| 中文摘要 | 第10-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 前言 | 第17-22页 |
| 参考文献 | 第19-22页 |
| 第一章 卵白蛋白结合的季铵化壳聚糖纳米粒的制备及表征 | 第22-49页 |
| 第一节 季铵化壳聚糖的合成和表征 | 第22-32页 |
| 1 仪器和材料 | 第22-23页 |
| 1.1 仪器 | 第22-23页 |
| 1.2 材料和试剂 | 第23页 |
| 1.3 溶液的配制 | 第23页 |
| 2 实验方法 | 第23-27页 |
| 2.1 壳聚糖材料的制备 | 第23-24页 |
| 2.2 TMAEMC含量分析方法的建立与评价 | 第24-25页 |
| 2.3 SMP含量分析方法的建立与评价 | 第25-26页 |
| 2.4 壳聚糖材料的表征 | 第26-27页 |
| 3 实验结果 | 第27-31页 |
| 3.1 TMAEMC含量分析方法的评价 | 第27-28页 |
| 3.2 SMP含量分析方法的评价 | 第28-29页 |
| 3.3 壳聚糖材料的表征 | 第29-31页 |
| 4 讨论 | 第31-32页 |
| 第二节 OVA结合的季铵化壳聚糖纳米粒(OVA-NP)的制备及表征 | 第32-46页 |
| 1 仪器和材料 | 第32-33页 |
| 1.1 仪器 | 第32页 |
| 1.2 试剂 | 第32页 |
| 1.3 实验动物 | 第32-33页 |
| 1.4 溶液的配制 | 第33页 |
| 2 实验方法 | 第33-38页 |
| 2.1 改良硫酸-苯酚法测定Mal-TMC的含量 | 第33-34页 |
| 2.2 OVA共价连接的Mal-TMC纳米粒(OVA-NP)的制备及处方优化 | 第34-36页 |
| 2.3 OVA-NP的表征 | 第36页 |
| 2.4 OVA-NP的放置稳定性 | 第36页 |
| 2.5 OVA-NP在鼻粘膜匀浆中的稳定性 | 第36-38页 |
| 3 实验结果 | 第38-45页 |
| 3.1 改良硫酸-苯酚法测定Mal-TMC的含量 | 第38-39页 |
| 3.2 SEC-HPLC测定OVA的含量 | 第39-40页 |
| 3.3 HPLC-FLD测定FITC-OVA及FITC的含量 | 第40-41页 |
| 3.4 FITC-OVA的纯度及稳定性 | 第41页 |
| 3.5 OVA-NP制备条件的筛选 | 第41-43页 |
| 3.6 OVA-NP的表征 | 第43-45页 |
| 4 讨论 | 第45-46页 |
| 4.1 OVA与TMC连接方法的选择 | 第45-46页 |
| 4.2 OVA含量测定方法的选择 | 第46页 |
| 4.3 OVA-NP粒径控制范围的选择 | 第46页 |
| 5 小结 | 第46页 |
| 参考文献 | 第46-49页 |
| 第二章 OVA-NP的颈淋巴结靶向性评价 | 第49-71页 |
| 1 仪器和材料 | 第50-51页 |
| 1.1 仪器 | 第50页 |
| 1.2 材料和试剂 | 第50-51页 |
| 1.3 实验动物 | 第51页 |
| 1.4 溶液的配制 | 第51页 |
| 2 实验方法 | 第51-55页 |
| 2.1 OVA的~(125)I标记 | 第51-52页 |
| 2.2 ~(125)I标记的OVA制剂的制备 | 第52-53页 |
| 2.3 纳米粒跨Calu-3细胞单层转运 | 第53-54页 |
| 2.4 纳米粒的Raw264.7细胞摄取 | 第54页 |
| 2.5 OVA-NP鼻腔给药的颈淋巴结靶向性评价 | 第54-55页 |
| 3 实验结果 | 第55-66页 |
| 3.1 ~(125)I-OVA的标记率、放化纯度及稳定性 | 第55页 |
| 3.2 NPe的表征 | 第55-56页 |
