复合体及其功能 | 第17-22页 |
| 1.1.5 miRNA的稳定与降解 | 第22-23页 |
| 1.1.6 miRNA途径的反馈调节 | 第23-24页 |
| 1.1.7 miRNA调控植物的生命活动 | 第24-26页 |
| 1.1.8 miRNA的应用 | 第26页 |
| 1.1.9 TRANSPORTIN1蛋白 | 第26-29页 |
| 1.2 论文研究意义 | 第29-30页 |
| 1.3 论文研究方法 | 第30页 |
| 1.4 论文结构 | 第30-31页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第31-57页 |
| 2.1 实验材料 | 第31-32页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第31页 |
| 2.1.2 酶与生物化学试剂 | 第31-32页 |
| 2.2 实验仪器 | 第32-34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-57页 |
| 2.3.1 植物的种植培养 | 第34页 |
| 2.3.2 拟南芥有性杂交 | 第34-35页 |
| 2.3.3 CTAB法提取基因组DNA | 第35页 |
| 2.3.4 基于全基因组重测序克隆突变体基因 | 第35-37页 |
| 2.3.5 构建载体 | 第37-40页 |
| 2.3.6 拟南芥转基因 | 第40-42页 |
| 2.3.7 植物总RNA提取和RNA的反转录 | 第42-43页 |
| 2.3.8 实时荧光定量PCR | 第43页 |
| 2.3.9 Northern杂交检测小RNA | 第43-45页 |
| 2.3.10 构建小RNA测序文库 | 第45-47页 |
| 2.3.11 免疫血清的抗体纯化 | 第47-48页 |
| 2.3.12 蛋白质免疫印迹(western blot) | 第48-49页 |
| 2.3.13 蛋白质银染(sliver staining) | 第49页 |
| 2.3.14 原生质体转化 | 第49-51页 |
| 2.3.15 免疫共沉淀实验 | 第51-52页 |
| 2.3.16 双分子荧光互补实验 | 第52-53页 |
| 2.3.17 细胞核质分离实验 | 第53页 |
| 2.3.18 拟南芥AGO1蛋白结合的miRNA检测 | 第53-54页 |
| 2.3.19 体外检测拟南芥miRISC的切割活性 | 第54-56页 |
| 2.3.20 绘制进化树 | 第56-57页 |
| 第3章 TRANSPORTIN1突变导致拟南芥miRNA活性降低 | 第57-66页 |
| 3.1 soe3突变体的分离与鉴定 | 第59-63页 |
| 3.1.1 soe3突变体的分离 | 第59页 |
| 3.1.2 soe3突变体的鉴定 | 第59-63页 |
| 3.2 TRN1参与miRNA介导的基因沉默 | 第63-64页 |
| 3.3 讨论 | 第64-65页 |
| 3.4 小结 | 第65-66页 |
| 第4章 TRANSPORTIN1促进miRNA与AGO1蛋白结合 | 第66-91页 |
| 4.1 TRN1突变不会削减成熟miRNA的积累 | 第66-70页 |
| 4.2 TRN1与AGO1蛋白相互作用 | 第70-80页 |
| 4.2.1 TRN1与AGO1蛋白均同时定位于细胞核和细胞质 | 第70-71页 |
| 4.2.2 双分子荧光互补实验检测TRN1和AGO1间的相互作用 | 第71-72页 |
| 4.2.3 免疫共沉淀实验检测TRN1和AGO1间的相互作用 | 第72-73页 |
| 4.2.4 TRN1与AGO1蛋白间相互作用依赖于其识别结合底物的能力 | 第73-77页 |
| 4.2.5 TRN1蛋白调控miRNA活性的功能依赖于其识别结合底物的能力 | 第77-80页 |
| 4.3 TRN1突变不影响AGO1蛋白和miRNA在细胞核与细胞质间的分布 | 第80-81页 |
| 4.4 TRN1的突变导致miRNA与AGO1蛋白的结合降低 | 第81-87页 |
| 4.5 TRN1蛋白调控miRNA与AGO1蛋白结合依赖于其结合底物的能力 | 第87-88页 |
| 4.6 讨论 | 第88-89页 |
| 4.7 小结 | 第89-91页 |
| 第5章 总结与展望 | 第91-97页 |
| 5.1 论文总结 | 第91页 |
| 5.2 研究展望 | 第91-97页 |
| 5.2.1 Importin β转运蛋白家族在miRNA途径中的功能 | 第92页 |
| 5.2.2 TRN1如何调控miRNA与AGO1结合的探讨 | 第92-94页 |
| 5.2.3 TRN1蛋白运输底物的能力在调控miRNA活性中的功能探讨 | 第94-95页 |
| 5.2.4 Importin β转运蛋白家族在miRNA途径中的转运功能 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-112页 |
| 附录A | 第112-116页 |
| 致谢 | 第116-118页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第118页 |
