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酿酒酵母细胞表面展示米根霉脂肪酶制备全细胞催化剂及其特性研究

摘要第5-7页
Abstract第7-8页
第一章 绪论第15-27页
    1.1 酵母细胞表面展示脂肪酶制备全细胞催化剂第15-19页
    1.2 脂肪酶表面展示结构单元的影响及其匹配原则第19-22页
        1.2.1 脂肪酶外源蛋白的影响第19页
        1.2.2 启动子的影响第19-20页
        1.2.3 锚定蛋白的影响第20-21页
        1.2.4 连接序列的影响第21页
        1.2.5 脂肪酶酵母表面展示单元的匹配原则第21-22页
    1.3 改善酵母细胞表面展示脂肪酶特性的新策略第22-23页
        1.3.1 VHb基因的共表达策略第22页
        1.3.2 多酶体系构建策略第22页
        1.3.3 微环境调控策略第22-23页
        1.3.4 蛋白质自组装策略第23页
    1.4 表面展示脂肪酶构建全细胞催化剂的应用第23-26页
        1.4.1 酯类合成第23页
        1.4.2 有机合成第23-25页
        1.4.3 多不饱和脂肪酸富集第25页
        1.4.4 手性药物拆分第25页
        1.4.5 生物柴油制备第25-26页
    1.5 课题来源、研究目的和主要研究内容第26-27页
第二章 脂肪酶和锚定蛋白结构的生物信息学分析第27-39页
    2.1 实验方法第27-28页
        2.1.1 蛋白结构疏水性分析第27页
        2.1.2 蛋白结构柔性分析第27页
        2.1.3 蛋白结构跨膜区分析第27页
        2.1.4 脂肪酶蛋白结构的功能催化区域分析第27-28页
        2.1.5 蛋白质二级结构预测第28页
        2.1.6 蛋白质三级结构预测及其评价第28页
        2.1.7 蛋白质三维结构的可视化分析第28页
    2.2 结果与分析第28-38页
        2.2.1 蛋白质疏水性结构分析第28-30页
        2.2.2 蛋白质柔性结构分析第30-31页
        2.2.3 蛋白质结构跨膜区分析第31-32页
        2.2.4 脂肪酶功能结构域预测分析第32-33页
        2.2.5 蛋白质二级结构第33页
        2.2.6 蛋白质的三级结构第33-37页
        2.2.7 蛋白质三级结构可视化分析第37-38页
    2.3 讨论与小结第38-39页
        2.3.1 讨论第38页
        2.3.2 小结第38-39页
第三章 酿酒酵母表面展示ROL制备全细胞催化剂及其特性第39-61页
    3.1 材料与方法第39-47页
        3.1.1 实验材料第39-41页
        3.1.2 溶液配制及培养基种类第41-42页
        3.1.3 构建pUC-ROL克隆质粒第42页
        3.1.4 构建pYDl-ROL表达质粒第42-43页
        3.1.5 构建S.ceverisiea EBY100/pYD1-ROL全细胞催化剂及验证第43-44页
        3.1.6 重组酿酒酵母的活化与诱导培养第44页
        3.1.7 全细胞催化剂免疫荧光检测第44-45页
        3.1.8 全细胞催化剂活力平板检测第45页
        3.1.9 全细胞催化剂发酵液的SDS-PAGE第45页
        3.1.10 全细胞催化剂流式细胞仪分析第45-46页
        3.1.11 全细胞催化剂水解橄榄油活力检测第46页
        3.1.12 全细胞催化剂酶学特性分析第46-47页
        3.1.13 海藻酸钠固定化全细胞催化剂第47页
    3.2 结果与分析第47-58页
        3.2.1 表面展示载体的构建及验证第47-48页
        3.2.2 全细胞催化剂免疫荧光检测第48-49页
        3.2.3 全细胞催化剂酶活平板定性检测第49页
        3.2.4 全细胞催化剂培养液SDS-PAGE检测第49-50页
        3.2.5 全细胞催化剂的流式细胞仪检测第50页
        3.2.6 全细胞催化剂水解橄榄油活力定量检测第50-51页
        3.2.7 全细胞催化剂酶学特性研究第51-56页
        3.2.8 全细胞催化剂的固定化及制备生物柴油第56-58页
    3.3 讨论与小结第58-61页
        3.3.1 讨论第58-59页
        3.3.2 结论第59-61页
第四章 ROL全细胞催化剂发酵成本分析第61-65页
    4.1 材料与方法第61-62页
        4.1.1 菌株第61页
        4.1.2 试剂及仪器第61-62页
        4.1.3 培养基第62页
        4.1.4 ROL全细胞催化剂种子液第62页
        4.1.5 ROL全细胞催化剂发酵生物量与酶活测定第62页
        4.1.6 ROL全细胞催化剂发酵成本预算第62页
    4.2 结果与分析第62-64页
        4.2.1 ROL全细胞催化剂发酵生物量第62-63页
        4.2.2 ROL全细胞催化剂发酵成本预算第63-64页
    4.3 小结第64-65页
第五章 全文总结与展望第65-67页
    5.1 全文总结第65页
    5.2 展望第65-67页
参考文献第67-75页
符号说明第75-77页
附录第77-87页
致谢第87-89页
研究成果及发表的学术论文第89-91页
作者和导师简介第91-92页
附件第92-93页

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