| 摘要 | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-12页 |
| 文献综述 | 第12-17页 |
| 1 黑色素生成相关研究 | 第12-14页 |
| 1.1 黑色素细胞的发育分化 | 第12页 |
| 1.2 黑色素的合成及迁移 | 第12-13页 |
| 1.3 影响黑色素生成的信号通路 | 第13-14页 |
| 1.4 毛色生成过程的主效基因 | 第14页 |
| 2 FGF21的研究进展 | 第14-15页 |
| 2.1 FGF21的结构 | 第14-15页 |
| 2.2 FGF21对黑色素生成的作用 | 第15页 |
| 3 miRNA的研究进展 | 第15-17页 |
| 3.1 miRNA的发生机制 | 第15-16页 |
| 3.2 miRNA的生物学功能 | 第16页 |
| 3.3 miRNA对毛色调控的研究进展 | 第16-17页 |
| 实验一 FGF21对羊驼黑色素细胞中黑色素生成的作用 | 第17-32页 |
| 1 材料与方法 | 第17-19页 |
| 1.1 实验材料 | 第17页 |
| 1.2 实验用主要仪器 | 第17页 |
| 1.3 实验用主要试剂 | 第17-19页 |
| 1.3.1 细胞培养所需试剂 | 第17页 |
| 1.3.2 总RNA的提取、RT-PCR、QRT-PCR所需试剂 | 第17-18页 |
| 1.3.3 总蛋白的提取和蛋白免疫印迹所需试剂 | 第18页 |
| 1.3.4 构建过表达载体所需试剂 | 第18-19页 |
| 2 实验方法 | 第19-27页 |
| 2.1 构建羊驼FGF21基因的真核表达载体 | 第19-22页 |
| 2.1.1 羊驼FGF21基因的PCR扩增 | 第19-20页 |
| 2.1.2 构建FGF21克隆载体 | 第20-21页 |
| 2.1.3 FGF21真核表达载体的构建 | 第21页 |
| 2.1.4 去内毒素质粒中提 | 第21-22页 |
| 2.2 羊驼黑色素细胞的复苏、传代与冻存 | 第22页 |
| 2.3 FGF21、FGF21-siRNA转染羊驼黑色素细胞 | 第22-23页 |
| 2.4 羊驼黑色素细胞中总黑色素含量的测定 | 第23页 |
| 2.5 羊驼黑色素细胞总RNA的提取及cDNA的合成 | 第23-24页 |
| 2.5.1 羊驼黑色素细胞总RNA的提取 | 第23页 |
| 2.5.2 cDNA的合成 | 第23-24页 |
| 2.6 qRT-PCR检测毛色相关基因 | 第24-25页 |
| 2.7 羊驼黑色素细胞总蛋白的提取和Western Blot | 第25-27页 |
| 2.7.1 羊驼黑色素细胞总蛋白的提取 | 第25页 |
| 2.7.2 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第25-26页 |
| 2.7.3 转膜 | 第26页 |
| 2.7.4 封闭及杂交 | 第26-27页 |
| 2.7.5 Western Blot结果分析 | 第27页 |
| 3 结果 | 第27-32页 |
| 3.1 FGF21基因全长PCR扩增 | 第27页 |
| 3.2 FGF21克隆及验证 | 第27-28页 |
| 3.3 FGF21真核表达载体构建及验证 | 第28页 |
| 3.4 FGF21和FGF21-siRNA转染羊驼黑色素细胞的效率 | 第28-29页 |
| 3.5 FGF21转染后细胞内毛色相关基因在mRNA和蛋白水平的表达 | 第29-30页 |
| 3.6 FGF21-siRNA转染后细胞内毛色相关基因在mRNA和蛋白水平的表达 | 第30-31页 |
| 3.7 FGF21及FGF21-siRNA转染后细胞内黑色素含量的变化 | 第31-32页 |
| 实验二 miR-100-5p对羊驼黑色素细胞中黑色素生成的作用 | 第32-40页 |
| 1 材料与方法 | 第32页 |
| 1.1 实验样本 | 第32页 |
| 1.2 实验用主要仪器 | 第32页 |
| 1.3 实验用主要试剂 | 第32页 |
| 2 实验方法 | 第32-34页 |
| 2.1 miR-100-5p与FGF21靶向关系的验证 | 第32-33页 |
| 2.1.1 FGF21 3'UTR的扩增、克隆及双荧光报告载体构建 | 第32-33页 |
| 2.1.2 pmirGLO-FGF21 3'UTR的定点突变 | 第33页 |
| 2.1.3 重组质粒共转染至293T细胞 | 第33页 |
| 2.1.4 双荧光报告检测 | 第33页 |
| 2.2 miR-100-5p转染羊驼黑色素细胞 | 第33-34页 |
| 2.2.1 miR-100-5p转染羊驼黑色素细胞后总黑色素含量的测定 | 第34页 |
| 2.2.2 miR-100-5p转染羊驼黑色素细胞后总RNA的提取及cDNA的合成 | 第34页 |
| 2.2.3 qRT-PCR法检测miR-100-5p的内源性表达 | 第34页 |
| 2.2.4 靶基因FGF21在mRNA和蛋白水平的检测 | 第34页 |
| 2.2.5 FGF21下游相关基因在mRNA和蛋白水平的检测 | 第34页 |
| 3 结果 | 第34-40页 |
| 3.1 FGF21 3'UTR的PCR扩增及克隆 | 第34-35页 |
| 3.2 pmirGLO-FGF21 3'UTR的构建 | 第35页 |
| 3.3 pmirGLO-FGF21 3'UTR的定点突变及测序 | 第35页 |
| 3.4 转染293T细胞后的荧光活性检测 | 第35-36页 |
| 3.5 miR-100-5p转染羊驼黑色素细胞后的内源性表达 | 第36-37页 |
| 3.6 miR-100-5p转染后靶基因FGF21在mRNA和蛋白水平的表达 | 第37页 |
| 3.7 miR-100-5p转染后细胞内毛色相关基因在mRNA和蛋白水平的表达 | 第37-38页 |
| 3.8 miR-100-5p转染后黑色素含量的变化 | 第38-40页 |
| 讨论 | 第40-42页 |
| 1. FGF21对羊驼黑色素细胞中黑色素生成的作用 | 第40-41页 |
| 2. miR-100-5p羊驼黑色素细胞中黑色素生成的作用 | 第41-42页 |
| 全文总结及创新 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-48页 |
| Abstract | 第48-49页 |
| 附录 | 第50-54页 |
| 1、中英文对照及缩写 | 第50-51页 |
| 2、真核表达载体图 | 第51-52页 |
| 3、在读期间课题相关科研论著 | 第52-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
