| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-22页 |
| 1.1 羟基脂肪酸简介 | 第13-15页 |
| 1.1.1 羟基脂肪酸的结构与性质 | 第13页 |
| 1.1.2 羟基脂肪酸的分类与功能 | 第13-14页 |
| 1.1.3 羟基脂肪酸的来源 | 第14-15页 |
| 1.2 微生物法合成羟基脂肪酸 | 第15-16页 |
| 1.2.1 羟基脂肪酸合成关键酶分类 | 第15-16页 |
| 1.2.2 脂肪酸羟基化反应的作用机制 | 第16页 |
| 1.3 利用模式生物大肠杆菌合成羟基脂肪酸的研究 | 第16-21页 |
| 1.3.1 大肠杆菌脂肪酸的从头合成 | 第16-19页 |
| 1.3.2 利用大肠杆菌合成羟基脂肪酸的研究进展 | 第19-21页 |
| 1.4 研究意义与内容 | 第21-22页 |
| 第二章 通过筛选和表达特异硫脂酶基因合成中链脂肪酸 | 第22-36页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 实验仪器和材料 | 第22-25页 |
| 2.2.1 仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.2.2 基因、质粒及菌株 | 第23-24页 |
| 2.2.3 酶、试剂盒以及化学药品 | 第24页 |
| 2.2.4 培养基和溶液 | 第24页 |
| 2.2.5 引物序列 | 第24-25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-28页 |
| 2.3.1 硫脂酶蛋白结构的分析 | 第25页 |
| 2.3.2 重组载体的构建 | 第25-27页 |
| 2.3.3 重组菌株的构建 | 第27页 |
| 2.3.4 重组菌株的发酵培养 | 第27页 |
| 2.3.5 产物处理和检测 | 第27-28页 |
| 2.4 结果与分析 | 第28-34页 |
| 2.4.1 硫脂酶蛋白结构的分析 | 第28-30页 |
| 2.4.2 重组菌株脂肪酸分析 | 第30-34页 |
| 2.5 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 直接利用葡萄糖来合成中链羟基脂肪酸 | 第36-49页 |
| 3.1 引言 | 第36页 |
| 3.2 实验材料 | 第36-38页 |
| 3.2.1 基因、质粒及菌株 | 第36-37页 |
| 3.2.2 试剂与耗材 | 第37页 |
| 3.2.3 培养基和溶液 | 第37-38页 |
| 3.2.4 引物序列 | 第38页 |
| 3.3 实验方法 | 第38-41页 |
| 3.3.1 重组载体的构建 | 第38-39页 |
| 3.3.2 重组菌株的构建 | 第39页 |
| 3.3.3 western blot检测重组菌株蛋白的表达 | 第39-40页 |
| 3.3.4 重组菌株的发酵培养 | 第40页 |
| 3.3.5 产物处理和检测 | 第40-41页 |
| 3.4 结果与分析 | 第41-48页 |
| 3.4.1 重组菌株蛋白表达的检测 | 第41页 |
| 3.4.2 重组菌株中羟基脂肪酸含量和种类的分析 | 第41-48页 |
| 3.5 讨论 | 第48-49页 |
| 第四章 基于代谢工程提高中链羟基脂肪酸产量 | 第49-59页 |
| 4.1 引言 | 第49页 |
| 4.2 实验材料 | 第49-51页 |
| 4.2.1 基因、质粒及菌株 | 第49-50页 |
| 4.2.2 引物序列 | 第50-51页 |
| 4.3 实验方法 | 第51-54页 |
| 4.3.1 共表达脂肪酸转录调控因子 | 第51-53页 |
| 4.3.2 选用低拷贝数载体和使用fadD缺陷菌株 | 第53页 |
| 4.3.3 甘油浓度梯度实验 | 第53-54页 |
| 4.4 结果与分析 | 第54-57页 |
| 4.4.1 共表达脂肪酸转录调控因子提高羟基脂肪酸产量 | 第54-55页 |
| 4.4.2 选用低拷贝数载体和fadD缺陷菌株进一步提高HFAs产量 | 第55-56页 |
| 4.4.3 添加不同浓度甘油进一步提高HFAs产量 | 第56-57页 |
| 4.5 讨论 | 第57-59页 |
| 第五章 转录组学分析参与羟基脂肪酸分泌的关键基因 | 第59-69页 |
| 5.1 引言 | 第59页 |
| 5.2 实验材料 | 第59页 |
| 5.3 实验方法 | 第59-63页 |
| 5.3.1 RNA提取与质量检验 | 第59-61页 |
| 5.3.2 cDNA文库的构建及Illumina-Solexa高通量测序 | 第61页 |
| 5.3.3 转录组数据分析 | 第61页 |
| 5.3.4 qRT-PCR验证各基因转录水平 | 第61-63页 |
| 5.4 结果与分析 | 第63-68页 |
| 5.4.1.重组菌株RNA的提取及质量评估 | 第63-64页 |
| 5.4.2 DNA文库的构建及Illumina-Solexa高通量测序 | 第64页 |
| 5.4.3 差异基因的表达分析 | 第64-65页 |
| 5.4.4 差异表达基因GO功能富集分析 | 第65-66页 |
| 5.4.5 转运相关差异基因筛选 | 第66-67页 |
| 5.4.6 qRT-RCR验证上调基因fec操纵子的表达 | 第67-68页 |
| 5.5 讨论 | 第68-69页 |
| 第六章 全文总结 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 作者简介 | 第77页 |
