| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-24页 |
| 1.1 普鲁兰酶概述 | 第12-14页 |
| 1.2 普鲁兰酶的研究进展 | 第14-18页 |
| 1.2.1 普鲁兰酶的主要产生菌株 | 第14-16页 |
| 1.2.2 普鲁兰酶的异源表达研究 | 第16-18页 |
| 1.3 枯草芽孢杆菌表达系统 | 第18-21页 |
| 1.3.1 枯草芽孢杆菌表达宿主菌 | 第19-20页 |
| 1.3.2 枯草芽孢杆菌表达系统启动子 | 第20-21页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 1.5 本研究的具体研究内容 | 第22-24页 |
| 第二章 枯草芽孢杆菌表达系统启动子筛选 | 第24-57页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24-33页 |
| 2.2.1 质粒与菌株 | 第24-26页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第26-28页 |
| 2.2.3 工具酶与实验试剂 | 第28-30页 |
| 2.2.4 培养基 | 第30页 |
| 2.2.5 主要溶液配制 | 第30-32页 |
| 2.2.6 实验仪器 | 第32-33页 |
| 2.3 实验方法 | 第33-45页 |
| 2.3.1 B.naganoensisATCC53909的普鲁兰酶基因获取 | 第33-36页 |
| 2.3.2 普鲁兰酶重组质粒的构建 | 第36-37页 |
| 2.3.3 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第37-38页 |
| 2.3.4 普鲁兰酶重组质粒的鉴定 | 第38页 |
| 2.3.5 重组质粒的提取 | 第38-39页 |
| 2.3.6 单启动子重组质粒的构建 | 第39-40页 |
| 2.3.7 枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第40-41页 |
| 2.3.8 枯草芽孢杆菌重组菌株的鉴定 | 第41页 |
| 2.3.9 普鲁兰酶酶活测定方法 | 第41-42页 |
| 2.3.10 启动子筛选 | 第42-43页 |
| 2.3.11 其他普鲁兰酶基因重组菌株的构建 | 第43-44页 |
| 2.3.12 高表达普鲁兰酶重组菌株摇瓶发酵 | 第44页 |
| 2.3.13 SDS-PAGE分析 | 第44-45页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第45-55页 |
| 2.4.1 B.naganoensisATCC53909菌株鉴定 | 第45-46页 |
| 2.4.2 普鲁兰酶基因及载体验证 | 第46-47页 |
| 2.4.3 普鲁兰酶重组质粒的构建与鉴定 | 第47-48页 |
| 2.4.4 阳性转化子测序 | 第48页 |
| 2.4.5 单启动子重组质粒的构建 | 第48页 |
| 2.4.6 枯草芽孢杆菌重组菌株的鉴定 | 第48-50页 |
| 2.4.7 普鲁兰酶酶活测定方法 | 第50-52页 |
| 2.4.8 启动子筛选 | 第52页 |
| 2.4.9 其他普鲁兰酶基因重组菌株的构建 | 第52-53页 |
| 2.4.10 高表达普鲁兰酶重组菌株摇瓶发酵 | 第53-54页 |
| 2.4.11 SDS-PAGE分析 | 第54-55页 |
| 2.5 本章小结 | 第55-57页 |
| 第三章 串联启动子对普鲁兰酶重组菌株表达水平的影响 | 第57-67页 |
| 3.1 引言 | 第57页 |
| 3.2 实验材料 | 第57-61页 |
| 3.2.1 质粒与菌株 | 第57-58页 |
| 3.2.2 引物设计 | 第58-60页 |
| 3.2.3 工具酶与实验试剂 | 第60页 |
| 3.2.4 培养基 | 第60页 |
| 3.2.5 主要溶液配制 | 第60页 |
| 3.2.6 实验仪器 | 第60-61页 |
| 3.3 实验方法 | 第61-62页 |
| 3.3.1 启动子片段的获取 | 第61页 |
| 3.3.2 串联启动子重组菌株的构建 | 第61页 |
| 3.3.3 摇瓶发酵 | 第61-62页 |
| 3.3.4 SDS-PAGE分析 | 第62页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第62-66页 |
| 3.4.1 启动子片段的获取 | 第62页 |
| 3.4.2 串联启动子重组菌株的构建 | 第62-64页 |
| 3.4.3 摇瓶发酵 | 第64-65页 |
| 3.4.4 SDS-PAGE分析 | 第65-66页 |
| 3.5 本章小结 | 第66-67页 |
| 第四章 普鲁兰酶酶学性质研究 | 第67-75页 |
| 4.1 引言 | 第67页 |
| 4.2 实验材料 | 第67-68页 |
| 4.2.1 普鲁兰酶粗酶液的制备 | 第67页 |
| 4.2.2 实验试剂与耗材 | 第67页 |
| 4.2.3 溶液配制 | 第67页 |
| 4.2.4 实验仪器 | 第67-68页 |
| 4.3 实验方法 | 第68-69页 |
| 4.3.1 重组普鲁兰酶的最适反应温度 | 第68页 |
| 4.3.2 重组普鲁兰酶的最适反应pH值 | 第68页 |
| 4.3.3 重组普鲁兰酶的热稳定性 | 第68页 |
| 4.3.4 重组普鲁兰酶的pH稳定性 | 第68页 |
| 4.3.5 不同的保存温度对重组普鲁兰酶酶活力的影响 | 第68页 |
| 4.3.6 不同金属离子及化合物对重组普鲁兰酶酶活力的影响 | 第68-69页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第69-73页 |
| 4.4.1 重组普鲁兰酶的最适反应温度 | 第69-70页 |
| 4.4.2 重组普鲁兰酶的最适反应pH值 | 第70页 |
| 4.4.3 重组普鲁兰酶的热稳定性 | 第70-71页 |
| 4.4.4 重组普鲁兰酶的pH稳定性 | 第71-72页 |
| 4.4.5 不同的保存温度对重组酶酶活力的影响 | 第72-73页 |
| 4.4.6 不同金属离子及化合物对重组普鲁兰酶酶活力的影响 | 第73页 |
| 4.5 本章小结 | 第73-75页 |
| 第五章 普鲁兰酶重组菌株摇瓶发酵工艺优化 | 第75-96页 |
| 5.1 前言 | 第75页 |
| 5.2 实验材料 | 第75-77页 |
| 5.2.1 实验试剂 | 第75-76页 |
| 5.2.2 发酵菌株 | 第76页 |
| 5.2.3 发酵培养基的配制 | 第76页 |
| 5.2.4 实验仪器 | 第76-77页 |
| 5.3 实验方法 | 第77-81页 |
| 5.3.1 发酵菌株的优化 | 第77页 |
| 5.3.2 发酵菌株生长曲线的测定 | 第77页 |
| 5.3.3 发酵培养基成分的优化 | 第77-79页 |
| 5.3.4 发酵条件的优化 | 第79-80页 |
| 5.3.5 摇瓶发酵 | 第80-81页 |
| 5.3.6 SDS-PAGE分析 | 第81页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第81-95页 |
| 5.4.1 发酵菌株的优化 | 第81页 |
| 5.4.2 发酵菌株生长曲线 | 第81-83页 |
| 5.4.3 发酵培养基成分的优化 | 第83-91页 |
| 5.4.4 发酵条件的优化 | 第91-93页 |
| 5.4.5 摇瓶发酵 | 第93-94页 |
| 5.4.6 SDS-PAGE分析 | 第94-95页 |
| 5.5 本章小结 | 第95-96页 |
| 结论与展望 | 第96-98页 |
| 结论 | 第96-97页 |
| 展望 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-112页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第112-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
| 附件 | 第114页 |
