| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 缩略语 | 第11-12页 |
| 第一章 家蚕30KD 载脂蛋白的研究进展 | 第12-18页 |
| 1 前言 | 第12页 |
| 2 30KC19 基因及编码蛋白结构的研究进展 | 第12-13页 |
| 3 家蚕30KD 脂蛋白（6G1 和19G1）抗真菌的研究进展 | 第13-14页 |
| ·天然家蚕30kD 脂蛋白（6G1 和19G1）抗真菌的研究进展 | 第13-14页 |
| ·重组30kD 脂蛋白（6G1 和19G1）（大肠杆菌表达）抗真菌的研究进展 | 第14页 |
| 4 30K 蛋白抑制凋亡作用的研究进展 | 第14-17页 |
| ·天然家蚕30kD 脂蛋白抑制凋亡作用的研究进展 | 第14-15页 |
| ·细胞过量表达家蚕30K 蛋白抑制凋亡作用的研究进展 | 第15-16页 |
| ·重组家蚕30kD 脂蛋白抑制凋亡作用的研究进展 | 第16页 |
| ·30K 蛋白抑制凋亡作用在生物制药工程中的应用 | 第16-17页 |
| 5 研究展望 | 第17-18页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第18-20页 |
| 1 研究目的和意义 | 第18页 |
| 2 研究内容 | 第18-19页 |
| 3 实验流程 | 第19-20页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第20-28页 |
| 1 材料 | 第20页 |
| 2 方法 | 第20-21页 |
| ·30Kc19 基因的获得 | 第20页 |
| ·30Kc19 基因的分析方法 | 第20-21页 |
| 3 结果 | 第21-26页 |
| ·30Kc19 基因的序列分析 | 第21页 |
| ·30Kc19 基因的结构分析 | 第21-22页 |
| ·低分子量家蚕30kD 载脂蛋白19G1 前体的疏水性分析 | 第22页 |
| ·低分子量家蚕30kD 载脂蛋白19G1 前体的跨膜分析 | 第22-23页 |
| ·低分子量家蚕30kD 载脂蛋白19G1 前体的信号肽分析 | 第23-24页 |
| ·低分子量家蚕30kD 载脂蛋白19G1 前体定位的预测 | 第24页 |
| ·家蚕低分子量30kD 载脂蛋白19G1 前体基因推测的氨基酸同源性分析 | 第24-25页 |
| ·家蚕低分子量30kD 载脂蛋白19G1 前体的进化树分析 | 第25-26页 |
| 4 讨论 | 第26-28页 |
| 第四章 家蚕30KC19 基因的原核表达 | 第28-44页 |
| 1 材料与试剂 | 第28-31页 |
| ·材料 | 第28页 |
| ·试剂 | 第28页 |
| ·主要试剂的配制 | 第28-31页 |
| 2 方法 | 第31-40页 |
| ·家蚕蛹体基因组DNA 的制备方法[50] | 第31-32页 |
| ·家蚕30Kc19 基因的克隆 | 第32-36页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第36-38页 |
| ·重组质粒的转化及鉴定 | 第38页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的表达 | 第38页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析 | 第38-40页 |
| 3 结果 | 第40-43页 |
| ·30Kc19 基因与基因组序列比对结果 | 第40页 |
| ·家蚕蛹基因组DNA 提取结果 | 第40-41页 |
| ·目的基因PCR 扩增结果 | 第41页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组质粒测序结果 | 第42页 |
| ·30Kc19 基因的诱导表达 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-44页 |
| 第五章 重组蛋白的纯化及多克隆抗体的制备和鉴定 | 第44-60页 |
| 1 试剂和材料 | 第44-48页 |
| ·材料 | 第44页 |
| ·试剂 | 第44-45页 |
| ·试剂配制 | 第45-48页 |
| 2 方法 | 第48-54页 |
| ·表达产物的存在形式的检测 | 第48页 |
| ·重组菌株的保存 | 第48页 |
| ·重组质粒的保存 | 第48-49页 |
| ·包涵体的溶解与复性 | 第49-50页 |
| ·镍柱层析 | 第50-51页 |
| ·Bradford 检测蛋白浓度 | 第51页 |
| ·抗体的制备 | 第51-54页 |
| ·融合蛋白的Western blotting 鉴定 | 第54页 |
| 3 结果 | 第54-58页 |
| ·表达产物的存在形式 | 第54-55页 |
| ·表达蛋白纯化结果 | 第55-56页 |
| ·抗体的纯化 | 第56-57页 |
| ·多克隆抗体的效价测定 | 第57页 |
| ·Western blotting 检测结果 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 第六章 表达时序研究 | 第60-69页 |
| 1 材料与试剂 | 第60-61页 |
| ·材料 | 第60页 |
| ·试剂 | 第60页 |
| ·试剂的配制 | 第60-61页 |
| 2 方法 | 第61-64页 |
| ·总RNA 的提取 | 第61-62页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第62页 |
| ·荧光定量PCR 引物的设计 | 第62页 |
| ·荧光定量PCR | 第62-63页 |
| ·荧光定量PCR 数据分析 | 第63页 |
| ·总蛋白质的提取及定量 | 第63页 |
| ·Western blotting 检测30 kD 载脂蛋白19G1 的分布 | 第63-64页 |
| 3 结果 | 第64-68页 |
| ·家蚕发育过程中mRNA 量的变化 | 第64-65页 |
| ·家蚕发育过程中30 kD 载脂蛋白19G1 表达量的变化 | 第65-66页 |
| ·五龄幼虫各组织中mRNA 量的比较 | 第66-68页 |
| ·五龄幼虫各组织中30 kD 载脂蛋白19G1 表达量的比较 | 第68页 |
| 4 讨论 | 第68-69页 |
| 第七章 功能的初步研究 | 第69-73页 |
| 1 试剂和材料 | 第69页 |
| ·材料 | 第69页 |
| ·试剂 | 第69页 |
| 2 方法 | 第69-71页 |
| ·家蚕细胞的培养 | 第69-70页 |
| ·家蚕血清的收集及预处理 | 第70页 |
| ·制备新鲜的表达30 kD 载脂蛋白19G1 的大肠杆菌裂解液 | 第70页 |
| ·向细胞培养基中添加成分 | 第70页 |
| ·凋亡诱导 | 第70页 |
| ·家蚕Bm5 细胞存活率的测定 | 第70-71页 |
| 3 结果 | 第71-72页 |
| 4 讨论 | 第72-73页 |
| 结论与展望 | 第73-75页 |
| 结论 | 第73页 |
| 展望 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
