| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-17页 |
| 1.1 概述 | 第13页 |
| 1.2 RecQL4 相关疾病 | 第13-14页 |
| 1.3 RecQL4 的作用 | 第14-16页 |
| 1.3.1 RecQL4 在 DNA 复制中的作用 | 第14页 |
| 1.3.2 RecQL4 在端粒中的作用 | 第14-15页 |
| 1.3.3 RecQL4 在线粒体 DNA 中的作用 | 第15-16页 |
| 1.4 结语与展望 | 第16-17页 |
| 2 解旋酶 RecQL4 抗原表位的预测合成、偶联及鉴定 | 第17-23页 |
| 2.1 材料和设备 | 第17页 |
| 2.2 抗原表位预测 | 第17页 |
| 2.3 多肽与KLH载体蛋白偶联 | 第17-18页 |
| 2.4 多肽偶联抗原的鉴定 | 第18页 |
| 2.4.1 偶联物蛋白浓度测定 | 第18页 |
| 2.4.2 SDS-PAGE 鉴定 | 第18页 |
| 2.5 结果分析 | 第18-21页 |
| 2.5.1 RecQL4 蛋白表位预测结果 | 第18-19页 |
| 2.5.2 多肽合成及鉴定结果 | 第19-21页 |
| 2.5.3 多肽与载体蛋白KLH偶联结果 | 第21页 |
| 2.5.4 SDS-PAGE 鉴定结果 | 第21页 |
| 2.6 小结 | 第21-23页 |
| 3 解旋酶 RecQL4 单克隆抗体制备及鉴定 | 第23-32页 |
| 3.1 试剂 | 第23页 |
| 3.2 仪器设备 | 第23页 |
| 3.3 多肽抗原免疫 | 第23页 |
| 3.4 免疫小鼠血清效价测定 | 第23-24页 |
| 3.5 细胞融合 | 第24-25页 |
| 3.5.1 小鼠腹腔饲养细胞的制备 | 第24页 |
| 3.5.2 免疫小鼠脾细胞的获取 | 第24页 |
| 3.5.3 小鼠骨髓瘤细胞的获取 | 第24-25页 |
| 3.5.4 细胞融合 | 第25页 |
| 3.5.5 阳性杂交瘤细胞株的筛选 | 第25页 |
| 3.5.6 阳性单克隆杂交瘤细胞冻存与复苏 | 第25页 |
| 3.6 单克隆抗体制备及其特性鉴定 | 第25-28页 |
| 3.6.1 单克隆抗体的大量制备 | 第25-26页 |
| 3.6.2 单克隆抗体的纯化 | 第26页 |
| 3.6.3 单克隆抗体的鉴定 | 第26-28页 |
| 3.6.3.1 效价测定 | 第26页 |
| 3.6.3.2 单克隆抗体亚型测定 | 第26-27页 |
| 3.6.3.3 单克隆抗体亲和力测定 | 第27页 |
| 3.6.3.4 抗体的特异性测定 | 第27-28页 |
| 3.7 结果分析 | 第28-31页 |
| 3.7.1 多肽抗原免疫小鼠效价 | 第28-29页 |
| 3.7.2 细胞融合和杂交瘤细胞株制备 | 第29页 |
| 3.7.3 纯化单抗效价测定 | 第29-30页 |
| 3.7.4 单抗亚型测定 | 第30页 |
| 3.7.5 单抗亲和常数测定 | 第30页 |
| 3.7.6 抗体特异性测定 | 第30-31页 |
| 3.8 小结 | 第31-32页 |
| 4 解旋酶 RecQL4 胶体金免疫层析初步建立 | 第32-43页 |
| 4.1 试剂和材料 | 第32页 |
| 4.2 设备 | 第32页 |
| 4.3 胶体金及金标抗体的制备 | 第32-36页 |
| 4.3.1 胶体金的制备 | 第32-34页 |
| 4.3.1.1 制备前的准备 | 第32-33页 |
| 4.3.1.2 胶体金溶液的制备 | 第33页 |
| 4.3.1.3 胶体金的质量鉴定 | 第33-34页 |
| 4.3.2 胶体金标记 RecQL4 单克隆抗体 | 第34-36页 |
| 4.3.2.1 单克隆抗体的处理 | 第34页 |
| 4.3.2.2 胶体金标记抗体最佳 pH 值确定 | 第34-35页 |
| 4.3.2.3 胶体金标记抗体最佳蛋白量的测定 | 第35-36页 |
| 4.3.2.4 胶体金标记 RecQL4 单克隆抗体制备 | 第36页 |
| 4.4 胶体金层析试纸条组分优化 | 第36-37页 |
| 4.4.1 胶体金试纸条各组分的选择 | 第36-37页 |
| 4.4.1.1 NC 膜的选择 | 第36页 |
| 4.4.1.2 吸水垫的选择 | 第36页 |
| 4.4.1.3 胶体金检测线 T 线浓度的确定 | 第36-37页 |
| 4.4.1.4 胶体金检测卡的组装 | 第37页 |
| 4.5 胶体金试剂卡检测试验 | 第37页 |
| 4.5.1 检测线性范围 | 第37页 |
| 4.6 结果分析 | 第37-41页 |
| 4.6.1 胶体金的鉴定 | 第37-39页 |
| 4.6.1.1 肉眼观察 | 第37-38页 |
| 4.6.1.2 紫外-可见分光光度法鉴定 | 第38页 |
| 4.6.1.3 透射电镜鉴定 | 第38-39页 |
| 4.6.2 胶体金标记蛋白的最佳 pH 和标记量 | 第39-40页 |
| 4.6.2.1 最佳标记 pH 值的选择 | 第39页 |
| 4.6.2.2 胶体金标记抗体最佳标记量的测定 | 第39-40页 |
| 4.6.3 胶体金检测卡组分 | 第40-41页 |
| 4.6.3.1 NC 膜的选择 | 第40页 |
| 4.6.3.2 吸水垫的选择 | 第40-41页 |
| 4.6.3.3 检测线T线浓度确定 | 第41页 |
| 4.6.4. 检测线性范围 | 第41页 |
| 4.7 小结 | 第41-43页 |
| 5 讨论 | 第43-45页 |
| 5.1 RecQL4 抗原表位预测和多肽偶联 | 第43页 |
| 5.2 单克隆抗体的制备 | 第43页 |
| 5.3 胶体金免疫层析卡的制备 | 第43页 |
| 5.4 相关研究进展 | 第43-45页 |
| 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-49页 |
| 附录 | 第49-50页 |
| 后记（含致谢） | 第50-51页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果清单 | 第51页 |
