| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略语中英文对照 | 第10-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-25页 |
| 1.1 影响鱼类肝脏脂质蓄积的因素 | 第15-17页 |
| 1.1.1 营养因素 | 第15-16页 |
| 1.1.2 生理因素 | 第16页 |
| 1.1.3 物种因素 | 第16页 |
| 1.1.4 环境因素 | 第16-17页 |
| 1.1.5 遗传与突变 | 第17页 |
| 1.2 鱼类形成脂肪肝的分子机制 | 第17-21页 |
| 1.2.1 鱼类脂肪肝的鉴别 | 第17页 |
| 1.2.2 鱼类脂肪肝的发生机制 | 第17-18页 |
| 1.2.3 影响鱼类脂肪肝形成的关键基因 | 第18-21页 |
| 1.3 miRNAs在动物脂肪代谢中的研究概况 | 第21-23页 |
| 1.3.1 mi RNAs的发现 | 第21页 |
| 1.3.2 mi RNAs基本生物学特性、调控机制 | 第21页 |
| 1.3.3 mi RNAs调控动物脂类代谢 | 第21-23页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第23-25页 |
| 第二章 高糖高脂饲料对草鱼生长及肝脏脂肪蓄积的影响 | 第25-35页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 材料 | 第25-26页 |
| 2.2.1 主要器具 | 第25页 |
| 2.2.2 主要试剂配制 | 第25-26页 |
| 2.3 方法 | 第26-30页 |
| 2.3.1 制作实验饲料 | 第26-27页 |
| 2.3.2 饲养与管理 | 第27页 |
| 2.3.3 样品采集与贮存 | 第27-28页 |
| 2.3.4 生长指标及生物学特征参数评价 | 第28页 |
| 2.3.5 血清生化指标的测定 | 第28-29页 |
| 2.3.6 肝脏组织石蜡切片的制作 | 第29-30页 |
| 2.4 结果与分析 | 第30-33页 |
| 2.4.1 高糖高脂饲料对草鱼生长及脂肪蓄积的影响 | 第30-31页 |
| 2.4.2 高糖高脂饲料对草鱼血清生化指标和肝脏组织的影响 | 第31-33页 |
| 2.5 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 高通量测序检测高糖高脂饲料对草鱼相关mi RNAs表达的影响 | 第35-45页 |
| 3.1 引言 | 第35页 |
| 3.2 材料与方法 | 第35-37页 |
| 3.2.1 制作实验饲料 | 第35页 |
| 3.2.2 饲养与管理 | 第35页 |
| 3.2.3 样品采集与贮存 | 第35页 |
| 3.2.4 提取样品总RNA | 第35-37页 |
| 3.2.5 小RNA分离 | 第37页 |
| 3.3 结果与分析 | 第37-43页 |
| 3.3.1 肝脏总RNA提取结果 | 第37-38页 |
| 3.3.2 高通量测序小RNA长度分析结果 | 第38-40页 |
| 3.3.3 小RNA测序数据注释结果 | 第40-41页 |
| 3.3.4 肝脏已知mi RNAs的鉴定与分析 | 第41页 |
| 3.3.5 mi RNAs转录组测序的差异表达结果 | 第41-43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 高糖高脂饲料对草鱼脂肪代谢关键基因和mi RNAs表达的影响 | 第45-57页 |
| 4.1 引言 | 第45页 |
| 4.2 主要试剂 | 第45-46页 |
| 4.3 方法 | 第46-50页 |
| 4.3.1 制作实验饲料 | 第46页 |
| 4.3.2 饲养与管理 | 第46页 |
| 4.3.3 样品采集与贮存 | 第46页 |
| 4.3.4 提取样品总RNA | 第46页 |
| 4.3.5 第一链cDNA合成 | 第46-47页 |
| 4.3.6 脂代谢相关基因和mi RNAs表达量的检测 | 第47-50页 |
| 4.3.7 数据统计与分析 | 第50页 |
| 4.4 结果与分析 | 第50-54页 |
| 4.4.1 标准曲线 | 第50-53页 |
| 4.4.2 高糖高脂饲料对草鱼脂肪代谢相关基因表达的影响 | 第53页 |
| 4.4.3 高糖高脂饲料对草鱼mi RNAs表达的影响 | 第53-54页 |
| 4.5 讨论 | 第54-57页 |
| 第五章 草鱼SREBP-1 基因的克隆和miRNA在其 3'UTR区作用靶位点的预测 | 第57-73页 |
| 5.1 引言 | 第57页 |
| 5.2 材料 | 第57-58页 |
| 5.2.1 实验用鱼 | 第57页 |
| 5.2.2 主要试剂 | 第57-58页 |
| 5.2.3 试剂配制 | 第58页 |
| 5.2.4 主要仪器 | 第58页 |
| 5.3 方法 | 第58-63页 |
| 5.3.1 肝脏总RNA提取 | 第58页 |
| 5.3.2 第一链cDNA合成 | 第58页 |
| 5.3.3 SREBP-1 cDNA中间片段的合成 | 第58-61页 |
| 5.3.4 SREBP-1 cDNA 3'端基因克隆 | 第61-62页 |
| 5.3.5 序列分析 | 第62页 |
| 5.3.6 草鱼SREBP-1 组织表达分析 | 第62-63页 |
| 5.3.7 预测草鱼SREBP-13'UTR区的miRNA作用靶位点 | 第63页 |
| 5.4 结果 | 第63-70页 |
| 5.4.1 草鱼SREBP-1 核苷酸序列分析和氨基酸序列的一级结构 | 第63-67页 |
| 5.4.2 bHLH-zip结构域的二级结构及理化性质分析 | 第67-68页 |
| 5.4.3 氨基酸序列的系统进化树分析 | 第68-69页 |
| 5.4.4 草鱼SREBP-1 基因组织表达分析 | 第69-70页 |
| 5.4.5 SREBP-13'UTR区miRNA作用靶位点的预测 | 第70页 |
| 5.5 讨论 | 第70-73页 |
| 第六章 SREBP-1 基因 3'UTR双荧光素酶报告载体的构建 | 第73-81页 |
| 6.1 引言 | 第73页 |
| 6.2 材料 | 第73-74页 |
| 6.2.1 实验鱼 | 第73页 |
| 6.2.2 主要试剂 | 第73-74页 |
| 6.2.3 主要仪器 | 第74页 |
| 6.3 方法 | 第74-76页 |
| 6.3.1 肝脏总RNA提取 | 第74页 |
| 6.3.2 靶基因SREBP-13'UTR的扩增 | 第74页 |
| 6.3.3 靶基因SREBP-13'UTR荧光素酶报告基因载体的构建 | 第74-75页 |
| 6.3.4 miR-33 mimics的合成 | 第75页 |
| 6.3.5 双荧光素酶表达载体和mi R-33 mimics共转染细胞系验证候选靶基因 | 第75-76页 |
| 6.4 结果与分析 | 第76-79页 |
| 6.4.1 靶基因SREBP-13'UTR的扩增结果 | 第76-77页 |
| 6.4.2 靶基因SREBP-13'UTR荧光素酶报告基因载体的构建 | 第77-78页 |
| 6.4.3 双荧光素酶表达载体转染C2C12细胞验证候选靶基因 | 第78-79页 |
| 6.5 讨论 | 第79-81页 |
| 总结与展望 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-97页 |
| 致谢 | 第97-99页 |
| 攻读学位期间学术业绩 | 第99-101页 |
