摘要 | 第8-10页 |
Abstract | 第10-12页 |
缩略语表(Abbreviation) | 第13-15页 |
1 文献综述 | 第15-44页 |
1.1 流感 | 第15-17页 |
1.1.1 流感及其危害 | 第15页 |
1.1.2 流感的流行 | 第15-17页 |
1.2 流感病毒 | 第17-21页 |
1.2.1 流感病毒的结构 | 第17-18页 |
1.2.2 流感病毒的生命周期 | 第18-21页 |
1.3 流感病毒的致病性 | 第21-22页 |
1.4 流感病毒与天然免疫 | 第22-30页 |
1.4.1 天然免疫信号通路 | 第22-25页 |
1.4.2 流感病毒感染的天然免疫识别 | 第25-28页 |
1.4.3 流感病毒逃避宿主天然免疫应答 | 第28-30页 |
1.5 流感病毒非结构蛋白NS1 | 第30-41页 |
1.5.1 NS1的结构 | 第31-33页 |
1.5.2 NS1的细胞分布 | 第33-34页 |
1.5.3 NS1的翻译后修饰 | 第34页 |
1.5.4 NS1与天然免疫应答 | 第34-39页 |
1.5.4.1 NS1抑制RIG-I信号通路 | 第35-36页 |
1.5.4.2 NS1抑制宿主基因表达 | 第36-38页 |
1.5.4.3 NS1抑制PKR和OAS的抗病毒活性 | 第38页 |
1.5.4.4 NS1激活JNK通路 | 第38-39页 |
1.5.5 NS1调节细胞凋亡应答 | 第39页 |
1.5.6 NS1调节病毒RNA和蛋白的合成 | 第39-41页 |
1.6 TRAF3及其功能 | 第41-44页 |
1.6.1 TRAF家族简介 | 第41页 |
1.6.2 TRAF3在信号通路中的功能 | 第41-44页 |
2 研究目的与意义 | 第44-45页 |
3 材料与方法 | 第45-60页 |
3.1 材料 | 第45-49页 |
3.1.1 细胞和病毒 | 第45页 |
3.1.2 试剂和抗体 | 第45-46页 |
3.1.3 质粒 | 第46-47页 |
3.1.4 siRNA合成 | 第47页 |
3.1.5 主要培养基和缓冲液的配制 | 第47-49页 |
3.1.6 主要实验仪器 | 第49页 |
3.2 方法 | 第49-60页 |
3.2.1 基因克隆 | 第49-50页 |
3.2.2 表达质粒构建 | 第50-51页 |
3.2.3 细胞的培养与传代 | 第51页 |
3.2.4 瞬时转染 | 第51-52页 |
3.2.5 细胞总RNA抽提 | 第52页 |
3.2.6 反转录PCR(RT-PCR) | 第52页 |
3.2.7 实时荧光定量PCR(qPCR) | 第52页 |
3.2.8 双荧光素酶报告基因实验 | 第52-53页 |
3.2.9 Western blot及免疫共沉淀 | 第53-54页 |
3.2.10 免疫荧光实验 | 第54-55页 |
3.2.11 非还原性聚丙烯酰胺凝胶电泳(non-reduced SDS-PAGE) | 第55页 |
3.2.12 蛋白的泛素化修饰检测 | 第55-56页 |
3.2.13 细胞核-质分离实验 | 第56页 |
3.2.14 ELISA实验检测IFN-β | 第56-57页 |
3.2.15 流感病毒重组实验 | 第57-58页 |
3.2.16 病毒感染实验 | 第58页 |
3.2.17 病毒TCID_(50)的测定 | 第58-59页 |
3.2.18 统计学处理 | 第59-60页 |
4 结果与分析 | 第60-104页 |
4.1 H5N1NS1蛋白C端效应结构域抑制RIG-I(N)介导的IRF3激活和IFN-β产生 | 第60-70页 |
4.1.1 H5N1NS1蛋白及其截短体的细胞分布 | 第60-63页 |
4.1.2 H5N1NS1蛋白及其截短体对宿主基因表达的影响 | 第63-65页 |
4.1.3 NS1蛋白C端效应结构域抑制IFN-β启动子的激活 | 第65-68页 |
4.1.4 NS1/126-225抑制RIG-I(N)介导的IRF3激活和IFN-β产生 | 第68-70页 |
4.2 NS1/126-225抑制IFN-β信号通路位于MAVS与TBK1之间 | 第70-74页 |
4.3 NS1/126-225和NS1与TRAF3发生相互作用 | 第74-80页 |
4.4 NS1/126-225或全长NS1与TRAF3的细胞内共定位 | 第80-82页 |
4.5 TRAF3是NS1/126-225下调IFN-β产生所必需的宿主因子 | 第82-84页 |
4.6 NS1/126-225抑制MAVS-TRAF3复合物的形成 | 第84-88页 |
4.6.1 TRAF3与NS1/126-225相互作用区域的确定 | 第84-85页 |
4.6.2 NS1/126-225阻碍MAVS-TRAF3复合物的形成 | 第85-88页 |
4.7 NS1/126-225抑制TRAF3的K63泛素化 | 第88-94页 |
4.8 过表达NS1/126-225促进A型流感病毒(IAV)增殖 | 第94-96页 |
4.9 NS1缺失aa126-225的病毒(HM-Mut)诱导高水平的IFN-β产生 | 第96-100页 |
4.9.1重组病毒HM-Mut编码截短的NS1蛋白NS1-125 | 第96-98页 |
4.9.2 重组病毒感染细胞激活IFN信号通路 | 第98-100页 |
4.10 tNS1蛋白作用于TRAF3,抑制IFN产生 | 第100-104页 |
5 讨论 | 第104-111页 |
5.1 IAVNS1蛋白C末端效应区拮抗IFN-β的产生 | 第104-105页 |
5.2 NS1/126-225与TRAF3相互作用抑制IFN产生的分子机制 | 第105-107页 |
5.3 NS1/126-225抑制TRAF3K63-连接的泛素化 | 第107-108页 |
5.4 NS1缺失aa126-225的重组病毒HM-Mut促进IFN的产生 | 第108-109页 |
5.5 NS1蛋白与TRAF3互作的毒株特异性 | 第109-111页 |
6 总结 | 第111-112页 |
参考文献 | 第112-136页 |
附录 | 第136-142页 |
个人资料 | 第142-144页 |
致谢 | 第144-145页 |