| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-24页 |
| 1 磷素对植物的重要作用及缺磷对植物的危害 | 第14页 |
| 2 当前农业生产中磷利用现状 | 第14-15页 |
| 3 植物对低磷胁迫的适应机制 | 第15-21页 |
| 3.1 植物磷转运蛋白及其基因 | 第15-17页 |
| 3.2 植物磷代谢调控及信号 | 第17-19页 |
| 3.3 植物根系分泌物与磷营养 | 第19-20页 |
| 3.4 植物根际微生物与磷营养 | 第20页 |
| 3.5 植物根系形态性状与磷营养 | 第20-21页 |
| 4 提高植物磷营养水平的方法 | 第21-23页 |
| 4.1 选育磷高效利用植物品种 | 第21页 |
| 4.2 超表达磷转运蛋白改良植物磷营养 | 第21页 |
| 4.3 促进植物根系分泌有机酸活化土壤无效磷 | 第21-22页 |
| 4.4 促进植物根系分泌植酸酶和磷酸酶活化土壤有机磷 | 第22页 |
| 4.5 其他改良植物磷营养的方法 | 第22-23页 |
| 5 本研究的目的与意义 | 第23-24页 |
| 第二章 切花菊磷高效利用品种苗期筛选 | 第24-30页 |
| 1 材料和方法 | 第24-25页 |
| 1.1 试验材料 | 第24页 |
| 1.2 方法 | 第24-25页 |
| 1.2.1 筛选体系 | 第24-25页 |
| 1.2.2 试验处理 | 第25页 |
| 1.2.3 数据采集与分析 | 第25页 |
| 2 结果及分析 | 第25-29页 |
| 2.1 低磷胁迫下切花菊品种的生物学性状差异 | 第25-27页 |
| 2.2 筛选指标的建立 | 第27-28页 |
| 2.3 32个切花菊品种耐低磷特性的评价 | 第28-29页 |
| 3 讨论 | 第29-30页 |
| 第三章 切花菊CmPT基因的克隆与序列分析 | 第30-46页 |
| 1 材料与方法 | 第30-39页 |
| 1.1 植物材料 | 第30页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第30-31页 |
| 1.2.1 试剂及菌株 | 第30-31页 |
| 1.2.2 仪器设备 | 第31页 |
| 1.3 实验方法 | 第31-39页 |
| 1.3.1 植物总RNA的提取 | 第31页 |
| 1.3.2 1st-Strand cDNA合成及检测 | 第31-33页 |
| 1.3.3 简并引物的设计 | 第33页 |
| 1.3.4 PCR扩增及电泳 | 第33页 |
| 1.3.5 目的片段的纯化回收 | 第33页 |
| 1.3.6 目的片段的连接 | 第33-34页 |
| 1.3.7 连接产物转化 | 第34页 |
| 1.3.8 重组子筛选与测序 | 第34页 |
| 1.3.9 3'RACE-PCR扩增 | 第34-36页 |
| 1.3.10 5'RACE-PCR扩增 | 第36-38页 |
| 1.3.11 cDNA全长序列的获得 | 第38-39页 |
| 1.3.12 基因序列的分析 | 第39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-45页 |
| 2.1 RNA提取质量与反转录效果检测 | 第39-40页 |
| 2.2 CmPT1基因的克隆 | 第40-41页 |
| 2.2.1 CmPT1基因中间保守片段的获得 | 第40页 |
| 2.2.2 CmPT1基因3'RACE结果 | 第40-41页 |
| 2.2.3 CmPT1基因5'RACE结果 | 第41页 |
| 2.2.4 CmPT1基因cDNA全长及ORF的获得 | 第41页 |
| 2.3 CmPT1基因及编码蛋白的生物信息学分析 | 第41-45页 |
| 2.3.1 CmPT1基因cDNA序列 | 第41页 |
| 2.3.2 CmPT1基因编码氨基酸疏水性分析和跨膜结构预测 | 第41-42页 |
| 2.3.3 CmPT1基因编码蛋白保守域比对结果 | 第42-43页 |