| 3.3 OVA-TMC的验证 | 第56页 |
| 3.4 纳米粒的跨Calu-3细胞单层膜转运 | 第56-58页 |
| 3.5 纳米粒的Raw 264.7细胞摄取 | 第58-59页 |
| 3.6 OVA-NP鼻腔给药的颈淋巴结靶向性评价 | 第59-66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| 4.1 OVA的~(125)I标记方法的选择 | 第66页 |
| 4.2 设立OVA对照制剂的依据 | 第66-67页 |
| 4.3 纳米粒跨Calu-3单层膜转运时间点的选择 | 第67页 |
| 4.4 纳米粒体外跨Calu-3单层膜转运较少,为何体内转运到淋巴结的量较多? | 第67页 |
| 4.5 NPe的包封率问题 | 第67-68页 |
| 4.6 I.M.组抗原向颈部淋巴结的转运 | 第68页 |
| 5 小结 | 第68页 |
| 参考文献 | 第68-71页 |
| 第三章 OVA-NP的鼻腔免疫效果评价 | 第71-84页 |
| 1 仪器和材料 | 第71-72页 |
| 1.1 仪器 | 第71页 |
| 1.2 材料和试剂 | 第71页 |
| 1.3 实验动物 | 第71页 |
| 1.4 溶液的配制 | 第71-72页 |
| 2 实验方法 | 第72-73页 |
| 2.1 制剂的制备 | 第72页 |
| 2.2 动物分组及给药方案 | 第72页 |
| 2.3 样品收集 | 第72-73页 |
| 2.4 酶联免疫吸附法(ELISA)测定OVA特异性抗体 | 第73页 |
| 2.5 统计分析 | 第73页 |
| 3 实验结果 | 第73-81页 |
| 3.1 OVA-NP诱导的系统免疫应答 | 第73-79页 |
| 3.2 OVA-NP诱导的粘膜免疫应答 | 第79-81页 |
| 4 讨论 | 第81-82页 |
| 4.1 鼻腔免疫的应用价值 | 第81-82页 |
| 4.2 为什么OVA-NP初次免疫无明显效果,但多次免疫后IgG抗体水平超过I.M.组? | 第82页 |
| 5 小结 | 第82页 |
| 参考文献 | 第82-84页 |
| 第四章 OVA-NP的鼻腔免疫机理研究 | 第84-106页 |
| 1 仪器和材料 | 第85-86页 |
| 1.1 仪器 | 第85页 |
| 1.2 试剂 | 第85页 |
| 1.3 实验动物 | 第85页 |
| 1.4 溶液的配制 | 第85-86页 |
| 2 实验方法 | 第86-89页 |
| 2.1 OVA-NP对免疫细胞的活化 | 第86-87页 |
| 2.2 OVA-NP大鼠鼻粘膜转运的定性观察 | 第87-88页 |
| 2.3 OVA-NP鼻腔免疫后NALT分泌的sIgA、IgG抗体 | 第88-89页 |
| 2.4 鼻腔中IgA型浆细胞的观察 | 第89页 |
| 3 实验结果 | 第89-102页 |
| 3.1 OVA-NP对免疫细胞的活化 | 第89-94页 |
| 3.2 OVA-NP大鼠鼻粘膜转运的定性观察 | 第94-98页 |
| 3.3 OVA-NP小鼠鼻腔免疫后NALT分泌的sIgA、IgG抗体 | 第98-100页 |
| 3.4 鼻腔中IgA型浆细胞的观察 | 第100-102页 |
| 4 讨论 | 第102页 |
| 4.1 OVA-NP诱导免疫应答的类型 | 第102页 |
| 5 小结 | 第102页 |
| 参考文献 | 第102-106页 |
| 第五章 OVA-NP的安全性评价 | 第106-119页 |
| 1 仪器和材料 | 第106-107页 |
| 1.1 仪器 | 第106页 |
| 1.2 材料和试剂 | 第106-107页 |
| 1.3 实验动物 | 第107页 |
| 2 实验方法 | 第107-110页 |
