| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-21页 |
| 1.1 马铃薯Y病毒属研究进展 | 第9-15页 |
| 1.1.1 马铃薯Y病毒属病毒的一般特性 | 第10页 |
| 1.1.2 马铃薯Y病毒属病毒分子生物学特性 | 第10-14页 |
| 1.1.3 马铃薯Y病毒属病毒分类标准的确立 | 第14-15页 |
| 1.2 落葵皱缩花叶病毒的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.2.1 落葵皱缩花叶病毒的研究现状 | 第15页 |
| 1.2.2 落葵皱缩花叶病毒的普通生物学特性 | 第15-16页 |
| 1.2.2.1 落葵皱缩花叶病毒的病毒粒子 | 第15页 |
| 1.2.2.2 落葵皱缩花叶病毒的寄主范围 | 第15-16页 |
| 1.2.2.4 落葵皱缩花叶病毒的植物病症 | 第16页 |
| 1.2.3 落葵皱缩花叶病毒的分子生物学特性 | 第16-17页 |
| 1.3 侵染紫茉莉植物病毒的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3.1 紫茉莉植物的分类学特征 | 第17页 |
| 1.3.2 侵染紫茉莉植物病毒的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.4 原核表达载体的构建及诱导表达技术 | 第18-20页 |
| 1.4.1 原核表达体系 | 第18-19页 |
| 1.4.2 原核表达策略 | 第19页 |
| 1.4.3 原核表达产物的分离纯化 | 第19-20页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-43页 |
| 2.1 材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 病样和无毒苗 | 第21页 |
| 2.1.2 菌株与载体质粒 | 第21-22页 |
| 2.2 试剂与仪器 | 第22-24页 |
| 2.2.1 试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.2 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.3 方法 | 第24-43页 |
| 2.3.1 生物学 | 第24-25页 |
| 2.3.1.1 病毒接种 | 第24-25页 |
| 2.3.1.2 电子显微镜观察 | 第25页 |
| 2.3.2 序列测定和分析 | 第25-34页 |
| 2.3.2.1 RNA抽提 | 第26-28页 |
| 2.3.2.2 cDNA第一链合成 | 第28页 |
| 2.3.2.3 聚合酶链式反应(PCR) | 第28-29页 |
| 2.3.2.4 3’-RACE | 第29-30页 |
| 2.3.2.5 5’-RACE | 第30-31页 |
| 2.3.2.6 DNA片段切胶纯化 | 第31-32页 |
| 2.3.2.7 T-A连接 | 第32页 |
| 2.3.2.8 感受态细胞制备 | 第32-33页 |
| 2.3.2.9 转化和筛选 | 第33页 |
| 2.3.2.10 质粒提取 | 第33-34页 |
| 2.3.2.11 重组质粒的鉴定 | 第34页 |
| 2.3.2.12 序列测定和分析 | 第34页 |
| 2.3.3 血清学 | 第34-41页 |
| 2.3.3.1 BaRMV CP基因原核表达载体构建 | 第34-36页 |
| 2.3.3.2 蛋白的SDS-PAGE电泳 | 第36-37页 |
| 2.3.3.3 BaRMV CP蛋白原核表达诱导条件的优化 | 第37页 |
| 2.3.3.4 BaRMV CP蛋白大量表达及纯化 | 第37-38页 |
| 2.3.3.5 目的蛋白纯化 | 第38页 |
| 2.3.3.6 蛋白浓度测定 | 第38-39页 |
| 2.3.3.7 BaRMV CP蛋白抗血清制备 | 第39-41页 |
| 2.3.4 Western Blot(蛋白免疫印迹) | 第41-43页 |
| 2.3.4.1 SDS-PAGE电泳分离目的蛋白 | 第41页 |
| 2.3.4.2 蛋白印迹 | 第41-43页 |
| 第三章 结果与分析 | 第43-77页 |
| 3.1 生物学 | 第43-46页 |
| 3.1.1 紫茉莉花叶病症状 | 第43页 |
| 3.1.2 紫茉莉感病叶片电镜观察 | 第43-44页 |
| 3.1.3 接种观察 | 第44-46页 |
| 3.2 基因组序列测定和分析 | 第46-67页 |
| 3.2.1 BaRMV-MJ基因组序列测定 | 第46-49页 |
| 3.2.2 BaRMV-MJ序列分析 | 第49-53页 |
| 3.2.3 BaRMV-MJ的系统进化分析 | 第53-67页 |
| 3.2.3.1 BaRMV-MJ CP基因及3’-UTR的系统进化分析 | 第53-61页 |
| 3.2.3.2 BaRMV-MJ CI基因的系统进化分析 | 第61-64页 |
| 3.2.3.3 BaRMV-MJ ORF序列的系统进化分析 | 第64-67页 |
| 3.3 血清学 | 第67-77页 |
| 3.3.1 原核表达载体pET30a-CP的构建与鉴定 | 第67-68页 |
| 3.3.2 BaRMV-MJ CP基因的诱导表达及检测 | 第68-69页 |
| 3.3.3 重组蛋白His-CP原核表达及诱导条件优化 | 第69-71页 |
| 3.3.3.1 诱导温度的优化 | 第69-70页 |
| 3.3.3.2 诱导时间的优化 | 第70-71页 |
| 3.3.3.3 IPTG诱导浓度的优化 | 第71页 |
| 3.3.4 重组蛋白His-CP的大量表达 | 第71-72页 |
| 3.3.5 BaRMV-MJ CP蛋白抗血清的制备 | 第72-77页 |
| 3.3.5.1 免疫家兔制备BaRMV-MJ CP蛋白多克隆抗血清 | 第72页 |
| 3.3.5.2 间接ELISA评估抗BaRMV-MJ CP血清效价 | 第72页 |
| 3.3.5.3 BaRMV-MJ CP蛋白多克隆抗血清Western blot检测 | 第72-74页 |
| 3.3.5.4 间接ELISA法检测感BaRMV病毒植株 | 第74-77页 |
| 第四章 分析与讨论 | 第77-80页 |
| 4.1 生物学 | 第77页 |
| 4.2 基因组序列测定和分析 | 第77-79页 |
| 4.3 血清学 | 第79-80页 |
| 第五章 结论与展望 | 第80-82页 |
| 5.1 结论 | 第80-81页 |
| 5.2 展望 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-88页 |
| 附录1 BaRMV-MJ核苷酸序列及氨基酸序列信息 | 第88-103页 |
| 附录2 实验中常规溶液及培养基的配制方法 | 第103-107页 |
| 附录3 病毒缩写与中英文对照 | 第107-109页 |
| 在读期间参与项目和发表论文 | 第109-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
