| 学位论文数据集 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 符号说明 | 第18-19页 |
| 第一章 绪论 | 第19-29页 |
| 1.1 群体感应研究进展 | 第19-25页 |
| 1.1.1 群体感应过程机制 | 第19-22页 |
| 1.1.2 群体感应相关表型控制 | 第22-24页 |
| 1.1.3 群体感应信号系统的应用 | 第24-25页 |
| 1.2 信号分子AI-2介导的群体感应系统 | 第25-26页 |
| 1.3 肺炎克雷伯氏菌群体感应研究进展 | 第26-27页 |
| 1.4 课题立项意义 | 第27-29页 |
| 第二章 构建表达载体pET-ygaG | 第29-43页 |
| 2.1 引言 | 第29页 |
| 2.2 实验材料 | 第29-30页 |
| 2.2.1 质粒、菌株及其生长条件 | 第29页 |
| 2.2.2 仪器与试剂 | 第29-30页 |
| 2.2.3 培养基 | 第30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-37页 |
| 2.3.1 K.pneumoniae培养方法 | 第30页 |
| 2.3.2 K.pneumoniae保藏方法 | 第30-31页 |
| 2.3.3 K.pneumoniae基因组DNA提取方法 | 第31页 |
| 2.3.4 PCR扩增目的基因ygaG | 第31-32页 |
| 2.3.5 琼脂糖凝胶电泳对目的基因ygaG进行检测 | 第32页 |
| 2.3.6 目的基因ygaG纯化回收 | 第32-33页 |
| 2.3.7 质粒pET-pk提取 | 第33页 |
| 2.3.8 酶切质粒pET-pk与目的基因ygaG | 第33-34页 |
| 2.3.9 琼脂糖凝胶电泳分离质粒pET-pk片段与目的基因ygaG | 第34页 |
| 2.3.10 质粒pET-pk片段与目的基因ygaG片段连接 | 第34-35页 |
| 2.3.11 质粒pET-ygaG热击转化Escherichia coli TOP10 | 第35页 |
| 2.3.12 重组载体pET-ygaG的鉴定 | 第35-36页 |
| 2.3.13 K pneumoniae感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| 2.3.14 重组载体pET-ygaG电击转化K.pneumoniae | 第37页 |
| 2.3.15 K pneumoniae中重组载体pET-ygaG的鉴定 | 第37页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第37-41页 |
| 2.4.1 PCR扩增目的基因ygaG | 第37-38页 |
| 2.4.2 酶切质粒pET-pk与目的基因ygaG | 第38-39页 |
| 2.4.3 构建重组载体pET-ygaG及鉴定 | 第39-40页 |
| 2.4.4 K.pneumoniae中重组载体pET-ygaG的鉴定 | 第40-41页 |
| 2.5 本章小结 | 第41-43页 |
| 第三章 构建K.pneumoniae △ygaG菌株 | 第43-55页 |
| 3.1 引言 | 第43页 |
| 3.2 实验材料 | 第43-44页 |
| 3.2.1 质粒、菌株及其生长条件 | 第43页 |
| 3.2.2 仪器与试剂 | 第43-44页 |
| 3.2.3 培养基 | 第44页 |
| 3.3 实验方法 | 第44-48页 |
| 3.3.1 PCR扩增构建打靶载体的基因及DNA纯化 | 第44页 |
| 3.3.2 构建ygaG基因敲除打靶载体 | 第44-47页 |
| 3.3.3 敲除K. pneumoniae的ygaG基因 | 第47-48页 |
| 3.3.4 消除K. pneumoniae △ygaG(pET-up-Cm~r-down)中重组型质粒 | 第48页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第48-54页 |
| 3.4.1 PCR扩增构建打靶载体的基因 | 第48-49页 |
| 3.4.2 构建ygaG敲除打靶载体 | 第49-52页 |
| 3.4.3 敲除K. pneumoniae的ygaG基因 | 第52-54页 |
