| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 缩略语 | 第12-13页 |
| 引言 | 第13-21页 |
| 1. EST技术研究进展 | 第13-14页 |
| ·EST技术概述 | 第13页 |
| ·EST技术的应用 | 第13-14页 |
| 2. 家蚕EST数据库的应用现状 | 第14-15页 |
| 3 cDNA末端快速扩增技术 | 第15-18页 |
| ·RACE技术概述 | 第15-16页 |
| ·RACE技术原理 | 第16-18页 |
| 4 细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK)的研究进展 | 第18-20页 |
| ·CDK的发现 | 第18页 |
| ·CDK的特性及命名 | 第18页 |
| ·CDK的结构特征 | 第18-19页 |
| ·CDK在细胞周期调控中的作用 | 第19页 |
| ·CDK的其它功能 | 第19-20页 |
| 5 小结与展望 | 第20-21页 |
| 第一章 一般材料和常规实验方法 | 第21-28页 |
| 1 一般材料 | 第21-22页 |
| ·菌种和载体 | 第21页 |
| ·工具酶和试剂 | 第21页 |
| ·其它主要试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器与设备 | 第21-22页 |
| ·家蚕的饲养 | 第22页 |
| 2 常用试剂的配制 | 第22-24页 |
| 3 方法 | 第24-28页 |
| ·碱法少量快速抽提质粒DNA | 第24页 |
| ·DNA和RNA浓度测定 | 第24-25页 |
| ·质粒DNA的限制性内切酶反应 | 第25页 |
| ·玻璃奶法纯化回收DNA片段 | 第25页 |
| ·DNA连接 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·质粒DNA或连接产物的转化 | 第26页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第26-28页 |
| 第二章 家蚕CDK家族的建立 | 第28-30页 |
| 1 相关的生物信息学软件及网站 | 第28页 |
| ·软件 | 第28页 |
| ·网站 | 第28页 |
| 2 方法 | 第28页 |
| 3 结果分析 | 第28-29页 |
| ·BmCDK基因家族的构建 | 第28-29页 |
| 4 讨论 | 第29-30页 |
| 第三章 家蚕CDK家族成员的克隆和序列分析 | 第30-38页 |
| 1 材料和试剂 | 第30页 |
| ·材料 | 第30页 |
| ·试剂 | 第30页 |
| 2 方法 | 第30-33页 |
| ·利用Trizol抽提组织总RNA | 第30-31页 |
| ·cDNA末端快速扩增 | 第31-32页 |
| ·家蚕基因组DNA的制备 | 第32页 |
| ·本章所用PCR引物列表 | 第32-33页 |
| ·目的片段的回收、克隆及测序 | 第33页 |
| ·序列分析方法 | 第33页 |
| 3 结果分析 | 第33-37页 |
| ·家蚕CDK家族5个成员的克隆与序列分析 | 第33-35页 |
| ·家蚕CDK7、CDK9基因的基因组序列补全 | 第35-36页 |
| ·BmCDKs基因结构 | 第36-37页 |
| 4 讨论 | 第37-38页 |
| 第四章 生物信息学分析 | 第38-42页 |
| 1 生物信息学工具和方法 | 第38页 |
| 2 分析结果 | 第38-42页 |
| ·Bm-DnaJ1蛋白的抗原指数分析 | 第38-39页 |
| ·疏水性分析 | 第39页 |
| ·信号肽预测 | 第39-40页 |
| ·蛋白质的跨膜区结构分析 | 第40-41页 |
| ·蛋白质在细胞内的定位分析 | 第41页 |
| ·蛋白质的高级结构预测 | 第41-42页 |
| 第五章 家蚕CDKs基因同源性比较及进化分析 | 第42-49页 |
| 1 工具和方法 | 第42-43页 |
| 2 结果 | 第43-49页 |
| ·CDKs基因的进化分析 | 第43-44页 |
| ·BmCDKs蛋白保守结构域及其同源比对 | 第44-45页 |
| ·BmCDKs蛋白多物种全序列同源比对 | 第45-49页 |
| 第六章 家蚕CDKs五龄组织分布 | 第49-58页 |
| 1 材料和试剂 | 第49页 |
| 2 方法 | 第49-51页 |
| ·反转录PCR(RT-PCR) | 第49-50页 |
| ·荧光定量RT-PCR(Realtime Quantitative RT-PCR) | 第50页 |
| ·用作荧光定量PCR的引物表 | 第50-51页 |
| 3 结果 | 第51-56页 |
| ·BmCDKs的扩增曲线及熔解曲线 | 第51-54页 |
| ·BmCDKs的标准曲线 | 第54-56页 |
| ·BmCDK五龄幼虫十三个组织表达差异 | 第56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 第七章 BmCDKs胚胎发育时期表达变化 | 第58-64页 |
| 1 材料和试剂 | 第58页 |
| 2 方法 | 第58-59页 |
| ·Solution D法抽提蚕卵总RNA | 第58-59页 |
| ·cDNA第一链的合成及荧光定量PCR | 第59页 |
| 3. 实验结果 | 第59-62页 |
| ·BmCDKs胚胎发育时期扩增曲线与熔解曲线 | 第59-61页 |
| ·BmCDKs胚胎发育时期表达量变化 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-64页 |
| 第八章 杆状病毒感染对BmCDKs表达的影响 | 第64-69页 |
| 1 材料和试剂 | 第64页 |
| 2 方法 | 第64页 |
| ·病毒感染 | 第64页 |
| ·cDNA第一链的合成及荧光定量PCR | 第64页 |
| 3 实验结果 | 第64-68页 |
| ·感染病毒后BmCDK1扩增曲线与熔解曲线 | 第64-67页 |
| ·杆状病毒感染后BmCDKs相对拷贝变化 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-69页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 第九章 家蚕小热激蛋白家族成员Hsp23.7基因的克隆与分析(已发表的工作) | 第70-75页 |
| 引言 | 第70页 |
| 1. 材料与方法 | 第70-71页 |
| ·材料 | 第70页 |
| ·家蚕总RNA的提取 | 第70页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第70页 |
| ·家蚕Bm-Hsp23.7基因的克隆和表达载体构建 | 第70-71页 |
| ·实时荧光定量PCR引物设计 | 第71页 |
| ·实时荧光定量PCR分析 | 第71页 |
| 2 结果与分析 | 第71-74页 |
| ·家蚕Bm-Hsp23.7基因ORF的克隆 | 第71-72页 |
| ·家蚕Bm-Hsp23.7基因的诱导表达 | 第72-73页 |
| ·BmHsp23.7基因组织表达谱分析 | 第73-74页 |
| 3 讨论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 在学期间发表的论文 | 第80页 |
