| 学位论文数据集 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 符号说明 | 第16-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-27页 |
| 1.1 酪氨酸羟化酶 | 第17-19页 |
| 1.1.1 酪氨酸羟化酶的简介 | 第17页 |
| 1.1.2 酪氨酸羟化酶反应机制的研究 | 第17-18页 |
| 1.1.3 酪氨酸羟化酶的磷酸化 | 第18-19页 |
| 1.1.4 酪氨酸羟化酶对人体的影响 | 第19页 |
| 1.1.5 酪氨酸羟化酶的基因工程研究 | 第19页 |
| 1.2 D-氨基酸氧化酶 | 第19-21页 |
| 1.2.1 D-氨基酸氧化酶简介 | 第19-20页 |
| 1.2.2 D-氨基酸氧化酶的生理功能 | 第20页 |
| 1.2.3 D-氨基酸氧化酶的应用 | 第20-21页 |
| 1.3 类弹性蛋白 | 第21-24页 |
| 1.3.1 类弹性蛋白简介 | 第21-22页 |
| 1.3.2 类弹性蛋白的研究进展 | 第22页 |
| 1.3.3 ELPs合成方法 | 第22-24页 |
| 1.3.4 ELP的应用研究 | 第24页 |
| 1.4 课题设计思路及研究内容 | 第24-27页 |
| 第二章 含有类弹性蛋白标签的酪氨酸羟化酶表达载体的构建 | 第27-39页 |
| 2.1 引言 | 第27页 |
| 2.2 材料与试剂 | 第27-30页 |
| 2.2.1 实验菌种及载体 | 第27页 |
| 2.2.2 试剂 | 第27-30页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第30页 |
| 2.3 酪氨酸氢化酶表达载体的构建 | 第30-36页 |
| 2.3.1 酪氨酸羟化酶基因的合成 | 第30-31页 |
| 2.3.2 质粒的提取 | 第31页 |
| 2.3.3 目的片段与载体的酶切 | 第31-33页 |
| 2.3.4 目的片段与载体的连接 | 第33页 |
| 2.3.5 CaCl_2法制备感受态细胞 | 第33-34页 |
| 2.3.6 转化克隆菌DH5α | 第34页 |
| 2.3.7 阳性克隆的筛选 | 第34-35页 |
| 2.3.8 阳性克隆转化表达菌BL21(DE3) | 第35-36页 |
| 2.4 结果与分析 | 第36-37页 |
| 2.4.1 目的片段与载体的酶切结果 | 第36页 |
| 2.4.2 阳性克隆酶切鉴定结果 | 第36-37页 |
| 2.5 本章小结 | 第37-39页 |
| 第三章 酪氨酸羟化酶的表达优化 | 第39-59页 |
| 3.1 引言 | 第39页 |
| 3.2 试剂和仪器 | 第39-43页 |
| 3.2.1 菌种和载体 | 第39页 |
| 3.2.2 试剂配制 | 第39-41页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第41-42页 |
| 3.2.4 实验仪器 | 第42-43页 |
| 3.3 单一酪氨酸羟化酶的表达及优化 | 第43-45页 |
| 3.3.1 酪氨酸羟化酶的表达 | 第43页 |
| 3.3.2 诱导温度的优化 | 第43页 |
| 3.3.3 IPTG诱导浓度的优化 | 第43-44页 |
| 3.3.4 溶氧量的优化 | 第44页 |
| 3.3.5 诱导时间的优化 | 第44页 |
| 3.3.6 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第44-45页 |
| 3.3.7 Western Blot鉴定重组蛋白 | 第45页 |
| 3.4 含有类弹性蛋白标签的酪氨酸羟化酶表达条件的优化 | 第45-47页 |
| 3.4.1 酪氨酸羟化酶表达 | 第45-46页 |
| 3.4.2 诱导温度的优化 | 第46页 |
| 3.4.3 IPTG诱导浓度的优化 | 第46页 |
| 3.4.4 溶氧量的优化 | 第46页 |
| 3.4.5 诱导时间的优化 | 第46-47页 |
| 3.5 酪氨酸羟化酶的纯化 | 第47-48页 |
| 3.6 实验结果 | 第48-58页 |
| 3.6.1 酪氨酸羟化酶的预表达 | 第48页 |
| 3.6.2 单一酪氨酸羟化酶表达的优化 | 第48-51页 |
| 3.6.3 pET-28a-orf13-ELP60表达的优化 | 第51-54页 |
| 3.6.4 pET-28a-ELP60-orf13表达的优化 | 第54-57页 |
| 3.6.5 Western Blot结果 | 第57页 |
| 3.6.6 ITC技术纯化含有ELP60标签的酪氨酸羟化酶 | 第57-58页 |
| 3.7 本章小结 | 第58-59页 |
| 第四章 酪氨酸羟化酶的活性表征 | 第59-75页 |
| 4.1 引言 | 第59页 |
| 4.2 材料与试剂 | 第59-60页 |
| 4.2.1 菌种和质粒 | 第60页 |
| 4.2.2 试剂 | 第60页 |
| 4.3 酪氨酸活性测定 | 第60-64页 |
| 4.3.1 标准曲线的测定 | 第61-62页 |
| 4.3.2 不同表达条件对酶活性的影响 | 第62-63页 |
| 4.3.3 纯酶的活性测定 | 第63-64页 |
| 4.4 实验结果 | 第64-73页 |
| 4.4.1 标准曲线的绘制 | 第64页 |
| 4.4.2 表达条件对酶活性的影响 | 第64-70页 |
| 4.4.3 连续催化体系的构建 | 第70-73页 |
| 4.5 本章小结 | 第73-75页 |
| 第五章 结论 | 第75-77页 |
| 5.1 结论 | 第75-76页 |
| 5.2 课题的创新性 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 致谢 | 第83-85页 |
| 作者及导师简介 | 第85-86页 |
| 论文答辩委员会决议书 | 第86-87页 |
