| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第15-27页 |
| 1.1 酵母细胞表面展示脂肪酶制备全细胞催化剂 | 第15-19页 |
| 1.2 脂肪酶表面展示结构单元的影响及其匹配原则 | 第19-22页 |
| 1.2.1 脂肪酶外源蛋白的影响 | 第19页 |
| 1.2.2 启动子的影响 | 第19-20页 |
| 1.2.3 锚定蛋白的影响 | 第20-21页 |
| 1.2.4 连接序列的影响 | 第21页 |
| 1.2.5 脂肪酶酵母表面展示单元的匹配原则 | 第21-22页 |
| 1.3 改善酵母细胞表面展示脂肪酶特性的新策略 | 第22-23页 |
| 1.3.1 VHb基因的共表达策略 | 第22页 |
| 1.3.2 多酶体系构建策略 | 第22页 |
| 1.3.3 微环境调控策略 | 第22-23页 |
| 1.3.4 蛋白质自组装策略 | 第23页 |
| 1.4 表面展示脂肪酶构建全细胞催化剂的应用 | 第23-26页 |
| 1.4.1 酯类合成 | 第23页 |
| 1.4.2 有机合成 | 第23-25页 |
| 1.4.3 多不饱和脂肪酸富集 | 第25页 |
| 1.4.4 手性药物拆分 | 第25页 |
| 1.4.5 生物柴油制备 | 第25-26页 |
| 1.5 课题来源、研究目的和主要研究内容 | 第26-27页 |
| 第二章 脂肪酶和锚定蛋白结构的生物信息学分析 | 第27-39页 |
| 2.1 实验方法 | 第27-28页 |
| 2.1.1 蛋白结构疏水性分析 | 第27页 |
| 2.1.2 蛋白结构柔性分析 | 第27页 |
| 2.1.3 蛋白结构跨膜区分析 | 第27页 |
| 2.1.4 脂肪酶蛋白结构的功能催化区域分析 | 第27-28页 |
| 2.1.5 蛋白质二级结构预测 | 第28页 |
| 2.1.6 蛋白质三级结构预测及其评价 | 第28页 |
| 2.1.7 蛋白质三维结构的可视化分析 | 第28页 |
| 2.2 结果与分析 | 第28-38页 |
| 2.2.1 蛋白质疏水性结构分析 | 第28-30页 |
| 2.2.2 蛋白质柔性结构分析 | 第30-31页 |
| 2.2.3 蛋白质结构跨膜区分析 | 第31-32页 |
| 2.2.4 脂肪酶功能结构域预测分析 | 第32-33页 |
| 2.2.5 蛋白质二级结构 | 第33页 |
| 2.2.6 蛋白质的三级结构 | 第33-37页 |
| 2.2.7 蛋白质三级结构可视化分析 | 第37-38页 |
| 2.3 讨论与小结 | 第38-39页 |
| 2.3.1 讨论 | 第38页 |
| 2.3.2 小结 | 第38-39页 |
| 第三章 酿酒酵母表面展示ROL制备全细胞催化剂及其特性 | 第39-61页 |
| 3.1 材料与方法 | 第39-47页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第39-41页 |
| 3.1.2 溶液配制及培养基种类 | 第41-42页 |
| 3.1.3 构建pUC-ROL克隆质粒 | 第42页 |
| 3.1.4 构建pYDl-ROL表达质粒 | 第42-43页 |
| 3.1.5 构建S.ceverisiea EBY100/pYD1-ROL全细胞催化剂及验证 | 第43-44页 |
| 3.1.6 重组酿酒酵母的活化与诱导培养 | 第44页 |
| 3.1.7 全细胞催化剂免疫荧光检测 | 第44-45页 |
| 3.1.8 全细胞催化剂活力平板检测 | 第45页 |
| 3.1.9 全细胞催化剂发酵液的SDS-PAGE | 第45页 |
| 3.1.10 全细胞催化剂流式细胞仪分析 | 第45-46页 |
| 3.1.11 全细胞催化剂水解橄榄油活力检测 | 第46页 |
| 3.1.12 全细胞催化剂酶学特性分析 | 第46-47页 |
| 3.1.13 海藻酸钠固定化全细胞催化剂 | 第47页 |
| 3.2 结果与分析 | 第47-58页 |
| 3.2.1 表面展示载体的构建及验证 | 第47-48页 |
| 3.2.2 全细胞催化剂免疫荧光检测 | 第48-49页 |
| 3.2.3 全细胞催化剂酶活平板定性检测 | 第49页 |
| 3.2.4 全细胞催化剂培养液SDS-PAGE检测 | 第49-50页 |
| 3.2.5 全细胞催化剂的流式细胞仪检测 | 第50页 |
| 3.2.6 全细胞催化剂水解橄榄油活力定量检测 | 第50-51页 |
| 3.2.7 全细胞催化剂酶学特性研究 | 第51-56页 |
| 3.2.8 全细胞催化剂的固定化及制备生物柴油 | 第56-58页 |
| 3.3 讨论与小结 | 第58-61页 |
| 3.3.1 讨论 | 第58-59页 |
| 3.3.2 结论 | 第59-61页 |
| 第四章 ROL全细胞催化剂发酵成本分析 | 第61-65页 |
| 4.1 材料与方法 | 第61-62页 |
| 4.1.1 菌株 | 第61页 |
| 4.1.2 试剂及仪器 | 第61-62页 |
| 4.1.3 培养基 | 第62页 |
| 4.1.4 ROL全细胞催化剂种子液 | 第62页 |
| 4.1.5 ROL全细胞催化剂发酵生物量与酶活测定 | 第62页 |
| 4.1.6 ROL全细胞催化剂发酵成本预算 | 第62页 |
| 4.2 结果与分析 | 第62-64页 |
| 4.2.1 ROL全细胞催化剂发酵生物量 | 第62-63页 |
| 4.2.2 ROL全细胞催化剂发酵成本预算 | 第63-64页 |
| 4.3 小结 | 第64-65页 |
| 第五章 全文总结与展望 | 第65-67页 |
| 5.1 全文总结 | 第65页 |
| 5.2 展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 符号说明 | 第75-77页 |
| 附录 | 第77-87页 |
| 致谢 | 第87-89页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第89-91页 |
| 作者和导师简介 | 第91-92页 |
| 附件 | 第92-93页 |
