| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-30页 |
| 1.1 甘蓝优势育种概述 | 第12-16页 |
| 1.1.1 自交不亲和性育种 | 第12页 |
| 1.1.2 雄性不育育种 | 第12-14页 |
| 1.1.3 智能育种 | 第14-16页 |
| 1.2 雄性不育相关基因研究 | 第16-20页 |
| 1.3 茉莉酸代谢与雄性不育 | 第20-24页 |
| 1.3.1 茉莉酸的生物合成途径 | 第20页 |
| 1.3.2 JA途径相关基因的雄性不育研究 | 第20-24页 |
| 1.4 CRISPR/Cas9系统的原理及作用机制 | 第24-26页 |
| 1.5 CRISPR/Cas9系统在植物基因组编辑中的应用 | 第26-30页 |
| 1.5.1 NHEJ介导的单基因敲除 | 第26-27页 |
| 1.5.2 NHEJ介导的多基因敲除 | 第27-30页 |
| 第2章 引言 | 第30-34页 |
| 2.1 研究的目的及意义 | 第30-31页 |
| 2.2 研究思路与技术路线 | 第31-34页 |
| 2.2.1 研究思路 | 第31页 |
| 2.2.2 技术路线 | 第31-34页 |
| 第3章 BoMS1基因控制甘蓝雄性不育的功能研究 | 第34-70页 |
| 3.1 材料 | 第34页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第34页 |
| 3.1.2 菌株与载体 | 第34页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第34页 |
| 3.2 溶液及培养基配方 | 第34-35页 |
| 3.2.1 主要溶液配方 | 第34-35页 |
| 3.2.2 培养基配方 | 第35页 |
| 3.3 主要仪器 | 第35页 |
| 3.4 试验方法 | 第35-46页 |
| 3.4.1 基因克隆及载体构建 | 第35-39页 |
| 3.4.2 tRNA-sgRNA/Cas9表达载体的构建 | 第39-42页 |
| 3.4.3 转基因拟南芥的获得 | 第42-43页 |
| 3.4.4 T1代拟南芥育性恢复鉴定 | 第43-44页 |
| 3.4.5 转基因甘蓝的获得 | 第44-45页 |
| 3.4.6 突变检测 | 第45-46页 |
| 3.4.7 转基因甘蓝的育性鉴定 | 第46页 |
| 3.4.8 转基因甘蓝的自交不亲和性鉴定 | 第46页 |
| 3.5 结果与分析 | 第46-65页 |
| 3.5.1 pCA13BarPMS1MS1载体的构建 | 第46-47页 |
| 3.5.2 转基因拟南芥的获得与基因型鉴定 | 第47-49页 |
| 3.5.3 pCA13BarPMS1iMS1载体的构建 | 第49页 |
| 3.5.4 pCA13BarPMS1iMS1转基因植株的获得及PCR鉴定 | 第49-50页 |
| 3.5.5 pCA13BarPMS1iMS1转基因植株育性鉴定 | 第50-51页 |
| 3.5.6 pCA13BarPMS1iMS1转基因植株自交亲和性鉴定 | 第51-53页 |
| 3.5.7 pCA13BariMS1/iSRK载体的构建 | 第53页 |
| 3.5.8 pCA13BariMS1/iSRK转基因植株的获得及PCR鉴定 | 第53-54页 |
| 3.5.9 pCA13BariMS1/iSRK转基因植株育性鉴定 | 第54-56页 |
| 3.5.10 pCA13BariMS1/iSRK转基因植株自交亲和性鉴定 | 第56-58页 |
| 3.5.11 pCas-tBoMS1-ABCD/tBoSRK-ABCD表达载体的构建 | 第58-59页 |
| 3.5.12 pCas-tBoMS1-ABCD/tBoSRK-ABCD转基因植株的获得及PCR鉴定 | 第59-60页 |
| 3.5.13 pCas-tBoMS1-ABCD/tBoSRK-ABCD转基因植株的突变分析 | 第60-62页 |
