| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第15-21页 |
| 1.1 棉花黄萎病的研究现状 | 第15-16页 |
| 1.1.1 棉花黄萎病的致病机理 | 第15-16页 |
| 1.1.2 棉花抗黄萎病的研究进展 | 第16页 |
| 1.2 VirE2互作蛋白1研究现状 | 第16-18页 |
| 1.2.1 bZIP转录因子VIP1参与植物免疫反应机制 | 第17-18页 |
| 1.2.2 VIP1蛋白的研究进展 | 第18页 |
| 1.3 NOT蛋白研究现状 | 第18-19页 |
| 1.3.1 NOT蛋白参与基因表达调控 | 第18-19页 |
| 1.3.2 NOT蛋白的研究进展 | 第19页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第19-21页 |
| 第二章 棉花GbVIP1基因的克隆和分子特性分析 | 第21-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第21页 |
| 2.1.2 仪器与试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 培养基的配制 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-27页 |
| 2.2.1 基因的克隆 | 第21-25页 |
| 2.2.1.1 棉花的培养 | 第21-22页 |
| 2.2.1.2 总RNA的提取和cDNA的合成 | 第22-23页 |
| 2.2.1.3 目的基因的扩增 | 第23-24页 |
| 2.2.1.4 目的片段回收 | 第24页 |
| 2.2.1.5 目的基因的连接、转化和阳性克隆筛选 | 第24-25页 |
| 2.2.2 基因的生物信息学分析 | 第25-26页 |
| 2.2.2.1 蛋白序列的理化特性分析 | 第25-26页 |
| 2.2.2.2 基因的结构分析 | 第26页 |
| 2.2.2.3 序列比对与系统发育树的构建 | 第26页 |
| 2.2.3 组织表达特异性 | 第26-27页 |
| 2.2.3.1 植物组织材料的处理 | 第26页 |
| 2.2.3.2 qRT-PCR | 第26-27页 |
| 2.3 实验结果 | 第27-32页 |
| 2.3.1 基因的克隆 | 第27-28页 |
| 2.3.1.1 RNA的检测 | 第27页 |
| 2.3.1.2 目的基因的克隆 | 第27-28页 |
| 2.3.2 GbVIP1的生物信息学分析 | 第28-32页 |
| 2.3.2.1 GbVIP1理化性质分析 | 第28-29页 |
| 2.3.2.2 GbVIP1结构分析 | 第29-30页 |
| 2.3.2.3 序列比对及进化树 | 第30-32页 |
| 2.3.3 VIP1的组织表达特异性 | 第32页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 棉花GbVIP1基因在棉花和烟草中的功能验证 | 第33-52页 |
| 3.1 实验材料 | 第33-34页 |
| 3.1.1 植物材料与菌株 | 第33页 |
| 3.1.2 仪器与试剂 | 第33页 |
| 3.1.3 培养基的配制 | 第33-34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-42页 |
| 3.2.1 黄萎病和激素诱导的基因表达 | 第34-35页 |
| 3.2.1.1 棉花苗的培养 | 第34页 |
| 3.2.1.2 黄萎病菌的培养 | 第34页 |
| 3.2.1.3 接菌处理与取样 | 第34页 |
| 3.2.1.4 激素处理与取样 | 第34页 |
| 3.2.1.5 qRT-PCR | 第34-35页 |
| 3.2.2 GbVIP1基因在棉花中的功能验证 | 第35-39页 |
| 3.2.2.1 VIGS干涉载体的构建 | 第35-37页 |
| 3.2.2.2 侵染棉花植株 | 第37-38页 |
| 3.2.2.3 黄萎病菌侵染 | 第38页 |
| 3.2.2.4 基因沉默效率检测 | 第38页 |
| 3.2.2.5 表型观察与病指调查 | 第38页 |
| 3.2.2.6 病原菌再分离实验 | 第38-39页 |
| 3.2.2.7 植株叶片台盼蓝染色 | 第39页 |
| 3.2.3 GbVIP1基因在烟草中的功能验证 | 第39-42页 |
| 3.2.3.1 过表达载体的构建 | 第39页 |
| 3.2.3.2 转基因烟草植株的获得 | 第39-40页 |
| 3.2.3.3 转基因植株的检测 | 第40-41页 |
| 3.2.3.4 GbVIP1表达量的检测 | 第41页 |
| 3.2.3.5 转基因植株的抗黄萎病鉴定 | 第41页 |
| 3.2.3.6 抗病相关基因的表达量检测 | 第41-42页 |
| 3.3 实验结果 | 第42-50页 |
| 3.3.1 VIP1基因的表达模式分析 | 第42-43页 |
| 3.3.1.1 黄萎病菌诱导的基因表达 | 第42页 |
| 3.3.1.2 外源激素诱导的基因表达 | 第42-43页 |
| 3.3.2 沉默GbVIP1基因的棉花对黄萎病抗性研究 | 第43-47页 |
| 3.3.2.1 VIGS沉默载体的构建和转化 | 第43-44页 |
| 3.3.2.2 VIGS正对照结果 | 第44页 |
| 3.3.2.3 基因沉默效率检测结果 | 第44-45页 |
| 3.3.2.4 VIGS表型观察 | 第45-46页 |
| 3.3.2.5 病原菌再分离实验 | 第46页 |
| 3.3.2.6 台盼蓝染色结果 | 第46-47页 |
| 3.3.3 过表达GbVIP1基因烟草植株的功能验证 | 第47-50页 |
| 3.3.3.1 过表达载体的构建和转化 | 第47页 |
| 3.3.3.2 转基因烟草植株的筛选 | 第47-49页 |
| 3.3.3.3 转基因烟草抗性鉴定 | 第49-50页 |
| 3.3.3.4 抗病相关基因的表达 | 第50页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第50-52页 |
| 第四章 棉花GbNOT2b基因的克隆和功能分析 | 第52-60页 |
| 4.1 实验材料 | 第52页 |
| 4.1.1 植物材料和供试菌株 | 第52页 |
| 4.1.2 仪器与试剂 | 第52页 |
| 4.1.3 培养基的配制 | 第52页 |
| 4.2 实验方法 | 第52-53页 |
| 4.2.1 基因的克隆 | 第52页 |
| 4.2.2 基因的生物信息学分析 | 第52页 |
| 4.2.3 NOT2b基因表达模式分析 | 第52-53页 |
| 4.2.4 GbNOT2b基因在棉花中的功能验证 | 第53页 |
| 4.3 实验结果 | 第53-58页 |
| 4.3.1 GbNOT2b基因的克隆 | 第53-54页 |
| 4.3.2 GbNOT2b基因的生物信息学分析 | 第54-55页 |
| 4.3.3 基因的表达模式分析 | 第55-56页 |
| 4.3.3.1 组织表达特异性 | 第55页 |
| 4.3.3.2 黄萎病菌诱导的基因表达 | 第55-56页 |
| 4.3.3.3 激素诱导的基因表达 | 第56页 |
| 4.3.4 GbNOT2b在棉花中的功能分析 | 第56-58页 |
| 4.3.4.1 VIGS沉默载体的构建 | 第56-57页 |
| 4.3.4.2 VIGS正对照结果 | 第57页 |
| 4.3.4.3 基因沉默效率检测 | 第57-58页 |
| 4.3.4.4 VIGS表型观察 | 第58页 |
| 4.3.4.5 根部纵剖结果 | 第58页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第58-60页 |
| 第五章 全文总结与展望 | 第60-62页 |
| 5.1 全文总结 | 第60页 |
| 5.2 展望 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简历 | 第68页 |
