| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 常用缩写词与英汉对照 | 第7-12页 |
| 1 前言 | 第12-24页 |
| 1.1 犬流感概述 | 第12-13页 |
| 1.1.1 犬流感流行概况 | 第12页 |
| 1.1.2 犬流感的临床症状及诊断 | 第12页 |
| 1.1.3 犬流感的防治 | 第12-13页 |
| 1.2 H3N2亚型犬流感病毒研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2.1 H3N2 CIV流行概况 | 第13页 |
| 1.2.2 H3N2亚型犬流感病毒形态学研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2.3 H3N2亚型犬流感病毒感染机制研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3 细胞凋亡 | 第15-19页 |
| 1.3.1 细胞凋亡与坏死 | 第15页 |
| 1.3.2 细胞凋亡通路研究进展 | 第15-17页 |
| 1.3.2.1 线粒体凋亡通路 | 第15-16页 |
| 1.3.2.2 内质网凋亡通路 | 第16页 |
| 1.3.2.3 死亡受体凋亡通路 | 第16-17页 |
| 1.3.3 细胞凋亡相关因子 | 第17-19页 |
| 1.3.3.1 MAPK家族 | 第17-18页 |
| 1.3.3.2 Bcl-2 家族 | 第18页 |
| 1.3.3.3 Caspase家族 | 第18-19页 |
| 1.4 犬流感病毒诱导细胞凋亡 | 第19页 |
| 1.4.1 流感病毒与细胞凋亡研究概况 | 第19页 |
| 1.4.2 H3N2亚型犬流感病毒与细胞凋亡研究概况 | 第19页 |
| 1.5 细胞凋亡与micro RNA | 第19页 |
| 1.6 Micro RNA | 第19-22页 |
| 1.6.1 Micro RNA概述 | 第19-20页 |
| 1.6.2 Micro RNA生物合成 | 第20页 |
| 1.6.3 Micro RNA作用机制 | 第20-21页 |
| 1.6.4 Micro RNA与病毒感染 | 第21-22页 |
| 1.7 Micro RNA Let-7 家族研究进展 | 第22-23页 |
| 1.7.1 Let-7a与流感病毒感染研究进展 | 第22页 |
| 1.7.2 Let-7a与细胞凋亡研究进展 | 第22-23页 |
| 1.8 本研究目的和意义 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-38页 |
| 2.1 材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 病毒株、细胞、鸡胚 | 第24页 |
| 2.1.2 主要试剂及耗材 | 第24页 |
| 2.1.3 主要试剂配制 | 第24-25页 |
| 2.1.4 主要仪器及设备 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-38页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第26-27页 |
| 2.2.1.1 MDCK细胞培养 | 第26-27页 |
| 2.2.1.2 293T细胞培养 | 第27页 |
| 2.2.1.3 细胞计数 | 第27页 |
| 2.2.2 H3N2亚型CIV的细胞感染实验 | 第27-29页 |
| 2.2.2.1 H3N2亚型CIV扩大培养 | 第27-28页 |
| 2.2.2.2 H3N2亚型CIV TCID50测定 | 第28页 |
| 2.2.2.3 H3N2亚型CIV感染MDCK细胞 | 第28-29页 |
| 2.2.3 H3N2亚型CIV感染MDCK细胞凋亡的检测 | 第29-30页 |
| 2.2.3.1 H3N2亚型CIV感染MDCK细胞后形态学观察 | 第29页 |
| 2.2.3.2 AO/EB染色测定感染后细胞凋亡率 | 第29页 |
| 2.2.3.3 Annexin-V FITC/PI双染料法测定感染后细胞凋亡率 | 第29-30页 |
| 2.2.4 Let-7a对CIV感染细胞凋亡调控检测 | 第30-33页 |
| 2.2.4.1 荧光定量PCR测定感染CIV后细胞内let-7a表达 | 第30-32页 |
| 2.2.4.2 转染let-7a拟似物及抑制物对细胞凋亡率的检测 | 第32-33页 |
| 2.2.5 Let-7a靶基因鉴定 | 第33-37页 |
| 2.2.5.1 Let-7a靶基因预测 | 第33页 |
| 2.2.5.2 荧光定量PCR和western blot测定靶基因表达 | 第33-34页 |
| 2.2.5.3 靶基因荧光素酶质粒构建及验证 | 第34-37页 |
| 2.2.6 荧光定量PCR测定let-7a对MAP4K3通路相关蛋白影响 | 第37页 |
| 2.2.7 实验数据的统计处理和分析 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-48页 |
| 3.1 H3N2亚型CIV感染MDCK细胞 | 第38-39页 |
| 3.1.1 H3N2亚型CIV的TCID50测定结果 | 第38页 |
| 3.1.2 H3N2亚型CIV感染MDCK细胞 | 第38-39页 |
| 3.2 H3N2亚型CIV感染MDCK细胞后形态观察及凋亡检测 | 第39-41页 |
| 3.2.1 H3N2亚型CIV感染MDCK细胞后形态观察 | 第39页 |
| 3.2.2 AO/EB凋亡检测法测定H3N2亚型CIV感染MDCK细胞后的凋亡率 | 第39-40页 |
| 3.2.3 FITC/PI凋亡检测法测定H3N2亚型CIV感染MDCK细胞后的凋亡率 | 第40-41页 |
| 3.3 CIV感染MDCK细胞后let-7a表达测定及其对凋亡影响 | 第41-43页 |
| 3.3.1 H3N2亚型CIV感染MDCK细胞后let-7a表达测定 | 第41-42页 |
| 3.3.2 Let-7a过表达或抑制对CIV引起的细胞凋亡的影响 | 第42-43页 |
| 3.4 Let-7a靶基因预测及其验证 | 第43-46页 |
| 3.4.1 Let-7a靶基因预测 | 第43页 |
| 3.4.2 荧光定量PCR和Western blot测定感染病毒后靶基因表达 | 第43-44页 |
| 3.4.3 Let-7a靶基因荧光素酶质粒构建及其验证 | 第44-46页 |
| 3.5 荧光定量PCR检测凋亡相关基因表达 | 第46-48页 |
| 3.5.1 荧光定量PCR检测let-7a对MAP4K3蛋白的调控作用 | 第46-47页 |
| 3.5.2 荧光定量PCR检测let-7a对通路下游凋亡蛋白m RNA的调控作用 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-52页 |
| 4.1 细胞凋亡诱导及检测 | 第48-49页 |
| 4.2 Let-7a对CIV诱导细胞凋亡的调控作用 | 第49-50页 |
| 4.3 关于let-7a靶基因的预测及验证 | 第50页 |
| 4.4 Let-7a如何调节CIV诱导产生的细胞凋亡 | 第50-52页 |
| 全文总结 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 附录 硕士期间发表论文 | 第60页 |