| 3.4.4 消除K. pneumoniae△ygaG(pET-up-Cm~r-down)中重组型质粒 | 第54页 |
| 3.5 本章小结 | 第54-55页 |
| 第四章 ygaG基因对K.pneumoniae蛋白表达影响的探究 | 第55-77页 |
| 4.1 引言 | 第55页 |
| 4.2 实验材料 | 第55-56页 |
| 4.2.1 菌株与质粒及其生长条件 | 第55页 |
| 4.2.2 仪器与试剂 | 第55页 |
| 4.2.3 培养基 | 第55-56页 |
| 4.3 实验方法 | 第56-62页 |
| 4.3.1 SDS-PAGE检测ygaG基因对K. pneumoniae蛋白表达影响 | 第56-59页 |
| 4.3.2 MALDI-TOF-TOF质谱仪检测差异性蛋白条带 | 第59页 |
| 4.3.3 荧光定量PCR探究ygaG基因对K. pneumoniae膜基因表达量的影响 | 第59-62页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第62-74页 |
| 4.4.1 SDS-PAGE检测ygaG基因对K. pneumoniae蛋白表达影响 | 第62-64页 |
| 4.4.2 MALDI-TOF-TOF质谱仪检测差异性蛋白条带 | 第64-68页 |
| 4.4.3 荧光定量PCR探究ygaG基因对K. pneumoniae膜基因表达量的影响 | 第68-74页 |
| 4.5 本章小结 | 第74-77页 |
| 第五章 ygaG基因对K. pneumoniae代谢影响的探究 | 第77-89页 |
| 5.1 引言 | 第77-78页 |
| 5.2 实验材料 | 第78页 |
| 5.2.1 菌株与质粒及其生长条件 | 第78页 |
| 5.2.2 仪器与试剂 | 第78页 |
| 5.2.3 培养基 | 第78页 |
| 5.3 实验方法 | 第78-80页 |
| 5.3.1 菌株的发酵培养 | 第78-79页 |
| 5.3.2 发酵液取样 | 第79页 |
| 5.3.3 菌体生物量的测定 | 第79页 |
| 5.3.4 甘油消耗测定 | 第79-80页 |
| 5.3.5 HPLC检测发酵产物产量 | 第80页 |
| 5.3.6 气象色谱检测发酵产物产量 | 第80页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第80-87页 |
| 5.4.1 重组菌生物量的测定 | 第80-82页 |
| 5.4.2 甘油消耗测定 | 第82页 |
| 5.4.3 发酵过程代谢产物产量影响 | 第82-87页 |
| 5.5 本章小结 | 第87-89页 |
| 第六章 探究ygaG基因对K.pneumoniae 表面形态和抗药性影响 | 第89-95页 |
| 6.1 引言 | 第89页 |
| 6.2 实验材料 | 第89页 |
| 6.2.1 菌株与质粒及其生长条件 | 第89页 |
| 6.2.2 仪器与试剂 | 第89页 |
| 6.2.3 培养基 | 第89页 |
| 6.3 实验方法 | 第89-91页 |
| 6.3.1 扫描电镜观察ygaG基因对K. pneumoniae表面形态的影响 | 第89-91页 |
| 6.3.2 药敏试验 | 第91页 |
| 6.4 实验结果与讨论 | 第91-93页 |
| 6.4.1 扫描电镜观察ygaG基因对K. pneumoniae表面形态的影响 | 第91页 |
| 6.4.2 ygaG基因对K. pneumoniae抗药性的影响 | 第91-93页 |
| 6.5 本章小结 | 第93-95页 |
| 第七章 实验总结与建议 | 第95-97页 |
| 7.1 主要结论 | 第95-96页 |
| 7.2 本论文的创新点 | 第96页 |
| 7.3 问题与建议 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-101页 |
| 附录1 试剂 | 第101-103页 |
| 附录2 仪器 | 第103-105页 |
| 致谢 | 第105-107页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第107-109页 |
| 作者和导师简介 | 第109-110页 |
| 附件 | 第110-111页 |
