| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 第一章 细胞色素P450的研究进展 | 第12-26页 |
| 第一节 细胞色素P450的研究概况 | 第12-14页 |
| 第二节 细胞色素P450的功能概述 | 第14-17页 |
| 一 细胞色素P450的性质 | 第14-16页 |
| 二 细胞色素P450催化的不同反应 | 第16-17页 |
| 第三节 植物及微生物中生物合成相关的P450 | 第17-26页 |
| 一 植物中生物合成相关的细胞色素P450 | 第17-21页 |
| 二 微生物中生物合成相关的细胞色素P450 | 第21-22页 |
| 三 结构已知的天然产物细胞色素P450 | 第22-26页 |
| 第二章 少孢节丛孢中P450基因AOL_s00110g222的研究 | 第26-72页 |
| 第一节 P450基因AOL_s00110G222的功能分析 | 第26-30页 |
| 一 分析方法 | 第26-27页 |
| 二 分析结果 | 第27-30页 |
| 第二节 P450基因AOL_s00110G222的敲除菌株构建 | 第30-48页 |
| 一 实验材料与方法 | 第33-42页 |
| 1 实验材料 | 第33-35页 |
| 2 实验方法 | 第35-42页 |
| 2.1 基因组提取 | 第35-36页 |
| 2.2 敲除载体的构建 | 第36-41页 |
| 2.3 原生质体的制备 | 第41页 |
| 2.4 原生质体的转化 | 第41-42页 |
| 2.5 转化子的筛选和突变株的验证 | 第42页 |
| 二 实验结果 | 第42-46页 |
| 1 敲除载体的构建 | 第42-46页 |
| 2 转化子筛选和突变株验证 | 第46页 |
| 三 讨论 | 第46-48页 |
| 第三节 少孢节从孢P450敲除菌株表型的比较分析 | 第48-58页 |
| 一 实验材料与方法 | 第48-49页 |
| 1 实验材料 | 第48页 |
| 2 实验方法 | 第48-49页 |
| 2.1 菌株生长 | 第48-49页 |
| 2.2 孢子数量及孢子萌发率 | 第49页 |
| 2.3 三维菌网(捕器)及线虫捕食率 | 第49页 |
| 二 实验结果与分析 | 第49-56页 |
| 1 菌丝生长速率及形态 | 第49-52页 |
| 2 产孢数量及孢子萌发率 | 第52-53页 |
| 3 活线虫诱导捕器情况 | 第53-55页 |
| 4 线虫捕食率比较 | 第55-56页 |
| 三 讨论 | 第56-58页 |
| 第四节 敲除菌株△ADL_S00110G222的次生代谢产物的检测分析 | 第58-72页 |
| 一 实验材料与方法 | 第58-60页 |
| 1 实验材料 | 第58-59页 |
| 2 实验方法 | 第59-60页 |
| 2.1 发酵培养和样品处理 | 第59页 |
| 2.2 高效液相色谱(HPLC)检测方法 | 第59-60页 |
| 2.3 气相色谱-质谱(GC-MS)检测方法 | 第60页 |
| 二 实验结果与分析 | 第60-68页 |
| 1 HPLC检测结果 | 第60-61页 |
| 2 GC-MS检测结果 | 第61-68页 |
| 三 讨论 | 第68-72页 |
| 第三章 Talaromyces thermophilus YM3-4中PKS/NRPS生物合成基因研究 | 第72-86页 |
| 第一节 PKS/NRPS生物合成酶的基因分析 | 第72-74页 |
| 一 T.thermophiles YM3-4中PKS/NRPS生物合成酶蛋白的分析 | 第72-74页 |
| 第二节 PKS/NRPS生物合成酶功能域基因片段的敲除载体构建 | 第74-86页 |
| 二 实验材料与方法 | 第75-81页 |
| 1 实验材料 | 第75-76页 |
| 2 实验方法 | 第76-81页 |
| 2.1 T. thermophilus YM3-4基因组的提取 | 第76页 |
| 2.2 引物的设计 | 第76-77页 |
| 2.3 目的片段的扩增及酶切 | 第77-79页 |
| 2.4 酵母感受态细胞的电转化 | 第79-80页 |
| 2.5 酵母转化子的质粒提取 | 第80页 |
| 2.6 大肠杆菌感受态细胞的化学转化 | 第80页 |
| 2.7 大肠杆菌转化子的提取及验证 | 第80页 |
| 2.8 敲除载体全长片段扩增及回收 | 第80-81页 |
| 三 实验结果 | 第81-85页 |
| 1 T. thermophilus中PKS/NRPS合成酶基因中NRPS和MT domain的5’端和3’端同源片段及hph扩增 | 第81-82页 |
| 2 电转化酵母结果 | 第82-83页 |
| 3 大肠杆菌DH5a转化子质粒PCR验证结果 | 第83-85页 |
| 4 原生质体转化结果 | 第85页 |
| 四 讨论 | 第85-86页 |
| 附录 | 第86-108页 |
| 参考文献 | 第108-126页 |
| 致谢 | 第126-127页 |
