| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-19页 |
| 1.1 豆状囊尾蚴概述 | 第13-14页 |
| 1.1.1 豆状囊尾蚴及豆状囊尾蚴病 | 第13页 |
| 1.1.2 豆状囊尾蚴病的免疫诊断 | 第13-14页 |
| 1.2 丝氨酸蛋白酶抑制剂概述 | 第14-18页 |
| 1.2.1 Serpin结构、功能及作用机理 | 第14-15页 |
| 1.2.2 寄生蠕虫中serpin的研究进展 | 第15-18页 |
| 1.2.2.1 线虫 | 第16页 |
| 1.2.2.2 吸虫 | 第16-17页 |
| 1.2.2.3 绦虫 | 第17-18页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 豆状囊尾蚴SERPIN基因的鉴定与分析 | 第19-28页 |
| 2.1 试验材料 | 第19页 |
| 2.1.1 虫体、菌种和试剂 | 第19页 |
| 2.1.2 仪器与设备 | 第19页 |
| 2.2 试验方法 | 第19-23页 |
| 2.2.1 豆状囊尾蚴总RNA的提取 | 第19-20页 |
| 2.2.2 cDNA的合成 | 第20页 |
| 2.2.3 豆状囊尾蚴serpin基因的扩增 | 第20-22页 |
| 2.2.4 豆状囊尾蚴Cpserpin基因的序列分析 | 第22-23页 |
| 2.3 结果 | 第23-27页 |
| 2.3.1 豆状囊尾蚴serpin基因ORF的扩增 | 第23页 |
| 2.3.2 Serpin基因的序列分析 | 第23-27页 |
| 2.3.2.1 理化性质 | 第23页 |
| 2.3.2.2 二级结构分析 | 第23-25页 |
| 2.3.2.3 结构域分析 | 第25页 |
| 2.3.2.4 序列比对及系统进化分析 | 第25-26页 |
| 2.3.2.5 三级结构预测 | 第26-27页 |
| 2.4 讨论 | 第27-28页 |
| 第三章 基于CPSERPIN蛋白间接ELISA方法的建立 | 第28-37页 |
| 3.1 试验材料 | 第28页 |
| 3.1.1 虫株与血清 | 第28页 |
| 3.1.2 菌株、载体及主要试剂 | 第28页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第28页 |
| 3.2 试验方法 | 第28-32页 |
| 3.2.1 重组质粒的构建及鉴定 | 第28-30页 |
| 3.2.2 Cpserpin的原核表达 | 第30页 |
| 3.2.3 Cpserpin蛋白纯化 | 第30页 |
| 3.2.4 Cpserpin的Western-blotting | 第30-31页 |
| 3.2.5 基于Cpserpin的间接ELISA方法的建立 | 第31页 |
| 3.2.6 间接ELISA方法的优化 | 第31页 |
| 3.2.7 间接ELISA阳性临界值确定 | 第31-32页 |
| 3.2.8 重复性试验 | 第32页 |
| 3.3 试验结果 | 第32-35页 |
| 3.3.1 重组质粒的构建及鉴定 | 第32页 |
| 3.3.2 Cpserpin的原核表达及纯化 | 第32页 |
| 3.3.3 Cpserpin的Western-blotting | 第32-33页 |
| 3.3.4 间接ELISA方法的优化 | 第33-34页 |
| 3.3.5 ELISA操作步骤优化结果 | 第34-35页 |
| 3.3.6 间接ELISA阳性临界值确定 | 第35页 |
| 3.3.7 重复性试验 | 第35页 |
| 3.4 讨论 | 第35-37页 |
| 第四章 豆状带绦虫不同发育阶段CPSERPIN的表达 | 第37-45页 |
| 4.1 试验材料及仪器 | 第37页 |
| 4.1.1 实验动物及血清 | 第37页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第37页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第37页 |
| 4.2 试验方法 | 第37-40页 |
| 4.2.1 Cpserpin荧光定量PCR | 第37-39页 |
| 4.2.1.1 cDNA的合成 | 第37-38页 |
| 4.2.1.2 引物的设计和合成 | 第38页 |
| 4.2.1.3 Cpserpin基因的qPCR扩增 | 第38-39页 |
| 4.2.2 免疫组化试验 | 第39-40页 |
| 4.2.2.1 Cpserpin多克隆抗体制备 | 第39页 |
| 4.2.2.2 高免血清效价测定 | 第39页 |
| 4.2.2.3 抗体纯化 | 第39-40页 |
| 4.2.2.4 抗体特异性检测 | 第40页 |
| 4.2.2.5 免疫组化 | 第40页 |
| 4.3 试验结果 | 第40-43页 |
| 4.3.1 Cpserpin基因的表达分析 | 第40-41页 |
| 4.3.2 重组蛋白Cpserpin的免疫血清效价测定 | 第41-42页 |
| 4.3.3 抗体特异性检测 | 第42页 |
| 4.3.4 免疫组化分析 | 第42-43页 |
| 4.4 讨论 | 第43-45页 |
| 第五章 CPSERPIN的真核表达和酶活抑制实验 | 第45-52页 |
| 5.1 试验材料 | 第45页 |
| 5.1.1 菌株、载体及试剂 | 第45页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第45页 |
| 5.2 试验方法 | 第45-48页 |
| 5.2.1 重组质粒pPIC9K-Cpserpin的构建 | 第45页 |
| 5.2.2 重组质粒pPIC9K-Cpserpin的线性化 | 第45-46页 |
| 5.2.3 酵母感受态细胞的制备 | 第46页 |
| 5.2.4 转化与菌落筛选 | 第46页 |
| 5.2.5 重组蛋白Cpserpin的诱导表达 | 第46-47页 |
| 5.2.6 重组蛋白Cpserpin的纯化及鉴定 | 第47页 |
| 5.2.7 酶活抑制实验 | 第47-48页 |
| 5.3 结果 | 第48-50页 |
| 5.3.1 重组质粒pPIC9K-Cpserpin的线性化 | 第48页 |
| 5.3.2 重组蛋白Cpserpin的诱导表达 | 第48-49页 |
| 5.3.3 重组蛋白Cpserpin的纯化及鉴定 | 第49-50页 |
| 5.3.4 酶活抑制实验 | 第50页 |
| 5.4 讨论 | 第50-52页 |
| 第六章 全文结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 作者简历 | 第59页 |
