| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第13-19页 |
| 1.1 光呼吸代谢过程 | 第13-14页 |
| 1.2 光呼吸的生理功能 | 第14-17页 |
| 1.2.1 光呼吸与氮代谢途径的关系 | 第15页 |
| 1.2.2 光呼吸与呼吸作用的关系 | 第15页 |
| 1.2.3 光呼吸与一碳代谢的关系 | 第15-16页 |
| 1.2.4 光呼吸与植物逆境反应的联系 | 第16-17页 |
| 1.3 光呼吸代谢研究技术 | 第17页 |
| 1.4 MATE研究进展 | 第17-18页 |
| 1.5 立题依据 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-34页 |
| 2.1 材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第19页 |
| 2.1.2 拟南芥的培养与管理 | 第19-20页 |
| 2.1.2.1 种子表面消毒及播种 | 第19页 |
| 2.1.2.2 移土栽培 | 第19页 |
| 2.1.2.3 实验材料培养 | 第19-20页 |
| 2.1.3 试剂及仪器 | 第20页 |
| 2.1.4 PCR引物及序列 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-27页 |
| 2.2.1 突变体筛选 | 第21-22页 |
| 2.2.1.1 EMS诱变 | 第21页 |
| 2.2.1.2 种植 | 第21页 |
| 2.2.1.3 光呼吸突变体初步筛选 | 第21-22页 |
| 2.2.1.4 筛选突变体的进一步验证 | 第22页 |
| 2.2.2 突变体氨基酸含量分析 | 第22-23页 |
| 2.2.2.1 HPLC法测定突变体中甘氨酸含量 | 第22-23页 |
| 2.2.2.2 突变体中总游离氨基酸含量测定 | 第23页 |
| 2.2.3 突变体的游离氨含量分析 | 第23-24页 |
| 2.2.4 图位克隆群体的构建 | 第24页 |
| 2.2.4.1 突变体杂交 | 第24页 |
| 2.2.4.2 取样 | 第24页 |
| 2.2.4.3 拟南芥叶片DNA提取 | 第24页 |
| 2.2.5 粗定位分析 | 第24-26页 |
| 2.2.6 精细定位分子标记设计 | 第26页 |
| 2.2.7 gene mapping PCR扩增体系及程序 | 第26-27页 |
| 2.2.7.1 PCR反应体系 | 第26页 |
| 2.2.7.2 PCR扩增程序 | 第26-27页 |
| 2.2.8 候选基因全基因组测序 | 第27页 |
| 2.3 功能分析 | 第27-34页 |
| 2.3.1 拟南芥基因组RNA提取及c DNA的合成 | 第27页 |
| 2.3.2 载体构建过程 | 第27-30页 |
| 2.3.2.1 目的片段的获取 | 第27-28页 |
| 2.3.2.2 酶切回收 | 第28页 |
| 2.3.2.3 连接 | 第28-29页 |
| 2.3.2.4 转化 | 第29页 |
| 2.3.2.5 菌落PCR鉴定 | 第29-30页 |
| 2.3.2.6 质粒提取 | 第30页 |
| 2.3.3 Gateway表达克隆 | 第30-31页 |
| 2.3.3.1 目的片段的获取 | 第30页 |
| 2.3.3.2 转化 | 第30-31页 |
| 2.3.3.3 重组 | 第31页 |
| 2.3.3.4 转化农杆菌 | 第31页 |
| 2.3.4 拟南芥转基因及阳性苗筛选 | 第31-32页 |
| 2.3.4.1 转基因 | 第31-32页 |
| 2.3.4.2 阳性苗筛选 | 第32页 |
| 2.3.5 拟南芥原生质体游离及转化 | 第32-33页 |
| 2.3.5.1 原生质体游离 | 第32页 |
| 2.3.5.2 原生质体转化 | 第32-33页 |
| 2.3.6 拟南芥的GUS染色 | 第33页 |
| 2.3.7 实时荧光定量PCR检测基因表达 | 第33-34页 |
| 2.3.8 genotyping鉴定T-DNA插入突变体 | 第34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-47页 |
| 3.1 光呼吸突变体库建立与筛选 | 第34-35页 |
| 3.2 光呼吸突变体表型分析 | 第35-36页 |
| 3.3 光呼吸突变体pr1甘氨酸含量分析 | 第36页 |
| 3.4 光呼吸突变体pr1全氨基酸含量分析 | 第36-38页 |
| 3.5 光呼吸突变体pr1的图位克隆 | 第38-39页 |
| 3.5.1 pr1突变体基因初步定位 | 第38页 |
| 3.5.2 pr1突变体基因精细定位 | 第38-39页 |
| 3.6 pr1突变体的互补实验 | 第39-40页 |
| 3.6.1 互补载体构建 | 第39-40页 |
| 3.6.2 互补植株表型观察 | 第40页 |
| 3.7 MATE1组织表达分析 | 第40-43页 |
| 3.7.1 载体构建 | 第40-41页 |
| 3.7.2 GUS染色观察 | 第41-42页 |
| 3.7.3 MATE1在不同条件下的转录分析 | 第42-43页 |
| 3.8 MATE1亚细胞定位 | 第43页 |
| 3.9 MATE1 T-DNA插入突变体筛选 | 第43-44页 |
| 3.10 MATE1 T-DNA插入突变体表型分析 | 第44-45页 |
| 3.11 MATE1过量表达载体的构建及转化后表型 | 第45-46页 |
| 3.11.1 过量表达载体的构建 | 第45页 |
| 3.11.2 过量表达植株表型分析 | 第45-46页 |
| 3.12 MATE1可能作用机理 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-50页 |
| 4.1 光呼吸突变体筛选 | 第47-48页 |
| 4.2 图位克隆定位 | 第48页 |
| 4.3 MATE1生理功能分析 | 第48-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
