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酶转化法制备黄芪甲苷以及分离纯化

摘要第4-5页
Abstract第5页
第一章 文献综述第9-20页
    1.1 黄芪简介第9-11页
        1.1.1 黄芪的植物形态、生长环境第9-10页
        1.1.2 黄芪的分类第10页
        1.1.3 黄芪中的化学成分第10-11页
    1.2 黄芪的药理作用第11-14页
        1.2.1 增强机体免疫功能第11-12页
        1.2.2 保肝脏、促进机体代谢第12-14页
        1.2.3 抑菌及抑制病毒作用第14页
    1.3 黄芪皂苷的结构特点第14-17页
    1.4 黄芪皂苷糖苷酶的研究进展第17-18页
    1.5 本论文的主要研究内容第18-20页
第二章 材料与方法第20-33页
    2.1 实验材料第20页
        2.1.1 菌种第20页
        2.1.2 培养基第20页
        2.1.3 试剂与仪器第20页
    2.2 实验方法第20-28页
        2.2.1 菌种培养第20-21页
        2.2.2 黄芪皂苷糖苷酶粗酶液的提取第21页
        2.2.3 粗酶液中黄芪皂苷糖苷酶活力测定第21-22页
        2.2.4 黄芪皂苷糖苷酶的分离纯化第22-23页
            2.2.4.1 DEAE-Cellocuse DE52柱的处理与装柱第22-23页
            2.2.4.2 酶的上柱与分离第23页
        2.2.5 黄芪皂苷糖苷酶性质研究第23-24页
        2.2.6 黄芪皂苷酶纯度检测及分子量测定第24-28页
            2.2.6.1 SDS-聚丙酰胺凝胶电泳的基本原理第24-27页
            2.2.6.2 SDS-聚丙酰胺凝胶电泳测定蛋白质的分子量第27-28页
        2.2.7 黄芪皂苷含量测定方法第28页
    2.3 酶反应产物的制备与分离提取第28-33页
        2.3.1 酶反应产物的制备第28页
        2.3.2 酶解产物的AB-8大孔吸附树脂的纯化第28-29页
        2.3.3 酶解产物的D280树脂的处理第29页
        2.3.4 黄芪皂苷酶解产物纯化分离第29-31页
        2.3.5 高效液相色谱(HPLC)检测第31-32页
        2.3.6 酶反应原理初步确定第32-33页
第三章 结果与讨论第33-55页
    3.1 产黄芪皂苷糖苷酶的提取与鉴定第33-39页
        3.1.1 DEAE-Cellulose DE52柱分离纯化粗酶液第34-37页
            3.1.1.1 HAc-NaAc缓冲液体系初步分离粗酶液第34-35页
            3.1.1.2 HAc-NaAc缓冲液体系进一步分离粗酶液第35-37页
        3.1.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测提纯酶纯度第37页
        3.1.3 黄芪皂苷糖苷酶的分子量测定第37-39页
    3.2 酶反应底物制备第39页
    3.3 黄芪皂苷糖苷酶活力测定第39-40页
        3.3.1 标准品黄芪甲苷标准曲线绘制第39-40页
        3.3.2 样品中黄芪甲苷含量测定第40页
    3.4 黄芪皂苷糖苷酶性质研究第40-45页
        3.4.1 酶反应的最佳底物浓度第41页
        3.4.2 酶反应最佳时间第41-42页
        3.4.3 酶反应的最适pH第42-43页
        3.4.4 酶反应的pH稳定性第43-44页
        3.4.5 酶反应的最适温度第44页
        3.4.6 酶反应的温度稳定性第44-45页
    3.5 酶反应产物的分离纯化第45-52页
        3.5.1 D280树脂的脱色处理第46页
        3.5.2 AB-8大孔吸附树脂的脱糖及产物初步分离第46页
        3.5.3 酶反应产物的硅胶柱法分离提纯第46-51页
        3.5.4 黄芪皂苷糖苷酶的酶反应原理初步分析第51-52页
    3.6 HPLC检测第52-55页
第四章 结论第55-57页
参考文献第57-59页
致谢第59页

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