| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略语 | 第10-15页 |
| 第一章 家蚕的研究现状及实验技术路线 | 第15-22页 |
| 1 前言 | 第15-19页 |
| ·基因组学研究进展 | 第16-17页 |
| ·蛋白质质谱测序研究进展 | 第17-18页 |
| ·生物信息学研究进展及其在家蚕中的应用 | 第18-19页 |
| 2 实验目的和意义 | 第19页 |
| 3 实验方案设计 | 第19-20页 |
| ·家蚕全基因组数据获得 | 第19-20页 |
| ·家蚕蛹期质谱肽段的获得 | 第20页 |
| ·家蚕本地蛋白质序列的获得 | 第20页 |
| ·Ras-related GTP Binding protein C(BmRGPC)的表达分析 | 第20页 |
| 4 实验技术路线(见图1.1) | 第20-22页 |
| 第二章 数据库A 和B 的构建及结果分析 | 第22-31页 |
| 1 基于家蚕cDNA 文库的蛋白质数据库构建及其本地化 | 第22-29页 |
| ·cDNA 文库的构建 | 第22-23页 |
| ·家蚕蛹组织的总RNA 提取 | 第22页 |
| ·家蚕蛹组织的cDNA 序列的获得 | 第22-23页 |
| ·家蚕蛹组织的cDNA 文库的处理 | 第23页 |
| ·基于家蚕cDNA 文库的蛋白质数据库A 的构建与本地化 | 第23-24页 |
| ·蛋白质数据库A 的生物信息学分析 | 第24-29页 |
| ·数据库A 中的蛋白质序列注释结果 | 第24-29页 |
| ·数据库A 中信号肽和跨膜结构的分析结果 | 第29页 |
| 2 数据库B 的构建及其本地化 | 第29页 |
| 3 讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 家蚕蛹期蛋白质的质谱学分析及数据库C 的构建 | 第31-34页 |
| 1 材料与试剂 | 第31页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·试剂 | 第31页 |
| ·主要试剂的配制 | 第31页 |
| 2 方法 | 第31-32页 |
| ·家蚕蛹的分离 | 第31-32页 |
| ·家蚕蛹期蛋白质的预处理 | 第31页 |
| ·蚕蛹蛋白质的纯化和分离 | 第31-32页 |
| ·蛋白样品的制备 | 第32页 |
| ·家蚕蛹的质谱学测定 | 第32页 |
| ·质谱测定数据库C 的构建 | 第32页 |
| 3 结果与讨论 | 第32-34页 |
| 第四章 数据库A，B，C 的联配 | 第34-37页 |
| 1 背景介绍 | 第34页 |
| 2 结果统计 | 第34-35页 |
| 3 匹配上的蛋白质的功能分析 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-37页 |
| 第五章 ras-related GTP-binding Protein C(Bm RGPC)的分析 | 第37-51页 |
| 1 背景介绍 | 第37-38页 |
| 2 研究目的和意义 | 第38页 |
| 3 BmRGPC 的序列分析 | 第38-48页 |
| ·生物信息学工具 | 第39页 |
| ·Bm RGPC 基因的序列分析结果 | 第39-48页 |
| ·疏水性分析 | 第40-41页 |
| ·二级结构的预测 | 第41-42页 |
| ·BmRGPC 蛋白的高级结构预测 | 第42页 |
| ·BmRGPC 蛋白定位的预测 | 第42-43页 |
| ·信号肽分析 | 第43页 |
| ·功能位点分析 | 第43-45页 |
| ·BmRGPC 氨基酸残基序列同源性分析 | 第45-47页 |
| ·BmRGPC 进化树的构建 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-51页 |
| 第六章 Bm RGPC 的原核表达研究 | 第51-61页 |
| 1 材料与试剂 | 第51-52页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·试剂 | 第51页 |
| ·主要试剂的配制 | 第51-52页 |
| ·SDS-PAGE 用试剂 | 第51页 |
| ·Bradford 检测用试剂 | 第51-52页 |
| 2 方法 | 第52-59页 |
| ·Bm RGPC 基因的克隆 | 第52-57页 |
| ·PCR 扩增完整的ORF 序列 | 第52-53页 |
| ·PCR 产物与表达载体pET-28a 的双酶切 | 第53页 |
| ·酶切产物的纯化 | 第53页 |
| ·连接反应 | 第53-54页 |
| ·E.coli TG1、BL21(DE3)感受态细胞的制备 | 第54页 |
| ·连接产物的转化 | 第54页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第54-57页 |
| ·Bm RGPC 基因序列的测定 | 第57-58页 |
| ·测序PCR 反应体系 | 第57页 |
| ·测序PCR 反应条件 | 第57页 |
| ·测序流程的详细步骤如下 | 第57-58页 |
| ·重组质粒的转化及鉴定 | 第58页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的表达 | 第58页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析 | 第58-59页 |
| 3 实验结果 | 第59-60页 |
| ·PCR 扩增完整的ORF 序列 | 第59页 |
| ·重组质粒pET-28a-BmRGPC 的鉴定 | 第59-60页 |
| ·pET-28a-BmRGPC 的诱导表达及纯化 | 第60页 |
| 4 讨论 | 第60-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