| 2.3.4 CmPT1氨基酸序列同源性比对 | 第43-44页 |
| 2.3.5 CmPT1系统进化树分析 | 第44-45页 |
| 3 讨论 | 第45-46页 |
| 第四章 CmPT1的功能验证与表达模式分析 | 第46-62页 |
| 1 材料与方法 | 第46-55页 |
| 1.1 试验材料 | 第46页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第46-47页 |
| 1.2.1 试剂 | 第46-47页 |
| 1.2.2 仪器设备 | 第47页 |
| 1.3 实验方法 | 第47-55页 |
| 1.3.1 酵母表达载体构建过程 | 第47-51页 |
| 1.3.2 酵母感受态细胞制备及其质粒转化 | 第51-52页 |
| 1.3.3 切花菊磷转运蛋白基因CmPT1在酵母中的功能验证 | 第52-53页 |
| 1.3.4 切花菊磷转运蛋白基因CmPT1的表达模式分析 | 第53-55页 |
| 2 结果与分析 | 第55-59页 |
| 2.1 重组质粒的双酶切验证结果 | 第55-56页 |
| 2.2 CmPT1在酵母异源体系中的功能验证 | 第56-59页 |
| 2.2.1 CmPT1能够恢复酵母缺失突变体在低磷环境下的生长 | 第56-57页 |
| 2.2.2 不同pH条件下各酵母菌株生长情况 | 第57-58页 |
| 2.2.3 磷吸收动力学的测定 | 第58-59页 |
| 2.3 CmPT1的表达模式分析 | 第59页 |
| 3 讨论 | 第59-62页 |
| 第五章 CmPT1超表达菊花的获得及表型分析 | 第62-84页 |
| 1 材料与方法 | 第63-71页 |
| 1.1 试验材料 | 第63页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第63-64页 |
| 1.2.1 试剂 | 第63-64页 |
| 1.2.2 仪器设备 | 第64页 |
| 1.3 实验方法 | 第64-71页 |
| 1.3.1 菊花遗传表达载体构建过程 | 第64-67页 |
| 1.3.2 农杆菌感受态的制备 | 第67页 |
| 1.3.3 冻融法转化农杆菌 | 第67-68页 |
| 1.3.4 Kan筛选浓度确定 | 第68页 |
| 1.3.5 农杆菌介导法转化切花菊'神马' | 第68-69页 |
| 1.3.6 转基因抗性株系的分子检测 | 第69-70页 |
| 1.3.7 转基因超表达株系的表型分析 | 第70-71页 |
| 2 结果与分析 | 第71-80页 |
| 2.1 菊花遗传表达载体pBIG-CmPT1的双酶切验证 | 第71-72页 |
| 2.2 转基因抗性株系的获得 | 第72-77页 |
| 2.2.1 菊花叶盘不定芽分化和茎段生根阶段Kan筛选浓度的确定 | 第72-74页 |
| 2.2.2 获得转基因菊花再生植株 | 第74-75页 |
| 2.2.3 Kan溶液浸泡筛选浓度的确定 | 第75-76页 |
| 2.2.4 转基因菊花Kan溶液浸泡筛选和PCR验证 | 第76-77页 |
| 2.2.5 叶盘不定芽分化、茎段生根和叶片浸泡的筛选效果分析 | 第77页 |
| 2.3 转基因抗性株系的基因表达水平检测 | 第77-78页 |
| 2.4 '南农银山'和'神马'中CmPT1的序列比较 | 第78页 |
| 2.5 转基因超表达株系的表型分析 | 第78-80页 |
| 2.6 CmPT1是根部负责磷转运的高亲和磷转运蛋白基因 | 第80页 |
| 3 讨论 | 第80-84页 |
| 全文结论 | 第84-86页 |
| 创新点 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-98页 |
| 附录 | 第98-110页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文、申请专利 | 第110-112页 |
| 致谢 | 第112页 |