| 2.1 OVA-NP的制备 | 第107页 |
| 2.2 OVA-NP的Calu-3细胞毒性 | 第107-109页 |
| 2.3 蟾蜍上腭纤毛摆动实验 | 第109页 |
| 2.4 大鼠鼻粘膜毒性实验 | 第109页 |
| 2.5 溶血性实验 | 第109-110页 |
| 3 实验结果 | 第110-116页 |
| 3.1 Calu-3细胞毒性 | 第110-113页 |
| 3.2 OVA-NP对蟾蜍上腭纤毛摆动的影响 | 第113-114页 |
| 3.3 OVA-NP对大鼠鼻粘膜的毒性 | 第114-115页 |
| 3.4 溶血性实验 | 第115-116页 |
| 4 讨论 | 第116-117页 |
| 4.1 鼻粘膜毒性的评价方法 | 第116页 |
| 4.2 大鼠鼻粘膜毒性实验中给药方案的确定 | 第116-117页 |
| 4.3 细胞毒性和体内毒性的结果为何有较大差异? | 第117页 |
| 4.4 溶血实验中1M盐酸的作用 | 第117页 |
| 5 小结 | 第117页 |
| 参考文献 | 第117-119页 |
| 第六章 甲型H1N1流感病毒抗原结合的季铵化壳聚糖纳米粒的制备及免疫效果评价 | 第119-139页 |
| 1 仪器和材料 | 第119-120页 |
| 1.1 仪器 | 第119页 |
| 1.2 材料和试剂 | 第119-120页 |
| 1.3 实验动物 | 第120页 |
| 2 实验方法 | 第120-126页 |
| 2.1 SEC-HPLC测定H1N1的含量 | 第120页 |
| 2.2 H1N1-NP的制备 | 第120-121页 |
| 2.3 H1N1-NP的表征 | 第121页 |
| 2.4 H1N1的抗原活性(血凝试验) | 第121-123页 |
| 2.5 H1N1对照制剂的制备 | 第123页 |
| 2.6 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)验证H1N1-TMC、H1N1-NP的结构 | 第123页 |
| 2.7 H1N1-NP的鼻腔免疫效果评价 | 第123-124页 |
| 2.8 ELISA测定H1N1特异性抗体 | 第124页 |
| 2.9 NALT分泌的slgA、IgG抗体 | 第124-125页 |
| 2.10 血凝抑制试验 | 第125页 |
| 2.11 H1N1-NP的鼻粘膜毒性评价 | 第125-126页 |
| 3 实验结果 | 第126-136页 |
| 3.1 SEC-HPLC测定H1N1的含量 | 第126-127页 |
| 3.2 H1N1-NP的表征 | 第127-128页 |
| 3.3 H1N1及H1N1-NP的稳定性 | 第128页 |
| 3.4 SDS-PAGE验证H1N1-TMC、H1N1-NP的结构 | 第128-129页 |
| 3.5 H1N1-NP的鼻腔免疫效果评价 | 第129-133页 |
| 3.6 NALT分泌的sIgA、IgG抗体 | 第133-134页 |
| 3.7 血凝抑制滴度的测定 | 第134-135页 |
| 3.8 H1N1-NP的鼻粘膜毒性评价 | 第135-136页 |
| 4 讨论 | 第136-137页 |
| 4.1 包封OVA、H1N1的NPe制备方法的差异 | 第136页 |
| 4.2 中和抗体水平与血凝抑制试验结果的差异 | 第136-137页 |
| 4.3 为什么H1N1-NP未与市售H1N1 FluMist& | 第137页 |
| 5 小结 | 第137页 |
| 参考文献 | 第137-139页 |
| 全文总结 | 第139-140页 |
| 主要创新点 | 第140-141页 |
| 后续工作及展望 | 第141-142页 |
| 论文发表情况 | 第142-143页 |
| 致谢 | 第143-144页 |
