| 英文缩略词 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第14-28页 |
| 1 乳腺癌的现状与研究进展 | 第14-19页 |
| 1.1 乳腺癌简介 | 第14页 |
| 1.2 乳腺癌的发病率和死亡率 | 第14-15页 |
| 1.3 乳腺癌患者的年龄分布 | 第15-16页 |
| 1.4 乳腺癌的致病因素 | 第16页 |
| 1.5 乳腺癌的分子分型 | 第16-17页 |
| 1.6 乳腺癌的治疗 | 第17-18页 |
| 1.7 乳腺癌发生发展的主要机制 | 第18页 |
| 1.8 乳腺癌的全球研究现状 | 第18-19页 |
| 2 长链非编码RNA | 第19-25页 |
| 2.1 长链非编码RNA介绍 | 第19-22页 |
| 2.2 长链非编RNA的分子机制和生物学功能 | 第22-25页 |
| 3 长非编码RNA与乳腺癌 | 第25-27页 |
| 4 本课题的研究目的和意义 | 第27-28页 |
| 第二章 材料和方法 | 第28-75页 |
| 1 主要实验试剂和仪器 | 第28-33页 |
| 1.1 主要试剂 | 第28-29页 |
| 1.2 主要耗材 | 第29-30页 |
| 1.3 质粒 | 第30页 |
| 1.4 主要引物 | 第30-33页 |
| 2 主要试剂配方 | 第33-37页 |
| 2.1 普通培养液DMEM配方(1L) | 第33-34页 |
| 2.2 活性炭吸附的DMEM培养液(去激素培养液) | 第34页 |
| 2.3 细胞培养其他相关试剂 | 第34-35页 |
| 2.4 50xTAE配方 | 第35页 |
| 2.5 配制6x DNA loading buffer(DNA电泳用) | 第35页 |
| 2.6 配制1000x Ampicillin溶液 | 第35页 |
| 2.7 配制LB液体培养基 | 第35-36页 |
| 2.8 配制LB/Amp液体培养基 | 第36页 |
| 2.9 配制20x SSC缓冲液 | 第36-37页 |
| 2.10 配备1x PBS缓冲液 | 第37页 |
| 3 主要试剂盒 | 第37-41页 |
| 3.1 细胞总RNA提取纯化试剂盒(promega) | 第37页 |
| 3.2 细胞总RNA提取纯化试剂盒(QIAGEN) | 第37-38页 |
| 3.3 通用型DNA纯化回收试剂盒(TIANGEN) | 第38页 |
| 3.4 质粒小提试剂盒(TIANGEN) | 第38-39页 |
| 3.5 琼脂糖凝胶浓度与线性DNA的最佳分辨范围 | 第39页 |
| 3.6 Dual-Glo(?) Luciferase Assay System (promega) | 第39页 |
| 3.7 TranStart Top Green qPCR SuperMix | 第39页 |
| 3.8 TranStart FastPfu DNA Polymerase | 第39-40页 |
| 3.9 GoScript Reverse Transcription System | 第40页 |
| 3.10 SilverQuest Silver Staining Kit | 第40页 |
| 3.11 NEBNext(?)Ultra~(TM)Ⅱ Directional RNA Library Prep Kit for Illumina(?) | 第40-41页 |
| 4 细胞株和感受态 | 第41页 |
| 5 主要实验方法 | 第41-75页 |
| 5.1 细胞传代 | 第41-42页 |
| 5.2 细胞冻存 | 第42页 |
| 5.3 细胞复苏 | 第42页 |
| 5.4 雌激素刺激的乳腺癌MCF-7细胞培养 | 第42-43页 |
| 5.5 细胞转染实验 | 第43-44页 |
| 5.6 敲低表达载体的构建 | 第44-49页 |
| 5.7 慢病毒的包装和细胞感染 | 第49-50页 |
| 5.8 过表达载体的构建 | 第50-54页 |
| 5.9 报告基因 | 第54-55页 |
| 5.10 细胞增殖 | 第55页 |
| 5.11 细胞总RNA的提取(方法一) | 第55-57页 |
| 5.12 细胞总RNA的提取(方法二) | 第57-58页 |
| 5.13 细胞总RNA的提取(方法三) | 第58-60页 |
| 5.14 逆转录反应(promega) | 第60-61页 |
| 5.15 实时荧光定量PCR实验(RT-qPCR) | 第61-62页 |
| 5.16 测序样本的准备 | 第62-63页 |
| 5.17 RNA-seq测序文库的构建和高通量测序 | 第63-72页 |
| 5.18 GRO-seq测序文库构建和高通量测序 | 第72-75页 |
| 第三章 实验结果 | 第75-92页 |
| 1. 雌激素诱导的lncRNA的生物信息分析 | 第75-79页 |
| 1.1 基于RNA-seq鉴定雌激素诱导的lncRNA的数据分析 | 第75-76页 |
| 1.2 基于Gro-seq鉴定雌激素诱导的lncRNA的数据分析 | 第76-78页 |
| 1.3 生物信息预测差异表达的lncRNA的性能指标 | 第78-79页 |
| 1.4 差异表达的lncRNA的筛选和验证 | 第79页 |
| 2. 乳腺癌细胞中受雌激素诱导的长非编码RNA | 第79-85页 |
| 3. 部分lncRNA对乳腺癌细胞的增殖具有显著影响 | 第85页 |
| 4. LINC02568在乳腺癌组织中特异性高表达 | 第85-87页 |
| 5. LINC02568在乳腺癌的发生发展中的重要性 | 第87-92页 |
| 第四章 讨论 | 第92-95页 |
| 1. 高通量测序数据分析的瓶颈和解决方案 | 第92-93页 |
| 2. 雌激素诱导的长链非编码RNA潜在的分子机制 | 第93-95页 |
| 第五章 结论 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-101页 |
| 致谢 | 第101-103页 |
| 硕士研究生期间主要研究成果 | 第103页 |