| 3.5.14 pCas-tBoMS1-ABCD/tBoSRK-ABCD转基因植株育性鉴定 | 第62-64页 |
| 3.5.15 pCas-tBoMS1-ABCD/tBoSRK-ABCD转基因植株自交亲和性鉴定 | 第64-65页 |
| 3.6 讨论 | 第65-70页 |
| 第4章 BoAOS基因控制甘蓝雄性不育的功能研究 | 第70-86页 |
| 4.1 材料 | 第70页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第70页 |
| 4.1.2 菌株与载体 | 第70页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第70页 |
| 4.2 溶液及培养基配方 | 第70页 |
| 4.2.1 主要溶液配方 | 第70页 |
| 4.2.2 培养基配方 | 第70页 |
| 4.3 主要仪器 | 第70页 |
| 4.4 试验方法 | 第70-73页 |
| 4.4.1 常规表达载体的构建 | 第70页 |
| 4.4.2 sgRNA/Cas9表达载体的构建 | 第70-72页 |
| 4.4.3 转基因甘蓝的获得 | 第72页 |
| 4.4.4 突变检测 | 第72页 |
| 4.4.5 软腐病的接种 | 第72页 |
| 4.4.6 转基因甘蓝的Real Time PCR荧光定量分析 | 第72-73页 |
| 4.4.7 转基因甘蓝的育性鉴定 | 第73页 |
| 4.4.8 转基因甘蓝的自交亲和性鉴定 | 第73页 |
| 4.5 结果与分析 | 第73-85页 |
| 4.5.1 pCA13BariAOS/iSRK载体的构建 | 第73-74页 |
| 4.5.2 pCA13BariAOS/iSRK转基因植株的获得及PCR鉴定 | 第74页 |
| 4.5.3 病菌胁迫下茉莉酸代谢途径相关基因表达分析 | 第74-75页 |
| 4.5.4 pCA13BariAOS/iSRK转基因植株的育性鉴定 | 第75-76页 |
| 4.5.5 pCA13BariAOS/iSRK转基因植株的自交亲和性鉴定 | 第76-77页 |
| 4.5.6 pCas-BoAOS-AB/tBoSRK-ABCD载体的构建 | 第77-78页 |
| 4.5.7 pCas-BoAOS-AB/tBoSRK-ABCD转基因植株的获得及PCR鉴定 | 第78-79页 |
| 4.5.8 pCas-BoAOS-AB/tBoSRK-ABCD转基因植株的突变分析 | 第79-82页 |
| 4.5.9 pCas-BoAOS-AB/tBoSRK-ABCD转基因植株育性鉴定 | 第82-83页 |
| 4.5.10 pCas-BoAOS-AB/tBoSRK-ABCD转基因植株自交亲和性鉴定 | 第83-85页 |
| 4.6 讨论 | 第85-86页 |
| 第5章 结论及后续研究 | 第86-88页 |
| 5.1 结论 | 第86页 |
| 5.1.1 BoMS1基因是控制甘蓝育性的重要基因 | 第86页 |
| 5.1.2 BoMS1基因和BoSRK基因突变能够产生自交亲和的雄性不育植株 | 第86页 |
| 5.1.3 BoAOS基因和BoSRK基因突变能够提高自交亲和性,但对育性的影响有限 | 第86页 |
| 5.2 后续研究 | 第86页 |
| 5.3 创新点 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-102页 |
| 致谢 | 第102-104页 |
| 附录 | 第104-114页 |
| 附录1 各引物序列 | 第104-106页 |
| 附录2 拟南芥启动子AtPMS1、终止子T-MS1、甘蓝BoMS1基因CDS区域序列比对结果 | 第106-108页 |
| 附录3 F-2单株BoSRK基因部分单克隆突变类型 | 第108-110页 |
| 附录4 各转基因植株花粉染色图 | 第110-114页 |
| 在读期间发表论文及参研项目情况 | 第114页 |
